張 涵， 鄧憬童， 彭 宇， 韓慶迪， 周獻(xiàn)東， 楊新洲

( 中南民族大學(xué) 藥學(xué)院， 武漢 430074 )

藤黃科(Clusiaceae)金絲桃屬()植物，大約460種，中國(guó)有64種(33特有種)。該屬在中國(guó)分布廣泛，西南部最為豐富，而在新疆最為罕見(jiàn)(Li & Norman, 2007)。金絲桃屬植物在國(guó)內(nèi)外民間具有悠久的藥用歷史，如貫葉金絲桃()具有疏肝解郁、清熱利濕、消腫通乳功效，用于肝氣郁結(jié)、情志不暢、心胸郁悶、關(guān)節(jié)腫痛、乳癰、乳少等方面的治療(中國(guó)藥典委員會(huì)，2020)。該屬化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類型主要包括間苯三酚類、黃酮類、二蒽酮類、三萜類、香豆素類、甾醇類等，并具有廣泛的藥理活性，如具有抗腫瘤作用的間苯三酚類化合物hyperjapones A-B, D(Yang et al., 2016)，具有顯著抑制人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)和人肝癌細(xì)胞(HepG2)活性的氧雜蒽酮類化合物neobractatin(殷慧君，2020)。

纖枝金絲桃()為藤黃科金絲桃屬植物，灌木，高0.4～1.5 m，主產(chǎn)于湖南西部、四川西部、貴州南部、云南中部至西部，生于山谷或山坡路旁、溝邊、灌叢中，海拔1 500～2 700 m(Li & Norman, 2007)。目前，關(guān)于纖枝金絲桃的化學(xué)成分和活性研究報(bào)道甚少，基于已從金絲桃屬其他植物中分離得到特異性分布于該屬植物的骨架新穎、活性廣泛的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類成分(polycyclic polyprenylated acylphloroglucinols, PPAPs)，及植物中的次生代謝產(chǎn)物具有一定種屬特異性，為了闡明該植物的物質(zhì)基礎(chǔ)和獲得PPAPs類活性化合物，我們對(duì)云南產(chǎn)的纖枝金絲桃地上部分進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從該植物的80%乙醇浸提物中分離得到15個(gè)化合物(圖1)，分別鑒定為attenuatumione G ()、uralodin B ()、chipericumin C ()、2,5-二羥基-1-甲氧基氧雜蒽酮 ()、1,7-二羥基氧雜蒽酮 ()、1,7-二羥基-4-甲氧基氧雜蒽酮 ()、槲皮苷 ()、芹菜素-7---D-葡萄糖苷 ()、芹菜素-7---D-(6″--乙酰基)-葡萄糖苷 ()、木犀草素 ()、槲皮素 ()、白樺脂酸 ()、白樺脂酸甲酯 ()、白樺脂酮酸 ()、-谷甾醇 ()。采用MTT法對(duì)首次從該植物中分離得到的化合物-進(jìn)行體外抗乳腺癌活性測(cè)試，結(jié)果僅顯示化合物、、對(duì)2種乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231有一定的抑制作用，其IC值為48.6～123.5 μg·mL。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

Finnigan MAT-95型質(zhì)譜儀，Q-TOF Micro LC-MS-MS質(zhì)譜儀，Bruker DRX-600型核磁共振儀(Bruker，德國(guó))，Waters制備型高效液相色譜儀(Waters，美國(guó))，COSMOSIL C250 mm × 10 mm，5 μm半制備柱和COSMOSIL 5PFP 250 mm × 10 mm，5 μm半制備柱(COSMOSIL Ltd.，日本)，HP-20大孔吸附樹(shù)脂(日本三菱公司)，薄層層析硅膠板GF200～300，300～400目(煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司)，Sephadex LH-20葡聚糖凝膠(Amersham Biosciences Ltd.，美國(guó))，色譜級(jí)甲醇和色譜級(jí)乙腈(TEDIA Ltd.，美國(guó))。

1.2 植物材料

纖枝金絲桃()于2019年6月采集于云南省昆明市梁王山(102°52′45″ E、24°43′57″ N)，由中南民族大學(xué)萬(wàn)定榮教授鑒定，標(biāo)本(SC0869)保存于中南民族大學(xué)藥學(xué)院植物標(biāo)本庫(kù)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 提取和萃取 纖枝金絲桃干燥地上部分25.5 kg，粉碎后用80%的乙醇水重復(fù)提取4次(室溫浸泡，每次20 L，每次3 d)，合并提取液，減壓蒸餾至無(wú)醇味，得浸膏1.76 kg。將浸膏分散于5倍體積熱水，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚部位142 g、乙酸乙酯部位353 g、正丁醇部位693 g。合并石油醚部位和乙酸乙酯部位，用大孔樹(shù)脂柱層析，以水-乙醇梯度洗脫(20%-30%-40%-50%-60%-70%-80%-90%-95%,)，硅膠薄層色譜檢測(cè)，合并得10個(gè)組分A～J。

1.3.2 分離和純化 組分C經(jīng)凝膠柱層析，以甲醇(加入0.1%甲酸)洗脫，合并得10個(gè)組分(C～C)。組分C經(jīng)半制備高效液相色譜，分離得到化合物(3.1 mg) (乙腈-水，，30∶70→39∶61，22 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)和化合物(6.2 mg) (乙腈-水，，20∶80→45∶55，18 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)；組分C經(jīng)半制備高效液相色譜，分離得到化合物(9.5 mg) (乙腈-水，，46∶54→50∶50，24 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)和化合物(7.2 mg) (乙腈-水，體積比70∶30→65∶35，16 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)；組分C經(jīng)半制備高效液相色譜，分離得到化合物(9.2 mg) (乙腈-水，，30∶70→70∶30，18 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)和化合物(7.2 mg) (乙腈-水，，25∶75→60∶40，18 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)。組分D用凝膠柱層析，硅膠薄層色譜檢測(cè)，得到10個(gè)組分D～D。組分D經(jīng)半制備高效液相色譜分離得到化合物(10.4 mg) (乙腈-水，，60∶40→80∶20，25 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)；組分D經(jīng)高效液相色譜分離得到化合物(6.2 mg) (乙腈-水，，10∶90→60∶40，17 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)；組分D經(jīng)高效液相色譜分離得到化合物(4.6 mg) (乙腈-水，，15∶85→65∶35，15 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)。組分E經(jīng)硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇等梯度洗脫(8∶1,), 硅膠薄層色譜檢測(cè)，得到組分E～E。組分E經(jīng)凝膠柱層析，硅膠薄層色譜檢測(cè)，分為組分E～E，E經(jīng)半制備高效液相色譜，得到化合物(10.5 mg) (乙腈-水，，10∶90→80∶20，14 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)和化合物(9.4 mg) (乙腈-水，，20∶80→75∶25，18 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)。組分G經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(1∶0～0∶1,)，硅膠薄層色譜檢測(cè)，得到組分G～G。G經(jīng)凝膠柱層析，硅膠薄層色譜檢測(cè)，得到組分G～G，組分G經(jīng)半制備高效液相色譜得到化合物(5.8 mg) (乙腈-水，，15∶85→55∶45，19 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸), 組分G經(jīng)半制備高效液相色譜得到化合物(3.1 mg) (乙腈-水，，10∶90→76∶24，21 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸), 化合物(10.7 mg) (乙腈-水，，10∶90→76∶24，23 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)，化合物(7.2 mg) (乙腈-水，，10∶90→70∶30，26 min，流動(dòng)相含有0.1%的甲酸)。

1.3.3 抗乳腺癌活性測(cè)試 人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231均從美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)購(gòu)買(American Type Culture Collection，Rockville, MD, USA)，并培養(yǎng)在培養(yǎng)基比例為90%的DMEM培養(yǎng)基(高糖型)，10%的胎牛血清(FBS)和1%的雙抗溶液(青霉素和鏈霉素)中，在恒溫37°C、5%CO的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。根據(jù)生長(zhǎng)情況傳代或更換培養(yǎng)基。取生長(zhǎng)好的細(xì)胞株以每孔100 μL(密度為每孔1 × 10～5 × 10個(gè)細(xì)胞)接種在96孔板中，于37 ℃、5%CO的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。運(yùn)用MTT法測(cè)試細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性(徐嬋等，2020)?；衔飿悠啡芙庠贒MSO溶液中，配制濃度為50 mg·mL的母液。用DMEM將母液稀釋至待測(cè)樣品的最終濃度為10、20、40、60、80、100 μg·mL(二甲基亞砜濃度低于1‰)。待細(xì)胞在96孔板長(zhǎng)滿后，吸棄培養(yǎng)液。每孔加入200 μL的不同濃度的待測(cè)化合物；對(duì)于每個(gè)濃度設(shè)置5孔，并設(shè)置試驗(yàn)樣品的對(duì)照和未添加樣品、細(xì)胞的空白對(duì)照。分別培養(yǎng)12、24、48 h后，吸棄培養(yǎng)液，向每個(gè)孔中加入DMEM制備的MTT溶液100 μL(5 mg·mL)，孵育0.5 h，所產(chǎn)生的藍(lán)紫色甲臜結(jié)晶用150 μL的DMSO溶解，于562 nm下測(cè)定每孔值，生長(zhǎng)抑制率= [1-(-)/(-)]×100%。按文獻(xiàn)計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC)。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物黃色油狀。ESI-MS: 587 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：5.06 (1H, t,=7.1 Hz, H-27), 4.94 (1H, m, H-22), 4.57 (1H, dd,=10.9, 5.6 Hz, H-32), 3.27 (1H, d,=9.7 Hz, H-17), 3.15 (1H, dd,=14.0, 6.8 Hz, H-26), 3.04 (1H, dd,=14.0, 6.8 Hz, H-26), 2.67 (1H, dd,=12.8, 10.5 Hz, H-31), 2.15 (1H, m, H-21), 2.09 (1H, d,=12.3 Hz, H-15), 2.05 (1H, dd,=13.2, 4.3 Hz, H-5), 1.96 (1H, t,=6.4 Hz, H-11), 1.93 (1H, m, H-15), 1.78 (2H, dd,=12.9, 5.3 Hz, H-21, 31), 1.71 (6H, s, H-24, 30), 1.67 (1H, m, H-4), 1.66 (3H, s, H-29), 1.61 (1H, m, H-16), 1.57 (3H, s, H-25), 1.51 (2H, t,=13.4 Hz, H-5, 16), 1.38 (3H, s, H-34), 1.23 (3H, s, H-35), 1.18 (3H, s, H-19), 1.14 (3H, s, H-20), 1.09 (3H, d,=6.5 Hz, H-13), 1.07 (3H, s, H-14), 1.01 (3H, d,=6.5 Hz, H-12)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：209.7 (C-10), 204.4 (C-1), 193.8 (C-9), 174.0 (C-7), 133.9 (C-23), 132.8 (C-28), 122.1 (C-22), 121.1 (C-27), 117.0 (C-8), 90.5 (C-32), 82.9 (C-2), 78.7 (C-17), 73.1 (C-18), 71.0 (C-33), 59.7 (C-6), 48.4 (C-3), 42.4 (C-11), 41.9 (C-4), 37.9 (C-5), 33.1 (C-15), 30.3 (C-31), 27.5 (C-21), 27.4 (C-16), 27.1 (C-34), 26.4 (C-19), 26.1 (C-24), 25.8 (C-29), 24.2 (C-35), 23.6 (C-20), 22.3 (C-26), 21.6 (C-12), 20.6 (C-13), 18.2 (C-25), 18.0 (C-30), 15.1 (C-14)。化合物的C-NMR和DEPT譜中共顯示了35個(gè)碳信號(hào)，通過(guò)特征碳信號(hào)209.7 (C-10), 204.4 (C-1), 193.8 (C-9), 174.0 (C-7), 117.0 (C-8), 82.9 (C-2), 59.7 (C-6), 48.4 (C-3), 41.9 (C-4), 37.9 (C-5)，可以推斷該化合物是 [3.3.1]型多環(huán)多異戊烯基間苯三酚衍生物。結(jié)合H-NMR，顯示化合物具有一個(gè)異丁?；?、兩個(gè)異戊烯基、一個(gè)2-甲基-2,3-二羥基丁基和一個(gè)四氫呋喃環(huán)片段，其波譜數(shù)據(jù)與Zhou等(2016)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為attenuatumione G。

圖 1 化合物1-15的結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Structures of compounds 1-15

化合物黃色油狀。ESI-MS: 587 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：7.51 (2H, d,=7.5 Hz, H-12, 16), 7.38 (1H, t,=7.5 Hz, H-14), 7.25 (2H, t,=7.5 Hz, H-13, 15), 5.06 (1H, t,=7.2 Hz, H-35), 5.02 (2H, m, H-20, 25), 4.87 (1H, dd,=10.3, 7.6 Hz, H-30), 3.02 (1H, dd,=15.0, 10.4 Hz, H-29), 2.98 (1H, dd,=15.0, 7.7 Hz, H-29), 2.54 (2H, m, H-34), 2.18 (2H, m, H-19, 24), 2.07 (1H, m, H-5), 2.05 (1H, m, H-18), 2.02 (1H, m, H-19), 2.00 (1H, m, H-4), 1.96 (1H, m, H-24), 1.82 (1H, m, H-18), 1.74 (3H, s, H-28), 1.68 (6H, s, H-37, 38), 1.67 (1H, m, H-5), 1.65 (3H, s, H-23), 1.62 (3H, s, H-22), 1.58 (3H, s, H-27), 1.34 (3H, s, H-32), 1.22 (3H, s, H-33), 1.12 (3H, s, H-17)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：206.8 (C-1), 193.6 (C-10), 188.2 (C-9), 175.8 (C-7), 136.9 (C-11), 134.9 (C-36), 133.8 (C-26), 132.2 (C-14), 131.4 (C-21), 128.3 (C-12), 128.3 (C-16), 128.2 (C-13), 128.1 (C-15), 124.5 (C-20), 122.6 (C-25), 120.5 (C-35), 118.5 (C-8), 93.3 (C-30), 79.8 (C-2), 71.7 (C-31), 55.5 (C-6), 49.9 (C-3), 42.8 (C-4), 39.4 (C-5), 36.7 (C-18), 29.2 (C-34), 27.7 (C-24), 27.3 (C-29), 26.2 (C-23), 26.1 (C-28), 26.1 (C-33), 25.9 (C-38), 25.2 (C-19), 23.2 (C-32), 18.3 (C-22), 18.2 (C-27), 17.9 (C-37), 14.2 (C-17)?；衔锏腃-NMR和DEPT譜中共顯示了38個(gè)碳信號(hào)，通過(guò)特征碳信號(hào)206.8 (C-1), 193.6 (C-10), 188.2 (C-9), 175.8 (C-7), 118.5 (C-8), 79.8 (C-2), 55.5 (C-6), 49.9 (C-3), 42.8 (C-4), 39.4 (C-5)，可以推斷該化合物是 [3.3.1]型多環(huán)多異戊烯基間苯三酚衍生物。結(jié)合H-NMR分析顯示化合物具有一個(gè)苯甲?；?、三個(gè)異戊烯基和一個(gè)四氫呋喃環(huán)片段，其波譜數(shù)據(jù)與Chen等(2010)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為uralodin B。

化合物黃色油狀。ESI-MS: 445 [M-H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：4.94 (1H, t,=7.8 Hz, H-18), 3.42 (1H, dt,=6.8 Hz, H-24), 2.74 (1H, dd,=14.0, 8.9 Hz, H-17a), 2.62 (1H, dd,=14.0, 6.6 Hz, H-17b), 2.22 (1H, d,=13.6 Hz, H-14b), 1.90 (1H, m, H-7a), 1.88 (1H, m, H-7b), 1.77 (1H, m, H-12), 1.76 (1H, m, H-11a), 1.75 (2H, m , H-10), 1.62 (3H, s, H-21), 1.58 (3H, s, H-20), 1.55 (1H, m, H-8), 1.41 (1H, d,=13.6 Hz, H-14a), 1.38 (1H, m, H-11b), 1.36 (3H, s, H-16), 1.33 (3H, s, H-22), 1.25 (3H, d,=6.7 Hz, H-26), 1.16 (3H, d,=6.7 Hz, H-25), 1.04 (3H, s, H-15)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：206.9 (C-5), 205.3 (C-23), 200.5 (C-1), 197.7 (C-3), 136.2 (C-19), 118.9 (C-18), 110.6 (C-2), 79.3 (C-9), 73.3 (C-13), 65.4 (C-4), 57.4 (C-6), 52.1 (C-12), 48.9 (C-14), 48.2 (C-8), 40.0 (C-10), 35.4 (C-17), 34.1 (C-24), 26.9 (C-16), 26.7 (C-7), 26.2 (C-22), 26.0 (C-21), 21.8 (C-11), 21.2 (C-15), 20.9 (C-26), 18.3 (C-25), 18.0 (C-20)?；衔锏腃-NMR和DEPT譜中共顯示了26個(gè)碳信號(hào)，通過(guò)特征碳信號(hào)206.9 (C-5), 200.5 (C-1), 197.7 (C-3), 110.6 (C-2), 79.3 (C-9), 73.3 (C-13), 65.4 (C-4), 57.4 (C-6), 52.1 (C-12), 48.9 (C-14), 48.2 (C-8), 40.0 (C-10), 26.7 (C-7), 21.8 (C-11)，可以推斷該化合物是螺環(huán)型多環(huán)多異戊烯基間苯三酚衍生物。結(jié)合H-NMR分析顯示化合物具有一個(gè)異丙?；鸵粋€(gè)異戊烯基片段，其波譜數(shù)據(jù)與Abe等(2012)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為chipericumin C。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 259 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDOD)：7.59 (1H, d,=7.5 Hz, H-8), 7.46 (1H, d,=7.8, H-3), 7.34 (1H, d,=7.8 Hz, H-4), 7.33 (1H, d,=7.5 Hz, H-6), 7.25 (1H, t,=7.5, 1.7 Hz, H-7), 3.90 (3H, s, 1-OCH)。C-NMR (150 MHz, CDOD)：178.6 (C-9), 151.8 (C-4a), 148.0 (C-2), 147.5 (C-5), 146.5 (C-1), 145.3 (C-4b), 125.3 (C-3), 124.6 (C-7), 123.9 (C-8a), 120.7 (C-6), 117.1 (C-8b), 117.0 (C-8), 115.2 (C-4), 62.1 (1-OCH)。其波譜數(shù)據(jù)與程旺元等(2008)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為2,5-二羥基-1-甲氧基氧雜蒽酮。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 229 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：7.43 (1H, t,=7.3 Hz, H-3), 7.32 (1H, d,=3.0 Hz, H-8), 7.25 (1H, d,=9.0 Hz, H-5), 7.17 (1H, dd,=9.0, 3.0 Hz, H-6), 6.76 (1H, d,=8.4 Hz, H-4), 6.44 (1H, d,=8.4 Hz, H-2)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：182.2 (C-9), 161.9 (C-1), 156.5 (C-4a), 152.3 (C-7), 151.0 (C-4b), 136.9 (C-3), 124.9 (C-6), 121.2 (C-8a), 119.6 (C-5), 110.2 (C-2), 108.8 (C-8), 108.6 (C-8b), 107.2 (C-4)。其波譜數(shù)據(jù)與Wong等(2018)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為1,7-二羥基氧雜蒽酮。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 259 [M+H], CHO。H-NMR (600MHz, CDOD)：7.52 (1H, d,=3.1 Hz, H-8), 7.49 (1H, d,=9.1 Hz, H-6), 7.36 (1H,=8.9 Hz, H-2), 7.32 (1H, dd,=9.1, 3.1 Hz, H-5), 6.66 (1H, d,=8.9 Hz, H-3), 3.93 (3H, s, 4-OCH)。C-NMR (150 MHz, CDOD)：183.5 (C-9), 155.7 (C-7), 155.5 (C-1), 151.4 (C-4b), 147.4 (C-4a), 141.6 (C-4), 126.4 (C-6), 122.2 (C-8a), 121.4 (C-3), 120.5 (C-5), 109.9 (C-8b), 109.1 (C-8), 109.0 (C-2), 57.8 (4-OCH)。其波譜數(shù)據(jù)與Dao等(2012)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為1,7-二羥基-4-甲氧基氧雜蒽酮。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 449 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：7.30 (1H, d,=1.9 Hz, H-2′), 7.25 (1H, dd,=8.6, 1.9 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,=8.6 Hz, H-5′), 6.40 (1H, d,=2.3 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,=2.3 Hz, H-6), 5.25 (1H, d,=1.8 Hz, H-1″), 3.96 (1H, m, H-2″), 3.49 (1H, m, H-3″), 3.29 (1H, m, H-5″), 3.12 (1H, m, H-4″), 0.79 (3H, d,=5.9 Hz, 5″-CH)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：180.0 (C-4), 166.0 (C-7), 163.1 (C-5), 159.4 (C-9), 158.8 (C-2), 149.9 (C-4′), 146.4 (C-3′), 136.4 (C-3), 123.1 (C-6′), 122.8 (C-1′), 117.0 (C-2′), 116.0 (C-5′), 105.8 (C-10), 103.1 (C-1″), 99.5 (C-6), 94.6 (C-8), 73.3 (C-4″), 72.1 (C-2″), 72.1 (C-3″), 71.9 (C-5″), 17.7 (C-6″)。其波譜數(shù)據(jù)與Zhong等(1997)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為槲皮苷。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 433 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDOD)：8.07 (2H, d,=8.8 Hz, H-2′, 6′), 7.13 (2H, d,=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.69 (1H, s, H-3), 6.86 (1H, d,=2.2 Hz, H-8), 6.46 (1H, d,=2.2 Hz, H-6) , 5.08 (1H, d,=7.4 Hz, H-1″)。C-NMR (150 MHz, CDOD):182.0 (C-4), 163.8 (C-2), 163.0 (C-7), 162.4 (C-5), 161.4 (C-4′), 156.9 (C-9), 128.4 (C-2′, 6′), 120.7 (C-1′), 114.6(C-3′, 5′) , 105.4 (C-10), 105.4 (C-1″), 103.8 (C-3), 99.9 (C-2″), 99.5 (C-6), 94.9 (C-8), 77.2 (C-4″), 76.4 (C-6″), 73.1 (C-3″), 69.5 (C-5″)。其波譜數(shù)據(jù)與莊鵬宇等(2009)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為芹菜素-7---D-葡萄糖苷。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 473 [M-H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDOD)：7.85 (2H, d,=8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.89 (2H, d,=8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.72 (1H, d,=1.5 Hz, H-8), 6.61 (1H, s, H-3), 6.45 (1H, br.s, H-6), 5.04 (1H, d,=7.2 Hz, H-1″), 4.47 (1H, dd,=11.3, 2.4 Hz, H-6b″), 4.23 (1H, dd,=11.3, 4.6 Hz, H-6a″), 3.77 (1H, s, H-5″), 3.63 (1H, m, H-2″), 3.56 (1H, m, H-3″), 3.36 (1H, dd,=9.2, 9.2 Hz, H-4″), 2.09 (3H, s, CO-CH-6)。C-NMR (150 MHz, CDOD)：182.3 (C-4), 171.6 (C-1?), 165.4 (C-7), 163.2 (C-2), 161.6 (C-5), 161.5 (C-4′), 157.5 (C-9), 128.2 (C-2′, 6′), 121.6 (C-1′), 115.7 (C-3′, 5′), 105.7 (C-10), 102.8 (C-3), 100.1 (C-1″), 99.7 (C-2), 94.8 (C-8), 76.3 (C-3″), 74.2 (C-5″), 73.3 (C-2″), 70.2 (C-7″), 63.4 (C-6″), 19.4 (C-2?)。其波譜數(shù)據(jù)與程淼等(2014)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為芹菜素-7---D-(6″--乙?；?-葡萄糖苷。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 287 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDOD)：7.38 (1H, d,=2.2 Hz, H-2′), 7.37 (1H, dd,=8.5, 2.2 Hz, H-6′), 6.88 (1H, d,=8.5 Hz, H-5′), 6.53 (1H, s, H-3), 6.42 (1H, d,=2.1 Hz, H-8), 6.19 (1H, d,=2.1 Hz, H-6)。C-NMR (150 MHz, CDOD)：183.7 (C-4), 166.4 (C-7), 166.1 (C-2), 163.2 (C-5), 159.3 (C-9), 151.0 (C-4′), 147.1 (C-3′), 123.7 (C-1′), 120.3 (C-6′), 116.8 (C-5′), 114.1 (C-2′), 105.3 (C-10), 103.9 (C-3), 100.1 (C-6), 95.0 (C-8)。其波譜數(shù)據(jù)與和蕾等(2008)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為木犀草素。

化合物黃色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 303 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDOD)：7.73 (1H, d,=2.2 Hz, H-2′), 7.62 (1H, dd,=8.5, 2.2 Hz, H-6′), 6.87 (1H, d,=8.5 Hz, H-5′), 6.38 (1H, d,=2.1 Hz, H-8), 6.17 (1H, d,=2.1 Hz, H-6)。C-NMR (150 MHz, CDOD):177.3 (C-4), 165.6 (C-7), 162.5 (C-9), 158.2 (C-5), 148.8 (C-4′), 148.0 (C-2), 146.2 (C-3′), 137.3 (C-3), 124.1 (C-1′), 121.7 (C-6′), 116.2 (C-5′), 115.9 (C-2′), 104.5 (C-10), 99.2 (C-6), 94.4 (C-8)。其波譜數(shù)據(jù)與王曉陽(yáng)等(2020)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為槲皮素。

化合物白色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 457 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：4.69 (1H, s, H-29a),4.57 (1H, s, H-29b), 3.33 (1H, m, H-3), 1.68 (3H, s, H-23), 0.99 (3H, s, H-24), 0.95 (3H, s, H-25), 0.93 (3H, s, H-26), 0.84 (3H, s, H-27), 0.74 (3H, s, H-30)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：180.1 (C-28),152.0 (C-20), 110.2 (C-29), 79.7 (C-3), 57.5 (C-17), 56.9 (C-5), 52.0 (C-9), 50.4 (C-18), 48.1 (C-19), 43.6 (C-14), 41.9 (C-8), 40.1 (C-1), 39.7 (C-4), 38.3 (C-13), 38.1 (C-10), 37.9 (C-22), 35.6 (C-7), 33.3 (C-16), 31.7 (C-15), 30.8 (C-21), 28.6 (C-23), 28.0 (C-2), 26.9 (C-12), 22.1 (C-11), 19.5 (C-6), 19.4 (C-30), 16.7 (C-26), 16.6 (C-25), 16.1 (C-24), 15.1 (C-27)。其波譜數(shù)據(jù)與王軍民等(2021)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為白樺脂酸。

化合物白色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 471 [M+H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDCl)：4.73(1H, s, H-29a), 4.60(1H, s, H-29b), 3.61(3H, s, COMe), 3.15(1H, m, H-3), 2.88(1H, m, H-19), 1.66(3H, s, H-30), 0.97(3H, s, H-24), 0.96(3H, s, H-25), 0.93(3H, s, H-26), 0.81(3H, s, H-27), 0.75(3H, s, H-23)。C-NMR (150 MHz, CDCl)：180.8 (C-28), 150.6 (C-20), 109.9 (C-29), 79.2 (C-3), 56.4 (C-17), 55.5 (C-5), 51.1 (-COMe), 50.6 (C-9), 49.4 (C-19), 47.0 (C-18), 42.3 (C-14), 40.8 (C-8), 39.0 (C-4), 38.8 (C-1), 38.5 (C-13), 37.3 (C-22), 37.2 (C-10), 34.4 (C-7), 32.3 (C-16), 30.7 (C-15), 29.8 (C-21), 28.1 (C-23), 27.5 (C-2), 25.6 (C-12), 21.0 (C-11), 19.5 (C-30), 18.4 (C-6), 16.3 (C-25), 16.2 (C-26), 15.5 (C-24), 14.8 (C-27)。其波譜數(shù)據(jù)與Kojim等(1987)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為白樺脂酸甲酯。

化合物白色無(wú)定形粉末。ESI-MS: 453 [M-H], CHO。H-NMR (600 MHz, CDOD)：4.75 (1H, s, H-29a), 4.59 (1H, s, H-29b), 2.99 (1H, m, H-19), 2.50 (1H, m, H-2), 2.39 (1H, m, H-2), 2.30 (1H, m, H-16), 2.20 (1H, m, H-13), 2.00 (2H, m, H-15, 22), 1.90 (1H, m, H-1), 1.69 (1H, m, H-12), 1.65 (3H, s, H-30), 1.60 (1H, m, H-18), 1.55 (1H, m, H-21), 1.50 (2H, m, H-6), 1.45 (1H, m, H-22), 1.43 (4H, m, H-7, 11, 16), 1.40 (1H, m, H-15), 1.39 (2H, m, H-1, 9), 1.36 (1H, m, H-5), 1.36 (1H, m, H-11), 1.21 (1H, m, H-21), 1.07 (3H, s, H-23), 1.04 (1H, m, H-12), 0.99 (3H, s, H-24), 0.97 (3H, s, H-27), 0.95 (3H, s, H-26), 0.91 (3H, s, H-25)。C-NMR (150 MHz, CDOD)：218.7 (C-3), 182.3 (C-28), 150.4 (C-20), 110.0 (C-29), 56.4 (C-17), 54.9 (C-5), 50.0 (C-9), 49.1 (C-18), 47.6 (C-4), 46.9 (C-19), 42.5 (C-14), 40.8 (C-8), 40.0 (C-1), 39.1 (C-13), 37.5 (C-22), 36.9 (C-10), 34.2 (C-2), 34.0 (C-7), 32.1 (C-16), 30.5 (C-15), 30.0 (C-21), 26.8 (C-23), 25.7 (C-12), 21.6 (C-11), 21.2 (C-24), 20.0 (C-6), 19.6 (C-30), 16.4 (C-25), 16.0 (C-26), 14.8 (C-27)。其波譜數(shù)據(jù)與Barthel等(2008)的報(bào)道基本一致，故鑒定化合物為白樺脂酮酸。

化合物白色無(wú)定形粉末。EI-MS: 397 [M+H], CHO。TLC多個(gè)體系展開(kāi)與標(biāo)準(zhǔn)品R值均一致，故鑒定化合物為-谷甾醇。

2.2 細(xì)胞毒活性結(jié)果

采用MTT法測(cè)試從纖枝金絲桃乙醇提取物中分離到的化合物-對(duì)2種乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231的細(xì)胞毒活性，活性測(cè)試結(jié)果顯示，測(cè)試的14個(gè)化合物中，僅有化合物、、對(duì)MCF-7和MDA-MB-231兩個(gè)細(xì)胞株顯示一定的抗癌活性，它們對(duì)MCF-7細(xì)胞株的IC值分別為(123.5±5.8)、(52.7±2.7)、(99.4±5.3) μg·mL，對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞株的IC值分別為(112.8±6.2)、(48.6±1.9)、(105.1±7.0) μg·mL，其他化合物在測(cè)試濃度達(dá)到200 μg·mL仍然不顯示活性。

3 討論與結(jié)論

金絲桃屬植物中特征性成分天然多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類成分(PPAPs)具有復(fù)雜獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)類型分為 [3.3.1]型、 [3.2.1]型、 [5.3.1]型、金剛烷型、類金剛烷型、螺環(huán)型及其他類型。本研究從云南產(chǎn)植物纖枝金絲桃中分離到15個(gè)單體化合物，結(jié)構(gòu)類型包括有多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類、黃酮類、三萜類、甾體類，其中3個(gè)為多環(huán)多異戊烯基間苯三酚衍生物，結(jié)構(gòu)類型為 [3.3.1]型和螺環(huán)型。本研究較好地充實(shí)了金絲桃屬植物和天然產(chǎn)物的研究?jī)?nèi)容，擴(kuò)寬了對(duì)纖枝金絲桃植物的物質(zhì)基礎(chǔ)認(rèn)識(shí)。

PPAPs不僅具有復(fù)雜獨(dú)特的結(jié)構(gòu)，且具有抗腫瘤、抗抑郁、抗菌、抗炎等廣泛的生物活性。我們對(duì)首次分離化合物進(jìn)行了體外抗乳腺癌活性測(cè)試，結(jié)果顯示沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著抑制兩種乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和MDA-MB-231的活性化合物。PPAPs的另一個(gè)主要作用是抗抑郁活性，研究表明貫葉金絲桃素(hyperforin)是多種神經(jīng)遞質(zhì)的非競(jìng)爭(zhēng)性重吸收抑制劑，其是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)選擇性地抑制神經(jīng)遞質(zhì)的重吸收而產(chǎn)生抗抑郁作用(Müller et al., 1998)?；诖?，課題組將進(jìn)一步對(duì)所得PPAPs類化合物進(jìn)行抗抑郁活性篩選研究，期望獲得具有抗抑郁作用化合物。綜上所述，本研究為深入探討纖枝金絲桃的化學(xué)成分和藥理作用奠定了基礎(chǔ)，也為未來(lái)合理開(kāi)發(fā)利用該植物提供了一定的科學(xué)依據(jù)。