錢璽丞，張新卓，馬 瑞，杜曉靜

(銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 國(guó)家民委中獸藥重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，貴州 銅仁 554300)

黨參(CodonopsisRadix)是我國(guó)常見的中草藥，來源為桔?？?Campanulaceae)黨參屬植物黨參(Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.)、素花黨參[C.pilosulaNannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen]或川黨參(C.tangshen Oliv.)的干燥根[1]，其性甘味平、無毒，具有調(diào)養(yǎng)脾胃等功效[2]。黨參分布廣泛，喜光喜溫和涼爽氣候，耐寒抗?jié)?，根部能再土壤中露地越冬，多生長(zhǎng)于山區(qū)，主產(chǎn)于我國(guó)西南、西北、華北、華中、東北等地[3-4]。近年來，對(duì)黨參的研究不斷深入，從黨參中發(fā)現(xiàn)了多糖、皂苷、生物堿等多種有效活性成分。其中，多糖是主要活性成分之一，具有抗腫瘤、抗氧化、增強(qiáng)免疫力、調(diào)節(jié)血糖、改善胰島素抵抗等作用[5]。黨參多糖提取方法有多種，多糖易溶于水，多以水做提取溶劑，采取回流、煎煮、微波、超聲等提取方法。

貴州地域特色明顯，氣候環(huán)境獨(dú)特，生物資源豐富，中藥材種類多樣。貴州省黨參產(chǎn)地主要在畢節(jié)市，區(qū)域內(nèi)野生黨參資源豐富，且廣泛種植。中藥材產(chǎn)業(yè)不斷發(fā)展壯大，農(nóng)民可充分利用林地在適宜的地方發(fā)展中藥材種植。銅仁市地處武陵山區(qū)梵凈山腳下，土壤類型多樣、野生植物豐富。銅仁市獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境和優(yōu)越的氣候條件十分適合中藥材的種植。本文對(duì)畢節(jié)市野生黨參和銅仁市引種栽培畢節(jié)黨參中多糖的含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)多糖提取的影響因素進(jìn)行篩選，分析比較畢節(jié)野生黨參與銅仁引種黨參品質(zhì)，為黨參多糖的微波提取方法提供理論依據(jù)，有利于銅仁市黨參藥材引種及開發(fā)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

畢節(jié)黨參采自畢節(jié)市納雍縣；銅仁引種黨參采自銅仁市碧江區(qū)，兩年生黨參，根切段，60 ℃ 烘干保存。

1.2 儀器與試劑

FCMCR-3C微波反應(yīng)器，鞏義科瑞儀器公司；BSM-220.4電子天平，上海卓精科技公司；FZG-1真空干燥箱，南京干燥設(shè)備公司；DF-101S電熱套，常州普天儀器公司；DF-101S磁力攪拌器，鞏義予華儀器公司；SHB-Ⅲ真空泵，鄭州長(zhǎng)城；紫外-可見分光光度計(jì)，北京普析T6新世紀(jì)；對(duì)照品葡萄糖(批號(hào)S22J12H137237)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%，上海源葉生物科技有限公司；正己烷、苯酚(重蒸餾)、乙醇、硫酸為分析純，水為蒸餾水。

1.3 方法

1.3.1 原料預(yù)處理

畢節(jié)黨參、銅仁黨參干燥的根分別粉碎過篩，用正己烷回流提取 2 h；過濾洗滌干燥后殘?jiān)?0%乙醇回流提取 2 h，過濾。殘?jiān)?0%乙醇洗滌，真空干燥后密封保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

無水葡萄糖于 105 ℃ 干燥至恒重，精密稱取 10.24 mg，加水溶解定容至 100 mL 容量瓶，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液于 10 mL 具塞試管中，用蒸餾水補(bǔ)至 10 mL。同時(shí)取 1.0 mL 蒸餾水置于 10 mL 具塞試管作為空白對(duì)照。分別加入5%苯酚溶液 1.0 mL，快速加入 5.0 mL 硫酸，使反應(yīng)液充分混合，靜置冷卻，490 nm 測(cè)吸光度[6-7]。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.0661X-0.00185(r=0.9995)。如圖1。

圖1 葡萄糖-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.3 黨參多糖含量測(cè)定

供試品溶液的制備，分別準(zhǔn)確稱取1.3.1所述樣品 1.0 g，于 100 mL 二口燒瓶?jī)?nèi)，加 30 mL 水，設(shè)置溫度 70 ℃，微波功率 100 W，于微波反應(yīng)器內(nèi)提取 8 min；過濾提取液，洗滌殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移至 100 mL 容量瓶中加水定容。然后再取 1.0 mL 于 50 mL 容量瓶中定容。重復(fù)2次。吸取 1.0 mL 供試品溶液于 10 mL 具塞試管中，按1.3.2所述操作，測(cè)定吸光度。樣品中多糖含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w計(jì)，按下式計(jì)算：

式中：m1為查得測(cè)定液中含糖量(μg)；V1為定容體積(mL)；V2為移取測(cè)定液的體積(mL)；m2為樣品質(zhì)量(g)；0.9為校正系數(shù)。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

本試驗(yàn)在提取時(shí)間為 8 min、溫度 70 ℃、料液比1∶30 g/mL、功率 500 W 條件下，分別考察提取時(shí)間、微波溫度、料液比、微波功率某單一因素對(duì)黨參多糖提取量的影響，結(jié)果見表1。

表1 單因素試驗(yàn)考察表

2 結(jié)果與分析

2.1 提取時(shí)間對(duì)黨參多糖提取量的影響

多糖得率隨時(shí)間增加先增加后減小，當(dāng)提取時(shí)間為 8 min 時(shí)，多糖提取率達(dá)到最大值，見圖2。可能由于微波時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞的破壞增大，同時(shí)溶液溫度不斷升高，有利于多糖的溶出，8 min 時(shí)多糖擴(kuò)散已達(dá)到平衡，繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)間使得多糖類物質(zhì)在微波下輻射時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致部分多糖類物質(zhì)遭到破壞。因此，確定最佳提取時(shí)間為 8 min。

圖2 提取時(shí)間對(duì)黨參多糖提取量的影響

2.2 微波溫度對(duì)黨參多糖提取量的影響

隨著提取溫度的升高，多糖的提取效率先升高后下降。當(dāng)溫度為 70 ℃ 時(shí)提取多糖得率最高，當(dāng)提取溫度為 80 ℃ 時(shí)多糖的提取率略有下降，如圖3。微波下反應(yīng)體系溫度過高可能導(dǎo)致部分多糖類物質(zhì)遭到破壞。因此，確定最佳提取溫度為 70 ℃。

圖3 提取溫度對(duì)黨參多糖提取量的影響

2.3 料液比對(duì)黨參多糖提取量的影響

由圖4可知，料液比對(duì)黨參多糖得率無明顯影響，可能因?yàn)槎嗵且兹苡谒?，在一定的微波時(shí)間和溫度下，多糖提取較為完全。因此，確定料液比為1∶30 g/mL。

圖4 料液比對(duì)黨參多糖提取量的影響

2.4 微波功率對(duì)黨參多糖提取量的影響

由圖5可知，微波功率對(duì)黨參多糖得率無明顯影響，為節(jié)約能源，將微波功率確定為 100 W。

圖5 微波功率對(duì)黨參多糖提取量的影響

2.5 畢節(jié)市黨參和銅仁市黨參多糖含量測(cè)定

結(jié)果表明,畢節(jié)市野生黨參和銅仁市種植黨參的多糖含量有一定差異，見表2。

表2 畢節(jié)市、銅仁市黨參多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)比較

3 討論

本試驗(yàn)采用微波法輔助提取黨參多糖，考察微波時(shí)間、溫度、料液比、微波功率對(duì)其提取效率的影響，結(jié)果顯示，對(duì)黨參多糖得率影響較大的因素是微波時(shí)間和溫度，料液比和微波功率對(duì)黨參多糖提取率影響不明顯。微波輔助提取黨參多糖的最佳工藝條件是：微波時(shí)間 8 min、溫度 70 ℃、料液比1∶30 g/mL、微波輻射功率 100 W。采用此工藝對(duì)畢節(jié)市野生黨參和銅仁市引種種植黨參多糖含量測(cè)定分析發(fā)現(xiàn)，畢節(jié)市野生黨參多糖含量高達(dá)29.6%，銅仁市種植黨參多糖含量為21.2%，說明種植黨參與野生黨參多糖含量存在一定差異。