楊勸生

( 甘肅工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院化工學(xué)院，甘肅 天水 741025 )

秦安素有“瓜果之鄉(xiāng)”的美稱(chēng)，所產(chǎn)蜜桃以個(gè)大、色艷、味美、質(zhì)優(yōu)、環(huán)保、營(yíng)養(yǎng)豐富而譽(yù)滿(mǎn)全中國(guó)，享有“天有王母蟠桃，地有秦安蜜桃”之美譽(yù)。據(jù)秦安縣志記載，秦安蜜桃早在漢代時(shí)就已廣泛栽培，在唐宋時(shí)期，“齊桃”、“二格子桃”和“秋桃”就以個(gè)大、色艷、味美而遠(yuǎn)近聞名。相傳，唐太宗李世民在病中想吃故鄉(xiāng)的蜜桃，專(zhuān)門(mén)派遣使者快馬兼程到秦安采摘，從此秦安蜜桃被作為朝廷貢品，名揚(yáng)四海。北宋時(shí)期秦安就有“城北十里桃花川”之說(shuō)。長(zhǎng)期的蜜桃栽培，在葫蘆河流域形成了自興國(guó)鎮(zhèn)廟咀村到郭嘉鎮(zhèn)邵咀村全長(zhǎng)30余公里的數(shù)萬(wàn)畝桃園，每到春季，桃花競(jìng)放，香氣四溢。 目前， 全縣蜜桃栽培面積超6 667 hm2，年產(chǎn)量99 200 t，產(chǎn)值達(dá)33 810萬(wàn)元。

建成日光溫室桃棚637座，結(jié)果517座。已建成萬(wàn)畝蜜桃基地2個(gè)，千畝以上桃基地20處，蜜桃專(zhuān)業(yè)村64個(gè)，全縣桃農(nóng)有47 600余戶(hù)。人們除了把蜜桃作為鮮果品嘗外，主要副產(chǎn)物-葉極少數(shù)被用作動(dòng)物飼料或燃料灰肥返田，大部分作為固體廢物而拋棄，不能發(fā)揮應(yīng)有的作用，相反存在寄生病蟲(chóng)、污染環(huán)境等諸多弊端。查閱有關(guān)研究資料，秦安蜜桃葉富含多種人體有益成分，尤以黃酮類(lèi)化合物蘆丁(Rutin)含量較高，黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化、保護(hù)心腦血管系統(tǒng)、抗癌、止血等生理活性,且低毒。對(duì)動(dòng)物體內(nèi)自由基有較好地清除作用，有效減輕和消除動(dòng)物體的炎癥。在畜牧產(chǎn)業(yè)中，蜜桃葉配方飼料能夠加快牲畜生長(zhǎng)速度，增加產(chǎn)奶、產(chǎn)蛋、產(chǎn)肉量，改善奶、蛋、肉品質(zhì)和繁殖性能，防預(yù)疾病等有重要的意義。本研究以秦安蜜桃葉為原料，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以乙醇回流提取蜜桃葉黃酮類(lèi)化合物，建立并優(yōu)化了秦安蜜桃葉葉中蘆丁提取工藝，HPLC法測(cè)定秦安蜜桃葉中黃酮類(lèi)化合物的含量，以確定最佳提取工藝參數(shù)，為蜜桃副產(chǎn)物中有效成分的提取分離提供了一定的參考，同時(shí)進(jìn)一步促進(jìn)蜜桃葉配方牲畜飼料、預(yù)防及治療性獸用藥等系列產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)。

1 材料與儀器

1.1 藥材

2020年9月于天水市秦安縣西川鎮(zhèn)王存生、秦安縣劉坪鎮(zhèn)張二娃、興國(guó)鎮(zhèn)李桂生、王尹鎮(zhèn)緱來(lái)虎等10余個(gè)蜜桃園采集“北京七號(hào)”蜜桃葉，經(jīng)自然風(fēng)干，粉碎，過(guò)篩。

1.2 儀器

Agilent 1100 Series型高效液相色譜儀、KQ-500D型數(shù)控超聲波清洗器、RE52-99型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、UV751GD型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、JY系列電子天平、色譜工作站為CAG Bootp Serier、色譜柱為Eclipse×DB-C18柱等。

1.3 試藥

蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：11844-200505)，95%乙醇、NaOH，以及其它分析純?cè)噭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品0.0251 g，用25 mL 80%乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，搖勻，得質(zhì)量濃度為25.1 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

稱(chēng)取秦安蜜桃葉粉末10.0 g，加入不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇，在室溫下浸泡5～7 h后，經(jīng)300 W超聲波50 ℃處理80 min。將超聲處理過(guò)的物質(zhì)全部轉(zhuǎn)移索氏提取器中加熱回流提取，得到回流液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將回流液減壓濃縮至無(wú)醇味之后立即將濃縮液轉(zhuǎn)入100 mL錐形瓶中，得抽濾樣品液。重復(fù)此操作三次，將三次實(shí)驗(yàn)的抽濾樣品液合并，減壓濃縮至粘稠狀，趁熱移入150 mL錐形中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%NaOH調(diào)pH至8～10，密封靜置24 h。經(jīng)減壓抽濾，將濾液移入100 mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至刻度，封口4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 黃酮含量測(cè)定色譜條件

檢測(cè)器：Eclipse×DB-C18柱(4.6 mm×250 mm)，波長(zhǎng)：254 nm，流動(dòng)相：甲醇∶1% 冰醋酸 = 60∶40(v/v)，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20 μL，流速1.0 mL/min 。

2.4 正交提取結(jié)果與分析

取45%、60%、75%不同體積的乙醇，液料比7.51、12.51、17.51 mL/g,提取溫度40 ℃、60 ℃、80 ℃，設(shè)定正交試驗(yàn)表，考察黃酮含量的提取率，結(jié)果取3次試驗(yàn)結(jié)果的平均值，見(jiàn)表1、表2，方差分析見(jiàn)表3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 黃酮含量方差分析表

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

經(jīng)分析優(yōu)選出的A2B2C3工藝未包括在正交設(shè)計(jì)的試驗(yàn)表中,再按A2B2C3工藝進(jìn)一步驗(yàn)證試驗(yàn)。分別稱(chēng)取蜜桃葉5份，各30 g，以蜜桃葉黃酮含量為驗(yàn)證指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，黃酮含量平達(dá)1.250 mg/g，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，可建立蜜桃葉中黃酮的提取工藝。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)以秦安蜜桃“北京七號(hào)”的葉子為實(shí)驗(yàn)材料，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行L9(33)正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度等主要影響因素，確定了最佳提取工藝(乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、料液比12.51、提取溫度70 ℃),黃酮類(lèi)化合物含量可達(dá)1.250 mg/g，并發(fā)現(xiàn)三種影響因素之間存在一定的交互作用。由于蜜桃葉來(lái)源廣泛、綠色天然無(wú)污染，廉價(jià)易得，葉中所含黃酮類(lèi)化合物有較強(qiáng)的抗氧化能力，且在機(jī)體內(nèi)低殘留，可作為較理想的自由基清除劑，用于保護(hù)機(jī)體健康和食品安全領(lǐng)域，并有望開(kāi)發(fā)成為新型的食品添加劑或配方飼料、預(yù)防與治療性獸藥。通過(guò)一系列研究，為當(dāng)?shù)孛厶耶a(chǎn)業(yè)深入開(kāi)發(fā)和研究提供理論依據(jù)。