農(nóng)愛紅 趙聰 陸春禮 李雪珍 黃百花

（百色市動物疫病預(yù)防控制中心, 廣西 百色 533000）

開展疫病凈化是提高種雞生產(chǎn)性能的關(guān)鍵, 為掌握某種雞場主要疫病流行狀況, 為制定種雞疫病凈化政策提供科學(xué)依據(jù), 對百色市某種雞場開展禽白血病、雞白痢、高致病性禽流感、雞新城疫等主要疫病病原和血清學(xué)調(diào)查。

禽白血?。ˋvian leukosis, AL）是一種免疫抑制病, 是由反轉(zhuǎn)錄病毒科的禽白血病病毒（Avianleukosis virus, ALV） 引起的禽類腫瘤性疾病之一, 本病主要為垂直傳播, 病毒型間交叉免疫力很低, 雛雞免疫耐受, 對疫苗不產(chǎn)生免疫應(yīng)答, 常常以亞臨床感染的形式感染雞群, 導(dǎo)致雞生長遲緩、繼發(fā)細(xì)菌感染或干擾新城疫、禽流感等疫苗的免疫效果。目前對本病的控制尚無切實(shí)可行的方法, 開展種群凈化, 減少種雞群的感染率和建立無禽白血病的種雞群是控制本病最有效措施。雞白痢 （Plorum disease, PD） 是由雞白痢沙門氏菌所引起的一種常見的傳染病, 是危害養(yǎng)雞業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一, 本病可通過雞蛋垂直傳播, 也可接觸傳染, 排泄物是重要的傳播媒介, 消化道感染是主要傳染方式。張永第的研究顯示, 母雞感染了雞白痢后, 嚴(yán)重影響種蛋的孵化率及雛雞的成活率。高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza, HPAI）與 新 城 疫 疫（Newcastle disease, ND）被農(nóng)業(yè)農(nóng)村部定為一類動物疫病, 為烈性傳染性疾病, 對養(yǎng)禽業(yè)的威脅十分巨大。

動物疫病凈化是實(shí)現(xiàn)疫病消滅與根除的重要措施。通過監(jiān)測、檢驗(yàn)檢疫、隔離、撲殺等一系列綜合措施, 在特定區(qū)域或場所消滅和清除病原, 從而達(dá)到在該范圍內(nèi)動物個體不發(fā)病和無感染的狀態(tài)?！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》HPAI、ND、AL和沙門氏菌列為種禽場優(yōu)先防治的疫病, 規(guī)劃明確引導(dǎo)和支持種畜禽企業(yè)開展疫病凈化, 并設(shè)定了疫病凈化考核標(biāo)準(zhǔn)。為此對百色市某種雞場上述4種疫病進(jìn)行檢測, 目的是為了充分了解該種雞場主要疫病的感染情況, 為種雞場疫病防控及凈化措施制定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

采樣雞群為百色市某種雞場, 該雞場現(xiàn)存欄公雞0.3萬只、母雞14萬只。在雞群中隨機(jī)抽取50只公雞和160只母雞, 采集血清及泄殖腔棉拭子樣品各210份, 用于抗體檢測及病原學(xué)檢測；另外再隨機(jī)采集種用母雞新鮮雞蛋蛋清樣品200份、泄殖腔棉拭子60份, 用于檢測禽白血病P27（ALV-P27）抗原。 采樣雞群已按既定免疫程序進(jìn)行免疫, 主要的免疫疫苗有重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活疫苗（H5N1 Re-11株+Re-12株, H7N9 H7 Re-2株）、新城疫活疫苗, 未免疫禽白血病及沙門氏菌疫苗。

禽流感H5N1（Re-11/Re-12）和H7N9（H7 Re-2）抗體檢測試劑、陽性血清；新城疫抗體檢測試劑、陽性血清；雞白痢、雞傷寒多價染色平板凝集試驗(yàn)抗原、陽性對照血清以及禽白血病P27抗原檢測試劑盒均購自哈爾濱國生生物科技股份有限公司；禽白血病A/B亞群和J亞群抗體檢測試劑盒購自禾旭（鄭州）生物技術(shù)有限公司；禽流感熒光PCR檢測試劑盒及新城疫PCR檢測試劑盒均購自深圳澳東檢驗(yàn)檢測科技有限公司。

實(shí)時熒光定量PCR儀（LightCycler 96）由羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司生產(chǎn)；酶標(biāo)儀（LabServ K3）由賽默飛世爾（上海）儀器有限公司生產(chǎn)；生化培養(yǎng)箱（BJPX-250）由山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司生產(chǎn)；移液器（單道、多道）由艾本德（上海）國際貿(mào)易有限公司生產(chǎn)。

HPAI及ND免疫抗體檢測按照國標(biāo)GB/T 18936-2020 高致病性禽流感診斷技術(shù)與GB/T 16550-2020新城疫診斷技術(shù)進(jìn)行檢測；SP/SG抗體采用雞白痢、雞傷寒多價染色平板凝集試驗(yàn)抗原進(jìn)行檢測；ALV-A/B和ALV-J抗體檢測采用禽白血病病毒抗體ELISA檢測試劑盒進(jìn)行檢測；ALV-P27抗原檢測采用禽白血病抗原ELISA檢測試劑盒進(jìn)行檢測；HPAI及ND病毒病原學(xué)檢測按PCR試劑盒說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 種雞群HPAI及ND免疫抗體檢測

種雞群HPAI及ND免疫抗體檢測結(jié)果見表1。從檢測結(jié)果來看, 雞群的HPAI及ND的免疫抗體效價較高, HPAI（H5N1 Re-11）抗體合格率為97.14%, HPAI（H5N1 Re-12）抗體合格率為99.05%, HPAI（H7N9 H7-Re2）抗體合格率為93.33%, ND抗體合格率為99.52%。其中公雞HPAI N5N1及ND免疫抗體效價比母雞高, 但相差不大；值得注意的是公雞HPAI H7N9免疫抗體合格率為82%, 遠(yuǎn)低于母雞96.88%的抗體合格率。雞群整體HPAI H7N9免疫抗體合格率雖然比較高, 但是抗體效價平均值比較低, 抗體的離散度較大。表明雞群HPAI及ND的抗體效價范圍較大, 整齊度較差, 對HPAI及ND的感染有一定的風(fēng)險, 應(yīng)對免疫抗體不達(dá)標(biāo)者及時補(bǔ)免。

表1 種雞群HPAI及ND免疫抗體檢測結(jié)果

2.2 種雞群SP/SG、ALV-A/B和ALV-J抗體檢測

種雞群SP/SG及ALV-A/B和ALV-J抗體檢測結(jié)果見表2。由于沒有免疫禽白血病及沙門氏菌疫苗, 抗體檢測的結(jié)果基本可以代表種雞群2種疫病的感染情況。從檢測結(jié)果來看, 種雞群整體SP/SG抗體陽性為23.81%, ALV-A/B抗體陽性率為5.24%, ALV-J抗體陽性率為2.38%。其中公雞SP/SG抗體陽性率為38%, 母雞SP/SG抗體陽性率為19.38%, 公雞SP/SG抗體陽性率明顯比母雞高。禽白血病檢測結(jié)果是公雞ALV-A/B抗體陽性率為2%, 母雞ALV-A/B抗體陽性率為6.25%；公雞ALV-J抗體陽性率為0%, 母雞為3.13%, 表明母雞禽白血病陽性率明顯比公雞高。

表2 種雞群SP/SG及ALV-A/B和ALV-J抗體檢測結(jié)果

2.3 種雞群HPAI、ND病原學(xué)檢測

種雞群HPAI、ND病原學(xué)檢測結(jié)果（熒光PCR）如表3所示, 均為陰性。

表3 種雞群HPAI、ND病原學(xué)檢測結(jié)果

2.4 ALV-P27抗原檢測

ALV-P27抗原檢測結(jié)果如表4所示。共檢測雞蛋蛋清及泄殖腔棉拭子樣品260份, ALV-P27抗原陽性率為3.85%；其中用雞蛋蛋清檢測ALV-P27抗原陽性率為5%；泄殖腔棉拭子檢測ALV-P27抗原陽性率為0%。

表4 ALV-P27抗原檢測結(jié)果

3 討論

本次監(jiān)測結(jié)果顯示, 該種雞場HPAI及ND病原學(xué)檢測均為陰性；同時, HPAI及ND免疫抗體合格率均達(dá)到93%以上, 抗體合格率遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定70%以上合格率的標(biāo)準(zhǔn)。但是檢測結(jié)果顯示有部分種禽個體的HPAI免疫抗體效價為0, 且雞群HPAI及ND的抗體效價范圍較大, 整齊度較差；HPAI H7N9免疫抗體合格率雖然比較高, 但是抗體效價平均值比較低；公雞HPAI H7N9免疫抗體合格率為82%, 遠(yuǎn)低于母雞96.88%的抗體合格率。針對檢測中所發(fā)現(xiàn)的問題, 建議該種雞場今后仍需定時進(jìn)行抗體效價檢測, 如發(fā)現(xiàn)抗體效價水平較低時應(yīng)進(jìn)行加強(qiáng)免疫, 同時應(yīng)定時進(jìn)行病原學(xué)檢測, 淘汰帶毒雞或雞群, 保證雞群高致病性禽流感及新城疫的免疫無毒無疫狀態(tài)。

從沙門氏菌檢測結(jié)果來看, 該種雞場SP/SG感染比較嚴(yán)重, 抗體陽性率達(dá)23.81%（表2）。其中公雞的SP/SG抗體陽性率為38%, 母雞的SP/SG抗體陽性率為19.38%, 說明種雞群沙門氏菌感染比較嚴(yán)重。由于雞白痢無疫苗進(jìn)行防治, 使用藥物預(yù)防又容易引起耐藥, 因此采取凈化是最好的防控手段, 需加強(qiáng)采樣監(jiān)測, 淘汰陽性家禽, 尤其是種公雞。通過持續(xù)采取檢測、淘汰措施, 最終達(dá)到對該病的凈化。廣西某農(nóng)牧集團(tuán)制定了行之有效的雞白痢控制方案, 持續(xù)開展雞白痢控制與凈化工作, 2020年雞白痢抗體陽性率控制在0.32%, 取得很好的凈化效果, 其經(jīng)驗(yàn)值得借鑒。

禽白血病血清學(xué)檢測結(jié)果如表2所示, 約5%的種雞受到ALV的感染, 其中ALV-A/B抗體陽性率為5.24%, ALV-J抗體陽性率為2.38%, ALV-A/ B感染比ALV-J嚴(yán)重。本次檢測結(jié)果還顯示, 母雞的AL感染率比公雞高, 這與劉梅的調(diào)查結(jié)果相同, 可能與母雞對AL病原比較易感有關(guān)。本次監(jiān)測還采集了不同的樣本進(jìn)行ALV-P27抗原檢測, 檢測結(jié)果如表4所示, 結(jié)果顯示雞群ALV-P27抗原陽性率為3.85%, 其中檢測雞蛋蛋清200份, 陽性率5%, 泄殖腔棉拭子未檢出陽性, 可能與檢測數(shù)量過少、采集與保存方式等有關(guān)。陳俊霞等的研究數(shù)據(jù)也表明, 不同類型雞的泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原檢測法不僅有很高的假陽性率, 還有一定比例的漏檢率。因此, 在種雞場的ALV凈化過程中不建議以泄殖腔棉拭子作為檢測材料。禽白血病的凈化艱難且復(fù)雜, 胡杰等從2013—2020年在廣西11個重點(diǎn)種雞場按照檢測-淘汰-分群-再檢測-再淘汰的原則凈化AL, 總平均陽性率從2013年的12.16%, 下降到2020年的0.30%, 證明了其凈化方法和思路的可行性, 值得在百色市種雞場進(jìn)行推廣。

疫病凈化需長期堅(jiān)持, 要投入大量的人力物力及資金。張銳等研究發(fā)現(xiàn), 養(yǎng)雞場實(shí)施疫病凈化第一年凈收益有明顯提高, 但第二年開始凈收益增幅放緩, 直至五年以上才開始反彈。因此需要政府及動物防疫部門給予強(qiáng)力的支持, 尋求新的動物疫病凈化監(jiān)測新模式, 讓養(yǎng)殖企業(yè)有信心、有動力把動物疫病凈化工作堅(jiān)持下去。除了引導(dǎo)和支持種畜禽企業(yè)開展疫病凈化, 建立無疫企業(yè)認(rèn)證制度, 建立市場準(zhǔn)入和信息發(fā)布制度, 定期發(fā)布無疫企業(yè)信息, 還應(yīng)該在動物疫病凈化信息公開、企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量安全信息透明等問題上, 幫助養(yǎng)殖企業(yè)建立產(chǎn)品高質(zhì)量安全的品牌形象。本次調(diào)研結(jié)果說明該種雞場主要疫病防控效果較好, 除SP/SG、AL感染外, 其他疫病得到有效控制。要進(jìn)一步控制和消滅SP/SG、AL就需采取凈化措施, 一是把好引種關(guān), 從凈化好的祖代場引入雞種, 減少或杜絕病原菌通過種雞傳播；二是切實(shí)加強(qiáng)種雞場的消毒劑環(huán)境監(jiān)測工作；三是加強(qiáng)雛雞飼料管理；四是做好免疫接種, 制定科學(xué)規(guī)范的免疫程序；五是加強(qiáng)種雞場的凈化檢測。