劉春霞，肖士濱，劉聯(lián)斌，黃 剛，郭守俊，李遠(yuǎn)香，葉宇慧，王小麗

1.贛州市腫瘤醫(yī)院，江西贛州 341000;2.贛州市立醫(yī)院，江西贛州 341000

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌常見的病理類型之一，發(fā)生率約占肺癌的80%，因早期無特異性表現(xiàn)，確診時約有75%患者病情處于中晚期，5年生存率極低，嚴(yán)重威脅生命質(zhì)量[1-2]。免疫功能紊亂在NSCLC發(fā)生、進(jìn)展中起到重要作用，當(dāng)機體免疫受抑制或功能低下時腫瘤發(fā)生風(fēng)險更高，而腫瘤進(jìn)行性生長也會對機體免疫功能造成抑制，形成惡性循環(huán)[3-4]。惡性胸腹腔積液是機體系統(tǒng)性或局部性疾病在胸腹膜腔局部免疫反應(yīng)的表現(xiàn)，也是晚期癌癥的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，隨著胸腹腔積液的積累，免疫細(xì)胞大量被募集，直接影響疾病進(jìn)程[5]?；诖?，本研究對健康者的外周血和NSCLC患者的外周血和胸腔積液進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群檢測，分析NSCLC患者外周血與胸腔積液中淋巴細(xì)胞亞群比值的臨床價值，旨在為臨床診治提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年2月至2022年1月就診于贛州市腫瘤醫(yī)院(簡稱本院)的60例NSCLC患者作為肺癌組，男41例，女19例；年齡42～87歲，平均(61.78±3.46)歲；TNM分期：Ⅲ期27例，Ⅳ期33例；分化程度：高分化15例，中分化26例，低分化19例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)凝血功能正常；(2)NSCLC均符合《中華醫(yī)學(xué)會肺癌臨床診療指南(2018版)》[6]中診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)組織病理學(xué)證實；(3)TNM分期為Ⅲ期、Ⅳ期者；(4)年齡>18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組前3個月內(nèi)接受調(diào)節(jié)免疫相關(guān)藥物治療；(2)患有血液系統(tǒng)疾??；(3)合并自身免疫性疾病；(4)患有精神疾病；(5)患有肝腎功能衰竭；(6)患有嚴(yán)重急慢性感染疾?。?7)其他疾病引起的胸腔積液。另選擇同期在本院體檢的體檢健康者60例作為健康組，男38例，女22例；年齡43～86歲，平均(62.01±3.39)歲。兩組各項資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。兩組受檢者均簽署知情同意書。

1.2方法 采集兩組受檢者空腹肘正中靜脈血2 mL，其中健康組于體檢時抽取。肺癌組靜脈血于入院第1天抽取，并抽取肺癌患者胸腔積液5 mL，乙二胺四乙酸抗凝。將獲取的標(biāo)本用安徽中科中佳科學(xué)有限公司的KDC-1044型低速離心機以1 200 r/min轉(zhuǎn)速離心操作5 min，獲取細(xì)胞層，置于澳柯瑪股份有限公司的DW-86L348型醫(yī)用低溫冰箱中-80 ℃低溫保存待檢。使用深圳邁瑞公司BricyteE6流式細(xì)胞儀及其配套試劑測定淋巴細(xì)胞亞群比值：CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)占淋巴細(xì)胞的百分比，并計算CD4+/CD8+比值。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較兩組淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果，CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞、CD4+/CD8+。(2)評估NSCLC患者外周血和胸腔積液免疫功能的變化。

2 結(jié) 果

2.1兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較 肺癌組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較健康組低，NK細(xì)胞較健康組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組CD8+水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2NSCLC患者外周血和胸腔積液免疫功能比較 NSCLC患者胸腔積液的CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞水平低于外周血，CD4+/CD8+水平高于外周血，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

表2 NSCLC患者外周血和胸腔積液免疫功能比較

3 討 論

NSCLC的發(fā)生與大氣污染、吸煙史、既往肺部慢性感染、電離輻射、遺傳等因素關(guān)系密切，早期可引起胸部脹痛、咳嗽、痰血、低燒等，晚期可致患者食欲下降、呼吸困難、體重減輕、疲乏、咯血等癥狀[7]。與小細(xì)胞癌相比，NSCLC腫瘤細(xì)胞生長分裂較慢，擴散轉(zhuǎn)移較晚，惡性程度較高，預(yù)后較差[8]。相關(guān)研究顯示[9]，機體免疫功能缺陷與NSCLC發(fā)生、轉(zhuǎn)移、進(jìn)展密切相關(guān)，特別與細(xì)胞免疫功能抑制有關(guān)。

淋巴細(xì)胞是機體主要免疫細(xì)胞，減少可致機體抗腫瘤免疫功能下降，可分為NK細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞及其亞群。T淋巴細(xì)胞約占外周血淋巴細(xì)胞的70%，主要執(zhí)行細(xì)胞免疫功能，不僅直接殺傷腫瘤細(xì)胞，還能活化免疫系統(tǒng)的其他成分，在控制具有免疫原性腫瘤細(xì)胞的生長中起到關(guān)鍵作用[10]。CD4+T細(xì)胞可促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞和其他免疫活性細(xì)胞的分化、增生，對免疫細(xì)胞間相互作用進(jìn)行協(xié)調(diào)，并可分泌干擾素(INF)-β、INF-γ、白細(xì)胞介素(IL)-2等細(xì)胞因子，在機體細(xì)胞免疫應(yīng)答中起到關(guān)鍵作用[11]。CD8+T細(xì)胞是主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類分子限制性細(xì)胞，主要識別存在于被病毒感染的靶細(xì)胞、癌細(xì)胞等抗原肽片段結(jié)合的復(fù)合分子、靶細(xì)胞表面上的Ⅰ類分子，抑制NK細(xì)胞的殺傷活性，還能分泌IL-13、IL-10等細(xì)胞因子，主要介導(dǎo)體液免疫[12]。CD4+、CD8+相互影響，正常情況下處于動態(tài)平衡狀態(tài)，當(dāng)其比值下降時，細(xì)胞免疫的平衡被破壞，則可致機體免疫功能紊亂。NK細(xì)胞可在免疫調(diào)節(jié)中起到非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞作用，其活化后可迅速分泌粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、INF-γ等細(xì)胞因子，并可調(diào)節(jié)吞噬細(xì)胞功能，也可分泌細(xì)胞毒因子，對腫瘤細(xì)胞起到殺傷作用，其活性降低是腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、進(jìn)展的重要影響因素[13]。本研究結(jié)果顯示，肺癌組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較健康組低，NK細(xì)胞較健康組高；兩組CD8+水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示肺癌患者機體存在明顯的免疫功能紊亂。原因在于腫瘤組織可分泌IL-10、INF-β等多種免疫抑制因子，可使APC對腫瘤抗原的加工、攝取和提呈降低，阻礙其激活，對CD4+細(xì)胞成熟分化形成抑制，造成CD4+細(xì)胞數(shù)目明顯減少，致使免疫誘導(dǎo)和反應(yīng)效應(yīng)不足，機體免疫監(jiān)視作用減弱，影響患者細(xì)胞免疫功能[14]。胸腹膜腔是一個相對獨立的空間，在腫瘤等因素刺激下，胸腹膜滲出液不斷累積，淋巴細(xì)胞大量聚集，大量免疫活性分子和細(xì)胞存在于微環(huán)境內(nèi)，同時胸腹膜滲出液中存在CD4+細(xì)胞聚集，其中Th1類免疫細(xì)胞可大量釋放INF-γ而發(fā)揮抗腫瘤免疫功能[15]。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者胸腔積液的CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞水平低于外周血，CD4+/CD8+水平高于外周血，提示NSCLC患者腹腔局部免疫能力明顯低于整體免疫能力。腫瘤細(xì)胞微環(huán)境內(nèi)存在多種可抑制CD4+分化、成熟的免疫抑制因子，而CD4+/CD8+降低，CD8+水平升高，使機體進(jìn)入免疫抑制狀態(tài)，引起免疫功能紊亂，影響腫瘤細(xì)胞的正常清除，促使腫瘤細(xì)胞增殖，加速病情惡化。T淋巴細(xì)胞被抑制時，NK細(xì)胞水平明顯升高，其免疫反應(yīng)增強，表明NSCLC體內(nèi)細(xì)胞免疫功能可能激活并促進(jìn)NK細(xì)胞增殖。本研究尚存在觀察指標(biāo)偏少、未分析淋巴細(xì)胞亞群與NSCLC患者預(yù)后之間的關(guān)系、未納入樣本量偏小、未分析兩組患者淋巴細(xì)胞亞群的質(zhì)量、數(shù)量等、未與他人研究結(jié)果對比等不足，可能對研究結(jié)果可信度及準(zhǔn)確性造成影響，后期仍需加大樣本量深入研究，旨在為臨床提供更為可靠的參考。

綜上所述，NSCLC患者外周血中淋巴細(xì)胞亞群比值明顯下降，腹腔局部免疫能力明顯低于整體免疫能力，動態(tài)監(jiān)測胸腔積液中淋巴細(xì)胞亞群比值有助于評估患者免疫功能。