胡 靜,朱 莉,談微微

(江蘇大學(xué)第四附屬醫(yī)院婦科,江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

宮頸癌是最常見的女性生殖道惡性腫瘤,其具有侵襲性強(qiáng)、發(fā)病率高和預(yù)后極差等特征[1],早期臨床表現(xiàn)較為隱蔽,如陰道出血或陰道排液等,因特異性較弱而被忽視;中晚期通常表現(xiàn)為宮頸潰瘍、坐骨神經(jīng)疼痛及尿毒癥等癥狀,中晚期5年存活期極低,且極易復(fù)發(fā),嚴(yán)重威脅患者生命安全[2]。目前臨床上首選手術(shù)治療宮頸癌,但術(shù)后復(fù)發(fā)率約為15.86%[3];而針對中晚期宮頸癌患者只能行放療和化療等手段,以減緩癌細(xì)胞擴(kuò)散速度,但其預(yù)后極差[4]。研究表明[5],有效的腫瘤預(yù)后預(yù)測指標(biāo)可在一定程度上提高患者近、遠(yuǎn)期療效,而腫瘤直徑、肝癌轉(zhuǎn)移及治療方法等參數(shù)均會影響患者預(yù)后,但目前尚無統(tǒng)一結(jié)論。蛋白激酶CK2β廣泛分布并表達(dá)于真核細(xì)胞內(nèi),是機(jī)體重要的信號傳導(dǎo)因子[6],研究表明[7],CK2β可激活信號通路,拮抗癌細(xì)胞凋亡,促進(jìn)癌細(xì)胞增殖,在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。而E-鈣黏蛋白(E-cadherin)是一種跨膜蛋白,廣泛分布并表達(dá)于上皮細(xì)胞,在維持細(xì)胞完整性和極性方面發(fā)揮著重要功效[8]。Rhys等[9]研究表明,E-cadherin的低表達(dá)可增強(qiáng)癌細(xì)胞增殖、遷移等作用,加重腫瘤患者病情。E-cadherin和CK2β均與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有一定相關(guān)性,但針對二者在宮頸癌組織的具體表達(dá)及其對宮頸癌患者預(yù)后評估的研究相對較少,因此研究通過E-cadherin與CK2β在宮頸癌中的表達(dá)及其對患者3年生存率的預(yù)測價(jià)值,旨在為臨床宮頸癌患者復(fù)發(fā)及預(yù)后評估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料

研究時(shí)間:2013年3月—2017年2月。研究對象:60例宮頸癌患者,其中22例腺癌,38例鱗癌;20例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。臨床分期:41例Ⅰ～Ⅱ期,19例Ⅲ～Ⅳ。分化程度:26例低分化,34例中高分化。

納入標(biāo)準(zhǔn):①所有患者均經(jīng)影像學(xué)和病理組織活檢等方式確診為宮頸癌[10];②年齡范圍為18～75歲;③患者臨床病例資料齊全;④首次診斷為宮頸癌,且未經(jīng)過化療、手術(shù)治療等;⑤在篩選受試者時(shí)獲得患者及家屬同意。

排除標(biāo)準(zhǔn):①合并患有自身免疫疾病者;②合并患有其他惡性腫瘤;③心臟、肝及腎等重要臟器官嚴(yán)重?fù)p傷者;④合并精神疾病者;⑤不配合者。研究經(jīng)江蘇大學(xué)第四附屬醫(yī)院倫理委員會審查并批準(zhǔn)。

1.2 E-cadherin與CK2β表達(dá)檢測

分別采集患者治療前宮頸癌和旁癌組織標(biāo)本,行病理穿刺活檢,并對宮頸組織標(biāo)本行一系列處理,使其滿足檢測要求。具體操作如下:應(yīng)用體積分?jǐn)?shù)10%甲醛溶液行常規(guī)固定包埋操作,制作5 μm石蠟切片,不同梯度乙醇水溶液處理,PBS磷酸鹽緩沖液沖洗3次,在高溫和高壓狀態(tài)下修復(fù)3 min,在體積分?jǐn)?shù)3%雙氧水培育10 min,再用相同PBS緩沖液洗滌3次,并分別滴加CK2β和E-cadherin一抗,室溫下孵育120 min,棄去一抗后,分別滴加二抗,室溫下繼續(xù)孵育60 min,棄去PBS洗滌液。

檢測方法:在上述樣品中加入DAB顯色劑避光顯色3～5 min,蘇木精染色5 min,脫水至透明色后應(yīng)用中性樹膠封片,由2名高年資醫(yī)護(hù)人員在顯微鏡下觀察并分別評分,取平均值。研究中兔抗人克隆CK2β抗體和鼠抗人E-cadherin抗體、DAB顯色劑和PBS緩沖液均來自北京百奧萊博科技有限公司。

判定標(biāo)準(zhǔn)[11]:應(yīng)用半定量計(jì)數(shù)方法評估宮頸癌組織和旁癌組織CK2β和E-cadherin表達(dá)水平,且免疫組化評分為染色強(qiáng)度評分和陽性細(xì)胞評分之積,0～3分為陰性表達(dá),4～9分為陽性表達(dá)。陽性細(xì)胞評分:顯微高倍鏡下選取10個(gè)視野區(qū)域,計(jì)算陽性細(xì)胞占比,具體評分細(xì)則為:陽性細(xì)胞占比≤10%,0分;11%≤陽性細(xì)胞占比≤25%,1分;26%≤陽性細(xì)胞占比≤50%,2分;陽性細(xì)胞占比>50%,3分。

1.3 隨訪

隨訪時(shí)間:3年,從患者入組后即開始,至患者死亡或隨訪時(shí)間到達(dá)為止。隨訪頻率:前2年每3個(gè)月1次,第3年每6個(gè)月1次。隨訪內(nèi)容:血清標(biāo)志物、影像學(xué)資料等,并記錄患者總生存期。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)

SPSS25.0計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示,行χ2檢驗(yàn),生存分析行l(wèi)og-rank檢驗(yàn),多因素分析行Cox回歸分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin與CK2β表達(dá)

宮頸癌組織E-cadherin與CK2β蛋白表達(dá)情況比較見表1。由表1可以看出,宮頸癌組織CK2β蛋白陽性率明顯高于旁癌組織,而宮頸癌組織E-cadherin陽性率明顯低于旁癌組織(P<0.05)。E-cadherin與CK2β在宮頸癌組織和旁癌組織的陽性表達(dá)分別見圖1、圖2。

圖1 免疫組化檢測E-cadherin在組織中的陽性表達(dá)

圖2 免疫組化檢測CK2β在組織中的陽性表達(dá) (×400)

表1 宮頸組織E-cadherin與CK2β表達(dá)情況比較[n(%)]

2.2 宮頸癌組織E-cadherin與CK2β蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

宮頸癌組織E-cadherin、CK2β蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表2。由表2可知,宮頸癌組織E-cadherin、CK2β蛋白與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度等標(biāo)志物有關(guān)(P<0.05),而與病理類型、脈管瘤栓、腫瘤直徑深肌層浸潤及宮旁浸潤等標(biāo)志物無關(guān)(P>0.05)。

表2 宮頸癌組織E-cadherin、CK2β蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

2.3 宮頸癌患者單因素分析

單因素分析結(jié)果顯示,宮頸癌患者3年生存率與腫瘤直徑、臨床分期、分化程度、CK2β蛋白表達(dá)及E-cadherin表達(dá)等指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),詳情見表3。由表3可見,CK2β蛋白陽性表達(dá)3年生存率為67.50%,明顯低于陰性的95.00%(χ2=5.637,P=0.020);E-cadherin陽性表達(dá)3年生存率為86.96%,明顯高于陰性的59.46%(χ2=5.107,P=0.035),不同CK2β蛋白表達(dá)和E-cadherin表達(dá)生存時(shí)間比較分別見圖3、圖4。

表3 宮頸癌患者3年生存率單因素分析[n(%)]

圖3 不同CK2β蛋白表達(dá)宮頸癌生存時(shí)間比較

圖4 不同E-cadherin表達(dá)宮頸癌生存時(shí)間比較

2.4 宮頸癌患者Cox回歸分析

以單因素差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)為自變量,以隨訪期存活狀態(tài)作為因變量(0=存活,1=死亡),進(jìn)行Cox回歸分析。結(jié)果顯示,臨床分期(OR=1.335,95%CI:1.029～1.733)、分化程度 (OR=2.018,95%CI:1.034～3.937)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(OR=2.770,95%CI:2.093～3.667)、CK2β蛋白陽性表達(dá)(OR=2.563,95%CI:2.102～3.124)和E-cadherin陽性表達(dá)(OR=0.415,95%CI:0.339～0.508)是宮頸癌患者3年生存率的獨(dú)立影響因素,詳情見表4。

表4 宮頸癌患者預(yù)后Cox回歸分析

3 討論

宮頸癌是女性較為常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率僅次于乳腺癌,且發(fā)病群體有年輕化趨勢,嚴(yán)重威脅患者生命安全[12]。早期臨床表現(xiàn)特征不明顯,而中晚期宮頸癌擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移程度較高,子宮切除術(shù)和放療、化療等措施無法完全阻斷癌細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)移,降低患者生存期,影響預(yù)后[13]。目前臨床尚無評估宮頸癌預(yù)后的統(tǒng)一標(biāo)志物,且年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分型及治療方式等標(biāo)志物均對預(yù)后有一定的影響[14],但無法通過上述諸因素準(zhǔn)確判斷。E-cadherin和CK2β在宮頸癌組織中呈異常表達(dá)狀態(tài),二者在宮頸癌細(xì)胞的增殖、分化上有一定的作用[7,9],但其對宮頸癌預(yù)后的研究相對較少,因而本次研究E-cadherin與CK2β在宮頸癌中的表達(dá)及其對患者3年生存率的預(yù)測價(jià)值,旨在為臨床研究提供依據(jù)。

研究結(jié)果顯示,宮頸癌組織CK2β蛋白陽性率明顯高于旁癌組織,而宮頸癌組織E-cadherin陽性率明顯低于旁癌組織(P<0.05),說明CK2β蛋白和E-cadherin參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。針對我院治療的60例宮頸癌患者隨訪3年,Cox多因素分析表明,臨床分期 (OR=1.335,95%CI:1.029～1.733)、分化程度 (OR=2.018,95%CI:1.034～3.937)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(OR=2.770,95%CI:2.093～3.667)、CK2β蛋白陽性表達(dá)(OR=2.563,95%CI:2.102～3.124)和E-cadherin陽性表達(dá)(OR=0.415,95%CI:0.339～0.508)是宮頸癌患者3年生存率的獨(dú)立影響因素。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的主要方式,其可穿透淋巴管壁,且分化或脫落后以淋巴結(jié)為中心增殖、分化,加快疾病進(jìn)程[15]。中高分化型癌細(xì)胞具有生長緩慢、惡性程度低等特征,而低分化細(xì)胞則相反,具有很強(qiáng)的分化、轉(zhuǎn)移等潛力,是臨床風(fēng)險(xiǎn)極高的腫瘤分型[16]。腫瘤分期可綜合評估患者腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及是否遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等,臨床分期越高,則提示癌細(xì)胞惡性程度越高[17]。

CK2β歸屬于蛋白激酶,廣泛分布于機(jī)體真核細(xì)胞中,可發(fā)揮CK2信號傳導(dǎo)作用,而CK2可激活信號傳導(dǎo)途徑阻止宮頸癌細(xì)胞的凋亡進(jìn)程,且還能形成宮頸癌組織血管,對宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展起一定促進(jìn)作用[18]。E-cadherin是臨床常見的抑癌因子,正常情況下其與機(jī)體內(nèi)連環(huán)素有機(jī)結(jié)合形成復(fù)合體結(jié)構(gòu),在維持上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等方面具有重要作用,而宮頸組織發(fā)生癌變后,E-cadherin水平明顯降低,進(jìn)而破壞上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,提高宮頸癌細(xì)胞增殖、分化及遷移的能力,因而E-cadherin是宮頸癌的保護(hù)因素[19]。本次研究對象及得出的結(jié)論僅限于60 例宮頸癌患者,仍需擴(kuò)充研究樣本;同時(shí)E-cadherin與CK2β蛋白的相關(guān)性可作為下一步研究思路,值得臨床進(jìn)一步研究和推廣。

綜上所述,E-cadherin、CK2β表達(dá)與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和分化程度相關(guān),且E-cadherin與CK2β是影響宮頸癌患者3年生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。