汪 安，朱志祥，程桂林，程 倩，蘇 敏

(池州市質量監(jiān)督檢驗研究院，安徽 池州 247000)

保濟丸由鉤藤、菊花、蒺藜、厚樸、木香、蒼術、天花粉、廣藿香、葛根、化橘紅、白芷、薏苡仁、稻芽、薄荷、茯苓、廣東神曲 16 味中藥材配伍組合而成，具有解表、祛濕、和中的功效，主要用于暑濕感冒引起的發(fā)熱頭痛、腹痛腹瀉、惡心惡吐、腸胃不適等[1-2]，也可以用于暈車暈船等。研究發(fā)現，保濟丸具有抗菌、解熱、止瀉。鎮(zhèn)痛等藥理作用。《中國藥典》2020年版一部收載的保濟丸以厚樸酚、和厚樸酚作為其含量檢測指標[3], 因此我們選定了保濟丸中的厚樸酚、和厚樸酚作為指標性成分，參考《中國藥典》及文獻[4-8]，采用高效液相色譜法測定保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量，以有效控制其內在質量，能夠為保濟丸質量控制提供方法，保障用藥安全。

1 儀器和試藥

1.1 儀 器

Waters E2695型高效液相色譜儀，美國 Waters；XP205電子天平，梅特勒-托利斯儀器上海有限公司；Elma PH180H超聲波清洗器，德國Elma公司。

1.2 藥品與試劑

厚樸酚(批號：110729-200412，純度：100%)，中檢院；和厚樸酚(批號：110730-201112，純度：99.8%)，中檢院；乙腈SIGMA 公司；冰醋酸(分析純)，天津市科密歐化學試劑有限公司；甲醇試劑(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；超純水；0.45 μm微孔濾膜，上海興亞凈化材料廠；保濟丸廠家與批號信息見表1所示。

表1 保濟丸廠家與批號信息

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱： SHIMADZU C18色譜柱(150 mm×4.6 mm， 5 μm)；流動相： 乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4); 流速： 1.0 mL/min; 柱溫： 30 ℃; 檢測波長： 294 nm; 進樣量： 10 μL，以進行保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚含量的檢測分析。

2.2 對照品溶液的制備

精確稱量厚樸酚、和厚樸酚對照品13.70 mg、12.72 mg，放置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用 0. 45 μm 的微孔濾膜進行過濾，得到濃度為 0.1370 mg/mL 和0.1272 mg/mL的對照品溶液。在該色譜條件下，對照品峰型良好，見圖1所示。

2.3 供試品溶液的制備

保濟丸，稱定重量，研細，精密稱取1 g，放置于具塞錐形瓶中，用石油醚(30～60 ℃)作溶劑，超聲處理2次(100 mL、 50 mL)，每次30 min。提取液濾過，濾液合并，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。在該色譜條件下，樣品分離度較好，見圖1所示。

圖1 厚樸酚(A)、和厚樸酚(B)和樣品

2.4 線性關系試驗

分別精密量取“2.2”項下厚樸酚、和厚樸酚對照品貯備液2、4、10、12、16、20 mL分別置于100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，配制成濃度依次遞增的對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進行分析，測定對照品的峰面積，記錄色譜圖，以峰面積積分值為縱坐標，對照品濃度為橫坐標繪制線性方程，計算得線性方程：以峰面積(Y)對溶液濃度(X)進行線性回歸分析。得厚樸酚、和厚樸酚回歸方程分別為：y=19025x+488912(r=0.9993)、y=2254.1x-6418(r=0.9992)。結果表明厚樸酚、和厚樸酚在27.4～274μg·mL-1、25.44～254.4 μg·mL-1內線性關系良好。實驗結果證明對照品峰面積與濃度有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取“2.2”項下制得的對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果厚樸酚、和厚樸酚的RSD分別為1.25%、1.36%，結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取“2.3”項下供試品溶液，分別于放置0、2、4、8、10、12、24 h后，注入高效液相色譜儀按“2.1”項下的色譜條件進行測定，記錄峰面積。測定結果顯示厚樸酚、和厚樸酚色譜峰平均峰面積分別為1912787.204和2044268.887，RSD分別為 1.24%、1.03%，表明供試品溶液在 24 h 內基本穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取同一批號藥材，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，平行6份，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，記錄峰面積并計算厚樸酚、和厚樸酚含量及平均值。結果厚樸酚、和厚樸酚的平均含量分別為0.7 mg/g、0.5 mg/g，RSD分別為0.3%、0.4%，結果表明本法的重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的供試品(厚樸酚含量：0.73 mg/g，和厚樸酚含量：0.56 mg/g)6份，樣品按“2.3”項下操作制備供試品溶液，分別加入一定量的厚樸酚、和厚樸酚對照品溶液，均勻混合，按“2.1”項下的色譜條件進樣并測定含量，計算回收率，結果表明厚樸酚、和厚樸酚的平均回收率為97.5%、96.6%，RSD為0.53%和0.77%，如表2、表3所示。表明該方法加樣回收率結果良好。

表2 厚樸酚加樣回收率試驗數據

表3 和厚樸酚加樣回收率試驗數據

2.9 樣品含量測定

照“2.3”項制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液 10 μL，在“2.1”項下色譜條件下進樣分析，測定峰面積，根據回歸方程計算樣品中厚樸酚、和厚樸酚含量，見表4。結果表明廣州省羅浮山白鶴制藥廠(2112005)生產的保濟丸中厚樸酚含量較高而廣州王老吉藥業(yè)(2110012)生產的保濟丸中和厚樸酚含量較高。

表4 樣品含量測定結果(n=3)

3 討 論

(1)檢測波長得選擇。參考《中國藥典》2020版一部保濟丸項下規(guī)定，檢測波長294 nm，并根據文獻選擇了278 nm和 225 nm兩種波長進行比較，利用二極管陣列檢測器，預實驗發(fā)現厚樸酚、和厚樸酚在294 nm處有最大吸收，在上述色譜條件下，在294 nm處所得的HPLC圖譜峰型較好，有利于分析。故在后續(xù)實驗中選擇294 nm作為檢測波長。

(2)流動相的選擇。參考《中國藥典》2020版一部保濟丸項下選擇乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動相，并同時采用了了水-乙腈梯度洗脫以及甲醇-水(78∶22)兩種方法的流動相，預實驗結果顯示乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動相響應值良好，峰形佳，理論板數和分離度、基線等均符合要求，且效果優(yōu)于水-乙腈梯度洗脫以及甲醇-水(78∶22)這兩種流動相，故在實驗中選擇了乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動相。

(3)提取方法的選擇。在預實驗中采取了加熱回流提取和超聲提取兩種提取方法對保濟丸進行提取，結果表明超聲提取和加熱回流提取兩種方式效率相當，根據實驗操作效率以及安全簡便的原則，故在后續(xù)實驗中選擇了超聲提取作為保濟丸的提取方法。

4 結 論

通過上述實驗方法，選定了市面上3個廠家5個批號的保濟丸作為供試品，對其厚樸酚、和厚樸酚含量進行檢測分析，結果顯示選定的不同廠家及不同批號的保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚含量范圍分別為0.3～1.7 mg、0.2～0.6 mg，含量差異較大，部分批號的保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚含量較低。造成保濟丸含量差異較大的原因可能與各個廠家具有不同的生產工藝流程，且不同批號間的藥材來源與質量等方面存在差異。由此可見，加強對市面上保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量檢測，有利于保障保濟丸的產品質量控制，確保其發(fā)揮更好的藥效作用。

保濟丸的藥品標準收載于中國藥典2020版一部，但保濟丸中所含藥材成分較多，現行質量標準含量測定規(guī)定較少，缺乏專屬性。目前，提高保濟丸的質量標準，增加專屬性成分的檢測，是控制其質量的有效途徑。另外，中成藥質量的源頭，原料藥材質量的控制更需有關部門進行嚴格把關，生產企業(yè)用質量合格的原料藥材，嚴格按標準投料和生產，更是保證藥品質量的關鍵。本實驗采用高效液相法，通過乙腈-水-冰醋酸(60∶40∶4)作為流動相，檢測保濟丸中厚樸酚、和厚樸酚的含量，該方法線性良好，精密度、準確度、穩(wěn)定性及回收率均符合要求，可作為保濟丸中質量控制指標之一。