趙晨蕊，傘湘雯，嵇如月，方 玲

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 檢驗科，吉林 長春130033)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一類基于基底角質(zhì)層形成細(xì)胞的微小環(huán)狀DNA病毒[1]，是通過生殖器接觸進行性傳播的微生物，可能導(dǎo)致男性和女性的相關(guān)癌癥[2]。全球每年約有50萬例新診斷的宮頸癌和約30萬例與宮頸癌相關(guān)的死亡[3]。高危型HPV(HR-HPV)感染可加劇宮頸癌和其他鱗狀細(xì)胞癌的惡性程度；低危型HPV(LR-HPV)感染與皮膚病變?nèi)缙ゐ嘤嘘P(guān)，這種皮損本質(zhì)上通常是良性的[4]。通過大量研究表明，HPV感染情況與地域存在一定相關(guān)性[5]。故HPV分型檢測對宮頸癌早期篩查診斷具有重要的臨床價值。本研究分析了1213例HPV不同分型樣本在長春地區(qū)的感染及年齡分布特征，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2020年2月至7月間收集吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院患者男性和女性分泌物標(biāo)本共1213例，年齡13-78歲，平均年齡(37.1±11.1)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：女性人群，體檢人群，有生殖器疣、皮疹等癥狀的男性人群，排除妊娠期、月經(jīng)期及宮頸癌變的女性。

1.2 儀器與試劑

Linegene 7500熒光定量PCR儀(杭州博日科技有限公司)；SLAN-96P熒光定量PCR儀(上海宏石醫(yī)療科技有限公司)；由江蘇碩世生物科技股份有限公司提供的人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒(熒光PCR法)，用于分型檢測21種人乳頭瘤病毒型別(高危型HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，26，82，73及低危型HPV6,11，81型)。

1.3 方法

采樣刷采集分泌物，得到的樣本進行基因提取，對內(nèi)含A-H反應(yīng)體系的PCR八聯(lián)管進行標(biāo)號，分別混入2 μl/管的待測核酸溶液、空白對照(1排1份)，接著按照要求進行PCR擴增，即UNG酶50℃孵育5 min，預(yù)變性95℃10 min，95℃變性10 s，58℃退火及延伸40 s，共45個循環(huán)，以上過程均參照說明書嚴(yán)格進行，最后進行結(jié)果比對，標(biāo)準(zhǔn)曲線Ct<參考值為感染，反之亦然。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

選用SPSS 23.0軟件統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，用例數(shù)和百分?jǐn)?shù)表示全部計數(shù)資料，組間比較選用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV各個亞型的感染分布情況

本研究共1213名研究對象，男性189名，女性1024名。高危型以HPV52型例數(shù)最多共95例，其次為HPV16型85例，HPV58型53例，低危型以HPV6+HPV11型例數(shù)最多共68例，其次是HPV81型14例。見表1。

表1 HPV亞型感染構(gòu)成比

2.2 不同性別之間的HPV感染模式對比情況

HPV混合高危型感染即高危型和高低危型多重感染的人群，HPV低危型感染即僅感染低危型的人群，前者感染率33.55%(407/1213)，后者感染率2.64%(32/1213)。男性HPV總感染率49.21%(93/189)，其中混合高危型38.10%(72/189)，低危型11.11%(21/189)，女性HPV總感染率33.79%(346/1024)，其中混合高危型32.62%(334/1024)，低危型1.17%(12/1024)，將男性和女性HPV低危型與混合高危型感染數(shù)分別相除可得，男性29.17%(21/72)要顯著高于女性3.59%(12/334)，再經(jīng)卡方檢驗統(tǒng)計分析可得，男性和女性HPV混合高危型感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而男性HPV低危型感染率要顯著高于女性(P<0.05)，以上表明男性比女性更易發(fā)生HPV低危型感染。見表2。

表2 男性和女性感染模式分布

2.3 各個年齡組的HPV感染分布情況

1213例樣本中共檢出感染樣本439例，感染率36.19%。將研究對象分為三組，分別為≤25歲人群、26-65歲人群和≥66歲人群。從年齡人群整體分析來看，≥66歲人群HPV感染率最高，為58.33%，其次是≤25歲人群HPV感染率為42.69%，最后是26-65歲人群，HPV感染率最低，為34.85%，各人群之間感染率差異比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。進一步詳細(xì)分析，≤25歲人群和26-65歲人群中HPV感染率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.909，P<0.05)，剩余人群差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。單一、雙重和多重感染在不同年齡人群中分別占比63.10%(277/439)、23.46%(103/439)、13.44%(59/439)，整體呈現(xiàn)“U”型分布。見表3。

表3 不同年齡人群感染率

2.4 HPV感染在多種疾病中的分布情況

經(jīng)統(tǒng)計分類可得，皮疹患者共56例，占比12.76%(56/439)，其中高危型感染以HPV52、HPV16居多，低危型感染以HPV6+HPV11居多；生殖器疣患者共34例，占比7.74%(34/439)，其中高危型感染以HPV+HPV16為主，低危型感染以HPV6+HPV11為主，集中于26-65歲人群；不孕癥患者共15例，占比3.42%(15/439)，其中以HPV16、HPV52為主，僅見于女性。

3 討論

在全世界范圍內(nèi)，HPV感染導(dǎo)致的癌癥病例約占5%，每年感染人數(shù)中女性大約有57萬人，男性大約有6萬人[6]。據(jù)統(tǒng)計，我國在不同地區(qū)間的HPV感染率差異較為明顯(20.0%-34.6%)[7],其中位列前6位的高危HPV依次為HPV16、HPV52、HPV58、HPV33、HPV18、HPV31[8]。在本研究中，HPV的總感染率為36.19%，與上述不同地區(qū)相比本地區(qū)的HPV感染率處于偏上水平，其中HPV52型總例數(shù)最高，其次分別是HPV16、HPV58、HPV56和HPV53，這與張睿等人報道的北京地區(qū)HPV感染相符[9]，與閻璠等人報道的湖北荊州地區(qū)HPV感染不相符[10]，表明HPV感染具有一定的地域性差異。除此之外，經(jīng)對比分析發(fā)現(xiàn)，本研究中HPV的感染分布存在一定的性別差異，女性以高危型感染為主，男性以低危型感染為主，這可能與男性癥狀相對明顯而導(dǎo)致檢測率較高這一現(xiàn)象有關(guān)[11]。

進一步探討HPV感染情況在不同年齡段之間的差異，發(fā)現(xiàn)不同年齡段的人群乳頭瘤病毒的感染趨勢呈現(xiàn)“U”型分布，第一個高峰出現(xiàn)在20歲時，第二個高峰出現(xiàn)在50歲以上的人群中，而在多重感染中也觀察到了這種分布模式[12]。在本研究中對比分析發(fā)現(xiàn)，≤25歲年齡段的人群HPV感染率較高，可能正處于這個年齡段的年輕人生活比較開放，免疫系統(tǒng)對HPV較敏感所導(dǎo)致，而隨著年齡的增加，機體體內(nèi)免疫系統(tǒng)能夠抵抗HPV病毒感染，感染率隨之降低，≥66歲年齡段的人群HPV感染率最高，可能由于老年人普遍雌激素水平較低，免疫系統(tǒng)退化因此易感染HPV病毒。此外，在HPV雙重和多重感染中，≥66歲年齡段的人群感染率最高，≤25歲年齡段的人群次之，這與之前調(diào)查研究趨勢大致相符。

由于本研究只針對長春地區(qū)的人群，存在地區(qū)的局限性，后期可以擴大收集范圍或增加樣本量，為后期宮頸癌篩查及防治提供參考，在HPV感染分布特征基礎(chǔ)上，對及時且有效的防治宮頸癌變的風(fēng)險有一定的參考價值及意義。