陳毓芳

(龍巖市市場監(jiān)管綜合執(zhí)法支隊(duì),福建 龍巖 364000)

精制銀翹解毒片含撲熱息痛、薄荷腦、桔梗、荊芥穗、牛蒡子等十味藥,主要功效為疏風(fēng)散熱、解表退燒,常用來治療風(fēng)熱感冒,癥見發(fā)燒,頭痛,口舌生瘡等[1-2]。薄荷腦為該制劑的主要活性成分,其藥理作用包括止痛、止癢、抗炎、清涼、防腐等。精制銀翹解毒片的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第三冊WS3-B-0660-91[3],該執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)未檢測薄荷腦的含量。為了提高該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),保障該藥品質(zhì)量安全,本文通過實(shí)驗(yàn)確立了用GC檢測精制銀翹解毒片中薄荷腦的含量。該方法操作簡單,柱效高、靈敏度高,準(zhǔn)確度好,精密度高,分析快速、重現(xiàn)性好,可有效用于檢測精制銀翹解毒片中薄荷腦的含量,以提高該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

儀器為島津GC-2010Plus氣相色譜儀。

試劑薄荷腦對照品購自中國食品藥品檢定研究院(批號:110728—201907,含量/限量測定用)[4],無水乙醇為西隴科學(xué)股份有限公司,優(yōu)級純,含量大于99.8%,精制銀翹解毒片(市售,批號:20201115)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜條件見表1。

表1 色譜條件

2.2 供試品溶液的制備

取精制銀翹解毒片10片,除去糖衣,精密稱重為5.0988g,平均片重為0.5099g,研細(xì),精密稱取1#1.0568g,2#1.0535g,分別置于具塞錐形瓶中,精密加入無水乙醇25mL,稱定重量為1#88.3681g,2#86.3764g,密塞,超聲處理(功率300W、頻率42kHZ)30分鐘,放冷,再稱定重量,用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量,濾過,取續(xù)濾液,即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取薄荷腦對照品1#0.01068g,2#0.01085g,分別置于100mL容量瓶中,加無水乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻;再分別精密吸取2mL,分別置于10mL容量瓶中,加無水乙醇定容至刻度,搖勻,即得。

2.4 樣品的測定

分別精密吸取供試品溶液1μL、對照品溶液1μL,注入氣相色譜儀,分別連續(xù)進(jìn)樣2次,測定峰面積,按外標(biāo)法計(jì)算薄荷腦的含量,測得樣品每片含薄荷腦0.30mg,每1g樣品含薄荷腦的量為0.588mg。

2.5 線性關(guān)系考察

精密稱取薄荷腦對照品0.05089g,置于100mL容量瓶中,加無水乙醇溶解至刻度,作為對照品儲備液(508.9μg/mL)。分別精密吸取儲備液1、2、5、10、20mL,分別置于50mL容量瓶中,加適量無水乙醇,振搖,使溶解,再加無水乙醇定容至刻度。分別得到S1(濃度為10.178μg/mL)、S2(濃度為20.356μg/mL)、S3(濃度為50.890μg/mL)、S4(濃度為101.78μg/mL)、S5(濃度為203.56μg/mL)及儲備液S6(濃度為508.9μg/mL),作為標(biāo)準(zhǔn)曲線系列,進(jìn)樣量均為1μL。以薄荷腦濃度為橫坐標(biāo),以相對應(yīng)的薄荷腦峰面積為縱坐標(biāo)[5],繪制校準(zhǔn)曲線,得到校準(zhǔn)曲線線性公式:Y=1914.51X-2798.99,r=0.9999。結(jié)果顯示:所測組分薄荷腦的濃度在10.178～508.9μg/mL之間,與峰面積的線性關(guān)系良好。見圖1。

表2 樣品的含量測定計(jì)算表

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制圖

2.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取薄荷腦對照品0.02098g,置于100容量瓶中,加適量無水乙醇,振搖使溶解,再用無水乙醇定容至刻度,搖勻,作為加標(biāo)用標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為209.8μg/mL)。分別精取供試品溶液共6份,分別精密加入上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各5mL,再分別精密加入無水乙醇20mL,操作同供試品溶液制備。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:加標(biāo)回收率在99.02%～100.89%之間,六份回收率RSD為0.80%。

表3 樣品的加標(biāo)回收率計(jì)算表

2.7 精密度試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)曲線系列中S2(20.356μg/mL)溶液,重復(fù)6次進(jìn)樣,薄荷腦的峰面積分別為:39003、39416、39574、39213、39887、40653。計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.5%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取供試品粉末6份,測得薄荷腦的含量分別為:0.298mg/片、0.302mg/片、0.298mg/片、0.300mg/片、0.300mg/片、0.299mg/片,六份數(shù)據(jù)RSD為0.51%。

2.9 穩(wěn)定性考察

取制備好的供試品溶液,12小時內(nèi)每隔2小時測定薄荷腦含量[1],得到7組數(shù)據(jù),薄荷腦的峰面積依次為:48660、48355、48064、47679、46573、47675、46719。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.7%。

2.10 專屬性試驗(yàn)

分別取無水乙醇、薄荷腦對照品溶液,供試品溶液、供試品加標(biāo)溶液各1ul,注入氣相色譜儀,進(jìn)行專屬性實(shí)驗(yàn)。測得結(jié)果如下圖所示:無水乙醇GC圖與薄荷腦對照品GC圖,兩者在薄荷腦峰位置有顯著區(qū)別;供試品溶液GC圖和供試品加標(biāo)溶液GC圖,兩者薄荷腦峰面積有顯著區(qū)別,故本方法專屬性強(qiáng)。見圖2、圖3、圖4、圖5。

圖2 無水乙醇GC圖

圖3 薄荷腦對照品溶液GC圖

圖4 供試品溶液GC圖

圖5 供試品加標(biāo)溶液GC圖

3 討論

筆者在實(shí)驗(yàn)過程中分別嘗試用無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯這三種溶劑作為樣品的提取溶劑,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:上述三種提取溶劑中無水乙醇的提取效率最高,所以最終本方法采用無水乙醇作為提取溶劑。在制備供試品溶液的實(shí)驗(yàn)中,筆者曾分別嘗試超聲處理10分鐘、20分鐘、30分鐘進(jìn)行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲30分鐘提取已接近完全,加標(biāo)回收率接近100%,所以本實(shí)驗(yàn)最終確定超聲提取時間為30分鐘。

本法采用GC檢測精制銀翹解毒片中薄荷腦的含量[3],操作簡便、線性關(guān)系好,準(zhǔn)確度、精密度高,專屬性、穩(wěn)定性強(qiáng),薄荷腦同其他組分的分離度好,可較為準(zhǔn)確測定精制銀翹解毒片中薄荷腦的含量[6]。

薄荷腦是精制銀翹解毒片中清熱解表作用的主要活性成分,所以檢測精制銀翹解毒片中薄荷腦的含量具有重要意義[3]。建議在精制銀翹解毒片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中,增加氣相色譜法檢測精制銀翹解毒片中薄荷腦的含量[3],以提高藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),保障該藥品質(zhì)量安全。