1. 周圍神經(jīng)損傷 (PNI) 后疼痛超敏反應的緩解需要CD11c+脊髓小膠質(zhì)細胞的參與

神經(jīng)系統(tǒng)的損害會引起軀體感覺神經(jīng)元細胞和非神經(jīng)元細胞特別是小膠質(zhì)細胞功能的改變，從而導致神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生和發(fā)展。在周圍神經(jīng)損傷（PNI，一種神經(jīng)病理性疼痛模型）后，脊髓背角 (SDH)的小膠質(zhì)細胞會迅速作出反應，如形態(tài)、細胞數(shù)量和基因表達水平等發(fā)生改變，這些變化都是疼痛發(fā)展所必需的過程；然而，小膠質(zhì)細胞具有高度可塑性，不同基因表達顯現(xiàn)出不同的功能及形態(tài)上的差異，并且小膠質(zhì)細胞群在神經(jīng)元發(fā)育和疾病發(fā)展過程中同樣會發(fā)生相應變化。

由于大腦中表達CD11c（也稱為整合素αX,ITGAX）的小膠質(zhì)細胞在幾種神經(jīng)疾病模型中都有增加；因此，該研究重點關注了CD11c

小膠質(zhì)細胞在PNI后參與神經(jīng)病理性疼痛緩解與復發(fā)的過程。通過使用Itgax-Venus 小鼠（其CD11c

細胞表達Venus 熒光蛋白），發(fā)現(xiàn)SDH 中的Venus

細胞在正常小鼠和假手術小鼠中很少被觀察到，但在PNI 后明顯增加。Venus 的表達局限于IBA1

和CD11b

、嘌呤能受體P2Y12R

、Hexb

小鼠tdTomato

(tdT

)細胞，這使得小膠質(zhì)細胞的可視化成為可能。在部分tdT

和P2Y12R

小膠質(zhì)細胞中觀察到了Venus

細胞；此外，來自骨髓嵌合體小鼠和脾切除小鼠的數(shù)據(jù)排除了外周衍生細胞參與形成Venus

細胞；所以，該研究將SDH 中的Venus

細胞稱為CD11c

小膠質(zhì)細胞。為探究CD11c

小膠質(zhì)細胞在神經(jīng)病理性疼痛不同階段的變化情況，研究者通過流式細胞術發(fā)現(xiàn)CD11c

小膠質(zhì)細胞在 PNI 造模后第14 天達到峰值，CD11c 不表達 (CD11c

) 的小膠質(zhì)細胞在PNI 后的第7 天達到峰值。此外，CD11c 高表達 (CD11c

) 的小膠質(zhì)細胞在PNI 后第35 天達到峰值；這時，機械刺激縮足反射閾值 (MWT) 已恢復到基線。因此，在PNI 誘導的痛覺超敏反應中，CD11c

小膠質(zhì)細胞出現(xiàn)在SDH 中，即使在疼痛緩解后仍然存在。

為進一步探究CD11c

小膠質(zhì)細胞的作用，研究者使用

-DTR-EGFP 小鼠（CD11c

細胞表達白喉毒素受體DTRs 和增強型綠色熒光蛋白 EGFP），鞘內(nèi)注射白喉毒素 (DTX) 耗盡CD11c

小膠質(zhì)細胞，然后進行疼痛行為測試，發(fā)現(xiàn)CD11c

小膠質(zhì)細胞剔除的小鼠未能從痛覺超敏反應中自發(fā)恢復。相反，PBS 處理的

-DTR-EGFP 小鼠和DTX 處理的野生型 (WT) 小鼠（未刪除CD11c

細胞），在造模后，其MWT 顯著降低，14 天后又逐漸恢復。因此，認為CD11c

小膠質(zhì)細胞在緩解神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮了作用。

第三，園區(qū)雖然設置了大量的攝像頭，可是動物園管理人員是否經(jīng)常查看錄像？假設動物園安排了專人事實的查看監(jiān)控攝像，應當可以更加及時的發(fā)現(xiàn)險情并安排施救方案等緊急應對方案。但實際情況表明，動物園方并未在第一時間發(fā)現(xiàn)老虎襲人的發(fā)生，而是受害者丈夫向巡邏車內(nèi)的工作人員求救后動物園方才發(fā)現(xiàn)并開展救援的。由此可見，動物園方在對于監(jiān)控錄像的監(jiān)管方面存在著漏洞。

2. IGF1 是 CD11c+小膠質(zhì)細胞恢復痛覺超敏所必需的一種細胞因子

該研究對PNI 后的Itgax-Venus 小鼠SDH 中的小膠質(zhì)細胞進行了RNA 測序，發(fā)現(xiàn)CD11c

和CD11c

小膠質(zhì)細胞具有不同的轉(zhuǎn)錄特征。該研究分析了PNI 造模后第35 天SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞的差異表達基因 (DEG)，并重點關注了胰島素樣生長因子1 基因(

)。熒光定量PCR 結(jié)果證實， PNI造模后CD11c

小膠質(zhì)細胞中

mRNA 增加，并在第35 天達到峰值。研究者通過原位雜交檢測到SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞

的 mRNA 表達。為了確定IGF1 的作用，該研究使用Itgax-Cre;

小鼠敲除CD11c

細胞中的IGF1，發(fā)現(xiàn)PNI 后小鼠沒有從痛覺超敏反應中恢復。然后，用他莫昔芬處理Cx3cr1

;

小鼠敲除 CX3CR1

細胞（所有小膠質(zhì)細胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關巨噬細胞的一類細胞群）中的

基因，也獲得了類似的結(jié)果。對PNI 小鼠反復鞘內(nèi)注射IGF1 中和抗體可抑制疼痛緩解，而對PNI 小鼠反復鞘內(nèi)注射重組IGF1 可加速疼痛緩解。在神經(jīng)元中也觀察到IGF1，但敲除SDH 神經(jīng)元中的

并未改變 PNI 誘導的超敏反應。因此，CD11c

小膠質(zhì)細胞的 IGF1 對于神經(jīng)性疼痛的自發(fā)緩解是必要的。

3. AXL 通過吞噬髓鞘碎片參與PNI 誘導的SDH 中CD11chigh 小膠質(zhì)細胞出現(xiàn)

在炎性疼痛模型中，研究者發(fā)現(xiàn)SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞并沒有增加。據(jù)此數(shù)據(jù)推測，CD11c

小膠質(zhì)細胞的出現(xiàn)是 PNI 特有的改變。研究者通過足底注射saporin-CTB（損傷有髓神經(jīng)纖維）發(fā)現(xiàn)SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞增加，而足底注射saporin-IB4（損傷無髓神經(jīng)纖維）CD11c

小膠質(zhì)細胞則沒有變化。以上結(jié)果結(jié)合SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞表達與吞噬作用相關基因的事實，表明PNI 后脊髓CD11c

小膠質(zhì)細胞的出現(xiàn)可能與受損的初級傳入纖維的髓鞘吞噬作用有關。分離PNI 造模后Itgax-Venus 小鼠的脊髓CD11c

小膠質(zhì)細胞進行原代培養(yǎng)，顯示細胞對髓鞘碎片的吞噬增加；在PNI 造模后的SDH 中，溶酶體 (CD68

) 中含有髓鞘堿性蛋白 (MBP) 的CD11c

小膠質(zhì)細胞增加。電鏡結(jié)果顯示PNI 造模后脊髓中CD11c

小膠質(zhì)細胞吞噬了髓鞘顆粒。向正常的Itgax-Venus 小鼠脊髓內(nèi)注射純化的髓鞘碎片，會誘導髓鞘碎片的吞噬并導致CD11c

小膠質(zhì)細胞增加。研究進一步發(fā)現(xiàn)，PNI 造模后脊髓中CD11c

小膠質(zhì)細胞表達

mRNA，AXL 是酪氨酸激酶受體家族TAM (TYRO3,AXL, MERTK)的一員，與髓鞘碎片的吞噬有關。Mertk 而不是Tyro3 的mRNA 也表達，但其水平在CD11c

和 CD11c

小膠質(zhì)細胞之間，PNI 后沒有改變。Itgax-Venus 小鼠PNI 后的免疫熒光顯示AXL 蛋白表達在脊髓CD11c

小膠質(zhì)細胞中。敲除

顯著降低了CD11c

小膠質(zhì)細胞數(shù)量和

的表達，并且抑制了疼痛自發(fā)緩解。通過比較分選的SDH 小膠質(zhì)細胞TAM 受體和

在PNI 后的時間表達模式，發(fā)現(xiàn)

的峰值表達與Itgax 的峰值表達相匹配，并在

mRNA 之前。因此，AXL 可能通過吞噬髓鞘碎片參與PNI 誘導的SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞出現(xiàn)。

4. 剔除 CD11c+小膠質(zhì)細胞會使 PNI 誘導的痛覺超敏復發(fā)

CD11c

小膠質(zhì)細胞在 SDH 中能保留很長一段時間，即使在疼痛超敏反應的行為消失后也依然存在。PNI 術后35 天，小鼠縮足閾值已恢復至基線水平；此時，利用Itgax-DTR-GFP 小鼠剔除CD11c

小膠質(zhì)細胞后，導致痛覺超敏復發(fā)。已有數(shù)據(jù)支持SDH中CD11c

小膠質(zhì)細胞在復發(fā)性疼痛中的作用，該數(shù)據(jù)顯示 DTX 對WT 小鼠的MWT 沒有影響，周圍其他組織CD11c

細胞的缺失同樣沒有影響。類似的，PNI 術后第37、39 天給予他莫昔芬特異性敲除Cx3cr1

;

小鼠小膠質(zhì)細胞中的

，也會引起疼痛超敏復發(fā)。此外，鞘內(nèi)注射中和抗體抗IGF1#1 或IGF1 受體抑制劑JB-1 也導致了超敏反應的再次出現(xiàn)。因此，脊髓中CD11c

小膠質(zhì)細胞介導的IGF1 以持續(xù)的方式抑制了疼痛超敏。另外，PNI 后 SDH 中CD11c

小膠質(zhì)細胞的出現(xiàn)和它們在神經(jīng)病理性疼痛中的作用無性別差異。

什么是糟糕的婚姻？24年來，他們拼命按照自己的標準去改造對方，反抗——強迫接受——更激烈的抗爭——惱羞成怒……沖突不斷后，他們把家當成睡覺的酒店。

5. 討論

該研究表明，CD11c

小膠質(zhì)細胞對于神經(jīng)病理性疼痛的緩解和復發(fā)至關重要。這意味著，盡管小鼠在 PNI 幾周后似乎表現(xiàn)出正常的行為反應，但這并不是由于病理改變的過敏狀態(tài)的正常化，而是由于持續(xù)的疼痛促進和抑制之間的動態(tài)平衡，這種平衡主要涉及CD11c

小膠質(zhì)細胞IGF1 的表達；小膠質(zhì)細胞向這種狀態(tài)的轉(zhuǎn)變部分與AXL 和髓鞘的吞噬作用有關。脊髓 IGF1 對疼痛的抑制作用可能與包括調(diào)節(jié)神經(jīng)元活動，星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞炎癥反應在內(nèi)的多重效應有關。在神經(jīng)疾病模型的小鼠大腦中，CD11c

小膠質(zhì)細胞也顯示增加。因此，該發(fā)現(xiàn)能夠為神經(jīng)病理性疼痛和其他病理癥狀疾病治療策略的制訂提供一條途徑。