常晶 王蓓 張敬劍 莫慧敏 倪云峰 郟琴

近年來肺癌的發(fā)病率逐年升高，但是該病早期癥狀不典型，尚無能夠早期診斷的特異性生物標記物[1]。在臨床實踐中，肺癌的常見病理類型是非小細胞肺癌，而其中又以肺腺癌所占比例最高，占原發(fā)性肺癌的40%～50%[2]。Oct4(Octamer binding transcription factor 4)是POU轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一, 位于6號染色體6p21和17B1上，已有研究證實Oct4能夠影響干細胞在體內(nèi)的分化和去分化，同時保持干細胞的自我更新能力[3]。近年來發(fā)現(xiàn)，Oct4在實體腫瘤中呈高表達[4-5]，可能參與腫瘤的增殖、分化、轉(zhuǎn)移等生物學功能[6-8]，Oct4的表達與肺腺癌的預后有關[9]。本課題擬通過檢測、分析Oct4在不同分化程度的肺腺癌組織中的差異化表達，研究肺腺癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Oct4的臨床意義。

資料與方法

一、標本來源

研究對象是2019年1月—2021年1月在我院診斷為肺腺癌且接受手術治療的患者，共計120例，包括男性68例(56.7%)，女性52例(43.3%)，平均年齡64.25±4.23歲。肺腺癌的臨床診斷嚴格依據(jù)2018版《中華醫(yī)學會肺癌臨床診療指南(2018版)》的標準[10]，結合患者的臨床表現(xiàn)、影像學特點、實驗室檢查、病理組織學、免疫組化等醫(yī)學資料綜合診斷。根據(jù)手術切除的肺腺癌組織病理學分型，低分化腺癌30例(25%)，中分化腺癌42例(35%)，高分化腺癌48例(40%)?；颊咴谛g前均未接受化療、放療、靶向治療以及中藥調(diào)理等干預。所有患者均無合并肺部感染性疾病。

二、取材和病理切片的制備

患者接受胸腔鏡手術或者開胸手術治療，在手術過程中，分別切除、留取適量新鮮肺癌組織和癌旁組織，立即予以4%中性甲醛溶液浸泡固定，最終共收集肺腺癌組織標本120例，癌旁組織標本120例。在病理科進一步處理，制備石蠟包塊和切片(厚度4 μm)，完成Oct4免疫組織化學染色，在光學顯微鏡下觀察并拍照。

三、免疫組織化學染色法

參照之前的方法[11]完成肺腺癌組織標本的免疫組織化學染色，其中一抗為兔單克隆Oct4抗體(Abcam，ab92494，美國)，按照1 ∶100稀釋。二抗為小鼠抗兔抗體(Abcam，ab99697，美國)，小鼠IgG代替一抗作為陰性對照。

四、轉(zhuǎn)錄因子Oct4的表達分析

本研究使用免疫組化SP法檢測Oct4在肺腺癌組織中的表達，免疫組化切片由具有中級以上職稱的病理醫(yī)師判讀，Oct4定位于腫瘤細胞漿內(nèi)。在光學顯微鏡下隨機選擇5個腫瘤區(qū)域進行細胞計數(shù)，當所觀察指標定位部位出現(xiàn)棕黃色顆粒判為陽性表達。直接計算陽性細胞數(shù)(或面積)占視野下或整張切片內(nèi)同類細胞數(shù)(或面積)的百分比進行分級[12]。具體判定標準如下：0(陰性)：無著色；+(弱陽性)：視野內(nèi)任何比例的細胞呈現(xiàn)微弱、不完整膜著色；(陽性)：視野內(nèi)>10%的細胞呈現(xiàn)弱至中等強度、完整但不均勻膜棕黃著色；(強陽性)：視野內(nèi)>30%的細胞呈現(xiàn)強、完整膜棕褐著色。

五、統(tǒng)計學方法

采用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用配對t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，Oct4表達與臨床病理因素之間的關系采用Fisher 精確檢驗分析，設P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、轉(zhuǎn)錄因子Oct4在肺腺癌組織中的表達

免疫組織化學檢測結果提示，Oct4在肺腺癌中主要表達在腺癌細胞漿內(nèi)：低分化肺腺癌呈超強陽性()，中分化肺腺癌呈強陽性()、高分化肺腺癌呈陽性()，但是在癌旁組織中幾乎檢測不到Oct4。Oct4在低分化肺腺癌組織中的陽性表達水平高于中分化、高分化肺腺癌。隨機選擇其中的一次檢測結果(見圖1)所示。

圖1 不同肺組織Oct4免疫組織化學染色結果，Oct4蛋白主要表達在細胞漿和細胞核。A：癌旁組織呈陰性表達(-)；B：低分化肺腺癌組織呈超強陽性表達()；C：中分化肺腺癌組織呈強陽性表達()；D：高分化肺腺癌組織呈陽性表達()。放大倍數(shù)100×。

二、轉(zhuǎn)錄因子Oct4的表達與肺腺癌臨床病理因素之間的相關性

Oct4的陽性表達情況在所有患者的年齡、性別、有無吸煙史等一般因素方面無差異(P>0.05)，但是在肺腺癌組織的分化程度、有無淋巴轉(zhuǎn)移等方面有差異(P<0.05)。光鏡下觀察肺腺癌病理組織切片，發(fā)現(xiàn)Oct4的陽性表達率在120例肺腺癌組織中是73.3%(95%CI:65.3%～81.4%)，在合并有淋巴結轉(zhuǎn)移的87例肺腺癌組織中是71.3%(95%CI:63.5%～79.1%)。Oct4的陽性表達率在低分化組肺腺癌組織中是80%(95%CI:71.3%～88.7%)，在中分化組中是71.4%(95%CI:63.6%～79.2%)，在高分化組是68.8%(95%CI:61.3%～76.3%)，由此可見，Oct4的陽性表達率在肺腺癌低分化組織中，高于中分化組織和高分化組織，P<0.05(見表1)。

表1 不同臨床病理因素影響下肺腺癌組織中Oct4的表達情況

討 論

肺癌被認為是人類因癌癥死亡的主要病因，每年造成全球近159萬人死亡，其中有超過50%的患者在確診后已經(jīng)處于中晚期，多數(shù)患者一年內(nèi)死亡[13]。肺癌的危險因素包括長期吸煙，大氣污染，職業(yè)暴露，肺部慢性疾病等。我國的肺癌患者中，男女構成比約為1.34：1，近年來發(fā)現(xiàn)女性肺癌、非吸煙肺癌患者占比，有增加的趨勢，其中腺癌構成比最高，其次是鱗狀細胞癌[14]。肺癌的不良預后主要歸因于在確診時就已經(jīng)出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移，另一個原因是根治性切除術后復發(fā)率太高。由于缺乏能夠早期診斷肺癌的特異性生物分子標志物，迫切需要在這一研究領域有所突破。近年來研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著重要作用[15-18]，其中對Oct4的研究越來越深入，有望成為能夠早期診斷惡性腫瘤的特異性生物標記物之一。

根據(jù)本課題的研究結果，轉(zhuǎn)錄因子Oct4的陽性表達率在肺腺癌的癌旁組織中幾乎呈陰性，而在肺腺癌組織中有高達73.4%的陽性表達率，證實Oct4與肺癌相關，可能是肺腺癌的重要標記物，具有潛在的鑒別診斷價值。通過對研究結果的進一步分析，發(fā)現(xiàn)在87例合并有淋巴結轉(zhuǎn)移的患者肺腺癌組織中，Oct4的陽性表達率高達79.5%，證實Oct4可能與肺腺癌的淋巴轉(zhuǎn)移相關。Oct4的陽性表達率在低分化組、中分化、高分化肺腺癌組織中的表達率分別是80%、71.4%、68.7%，提示Oct4在組織中表達水平的高低與腺癌細胞的分化程度呈負相關。劉天藝等[19]對非小細胞肺癌組織中Oct4的表達做了研究，結果也證實Oct4在肺癌組織中有表達，而且在低分化肺癌組織中的表達水平高于中分化組織和高分化組織，與本研究結果一致。

已有研究證實轉(zhuǎn)錄因子Oct4的表達與腫瘤的大小、分類、組織病理學分化程度之間存在顯著的相關性[20-21]。另有研究證實多種惡性腫瘤的總生存率(OS)和無病生存率(DFS)/無復發(fā)生存期(RFS)/無進展生存期(PFS)與Oct4的過度表達有關[22]。Fu T.Y.等報道[23]在口腔鱗狀細胞癌中，Oct4表達水平越高患者的預后越好。Feng Y.H.等報道[24]，與Oct4中、低表達的膀胱腫瘤相比，高表達Oct4的膀胱腫瘤與病情的進展、遠處轉(zhuǎn)移和生存期縮短直接相關。2019年的一篇meta分析指出，Oct4在肺癌中的過度表達與較差的臨床病理特征和較差的生存結果密切相關[25]。最新的一篇meta分析研究也證實 Oct4的高表達與多種實體惡性腫瘤患者的預后不良存在一定的相關性[26]。上述研究均證實Oct4在惡性腫瘤中的預后中有潛在的預測價值。本研究結果顯示，Oct4在肺腺癌中高表達，而肺腺癌也是實體惡性腫瘤的一種，與該研究結果一致，進一步證實了Oct4與惡性腫瘤的關系。

綜上所述，本研究通過對不同分化程度肺腺癌組織的檢測和分析，證實轉(zhuǎn)錄因子Oct4在肺腺癌組織中呈陽性高表達，與肺腺癌的組織分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移相關。在今后的研究中，需要進一步擴大患者樣本量，深入探索，對本次的研究結果進行論證，揭示Oct4與肺腺癌預后之間的相關性，拓展Oct4在肺腺癌中的臨床意義。