薛冰，吳林玲，梁學(xué)梅，閆穎*

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193； 2.國家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300193）

0 引言

隨著現(xiàn)代社會發(fā)展節(jié)奏的加快，女性面臨著日益嚴(yán)峻的工作生活壓力，卵巢儲備功能下降也成為了困擾女性群體的一道難題，它不僅直接影響著女性的生殖功能，導(dǎo)致患者受孕困難，而且對于暫無生育要求的患者，也會因卵泡枯竭，不能循時排卵而出現(xiàn)月經(jīng)稀少、繼發(fā)性閉經(jīng)，遷延加重會發(fā)展為卵巢早衰，同時增加了其患心血管疾病、代謝障礙相關(guān)并發(fā)癥的風(fēng)險，給其心理和生理上都造成不良影響。

近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，卵巢在其周期性的卵泡募集、卵泡優(yōu)勢化及排卵、黃體形成及退化的過程中伴隨著周期性的血管形成。卵巢新生血管形成與卵巢的動脈血流改變及合成內(nèi)分泌激素密切相關(guān)，且卵泡的生長成熟及黃體的形成依賴著新生血管的供養(yǎng)，從而維持女性正常的月經(jīng)，為妊娠的建立提供保障，因此血管新生對維持正常的卵巢生理功能起到重要的作用[1]。卵巢血管新生是一個復(fù)雜的過程，需要多種因子相互作用，達(dá)到動態(tài)平衡，進(jìn)而影響卵泡發(fā)育及卵巢功能。因此，研究這些因子的作用機制，可以為我們探究改善卵巢功能、延緩卵巢衰老等方面帶來新的研究思路。

1 SIRT1因子

SIRT1是酵母染色質(zhì)沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Sir2)的同源家族之一，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、修復(fù)維持細(xì)胞線粒體穩(wěn)態(tài)以及抗氧化反應(yīng)等多種功能。SIRT1在人類族群中廣泛存在于卵巢組織中，在顆粒細(xì)胞、卵母細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和黃體中均有表達(dá)，且存在于卵巢卵母細(xì)胞中的SIRT1含量與機體年齡成負(fù)相關(guān)，與卵母細(xì)胞的發(fā)育級別亦成負(fù)相關(guān)[2]。因此，SIRT1的表達(dá)與卵泡發(fā)育水平、卵巢功能維持有著密切的關(guān)系。

SIRT1可通過調(diào)節(jié)卵巢新生血管形成來調(diào)控卵巢功能及卵泡發(fā)育，主要從調(diào)控Notch-DLL4信號通路的表達(dá)以及改善內(nèi)皮細(xì)胞炎癥兩方面以影響血管形成相關(guān)因子對卵巢組織的作用，從而促進(jìn)卵巢血管新生。

以往研究認(rèn)為，SIRT1是血管內(nèi)皮穩(wěn)態(tài)、血管生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素，而其對血管生成的調(diào)節(jié)與調(diào)控Notch-DLL4信號通路的表達(dá)密不可分。哺乳動物細(xì)胞中，Notch-DLL4信號通路在血管新生過程中參與協(xié)調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞的各項功能[3]。有研究顯示，在靈長類動物的卵巢中使用抗DLL4單克隆抗體阻斷體內(nèi)的DLL4，結(jié)果反而增加了卵巢黃體血管和微血管密度[4]，說明Notch-DLL4信號通路抑制了卵巢血管生成，下調(diào)其表達(dá)可以促進(jìn)血管出芽生長。而SIRT1就是Notch-DLL4信號通路內(nèi)源性的抑制劑[5]，促進(jìn)SIRT1的表達(dá)，使其與位于Notch1轉(zhuǎn)錄起始位點上游的一個高度保守的區(qū)域結(jié)合，抑制了Notch1的轉(zhuǎn)錄，同時SIRT1對Notch1胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(N1IC)和Notch1靶基因HEY1和HEY2起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，使N1IC去乙?；⒁种破浔磉_(dá)，從而下調(diào)Notch-DLL4信號通路的表達(dá)作用，促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞分支和增殖，增加血管密度；此外，Notch-DLL4信號通路通過降低卵巢內(nèi)皮細(xì)胞對血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的反應(yīng)性以抑制卵泡增殖過程[6]，若抑制此信號通路的表達(dá)，使得血管內(nèi)皮細(xì)胞對VEGF的反應(yīng)性增強，VEGF誘導(dǎo)受體表達(dá)，從而促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移。鑒于SIRT1對Notch-DLL4信號通路的負(fù)向調(diào)控作用，靶向增加SIRT1活性或者上調(diào)其基因表達(dá)可能是促進(jìn)卵巢血管生成、改善卵泡發(fā)育及卵巢功能的一種新路徑。

SIRT1也通過改善內(nèi)皮細(xì)胞炎癥以調(diào)節(jié)卵巢血管新生。機體器官與功能的衰退必然伴隨著血管衰老，卵巢功能衰退亦是如此，炎性反應(yīng)是主要誘因之一。研究指出[7]，敲除SIRT1基因的小鼠更易出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥，SIRT1通過對炎癥調(diào)控的關(guān)鍵蛋白物質(zhì)——NF-κB的去乙?；饔枚蛊浠钚越档停M(jìn)而阻斷一系列促炎性反應(yīng)通路[8-9]，而SIRT1不能正常表達(dá)的小鼠體內(nèi)炎性因子通過NF-κB信號促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的促炎因子和黏附分子表達(dá)，使內(nèi)皮細(xì)胞有害物質(zhì)產(chǎn)生增多，內(nèi)皮功能紊亂，進(jìn)而影響到內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)因子表達(dá)，血管出芽生長能力下降，血管形成受阻。因此，激活SIRT1的表達(dá)能夠起到改善內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)，避免細(xì)胞損傷、促進(jìn)血管新生的作用，從而可能改善由于卵巢內(nèi)皮細(xì)胞炎癥導(dǎo)致的卵巢血管生成障礙，使卵巢功能、卵泡發(fā)育正常維持。

目前，對于SIRT1與卵巢血管新生及卵巢功能的研究都是建立在小鼠或者其他動物機體上，對人類的卵巢功能改善尚沒有直接的證據(jù)，并且SIRT1有著復(fù)雜的生物學(xué)效應(yīng)，和機體內(nèi)多種因子有著復(fù)雜的調(diào)控關(guān)系，這都需要大量的研究證實。

2 FOXO1轉(zhuǎn)錄因子

Forkhead Box(FOX)家族是翼螺旋/叉頭型轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)家族，廣泛存在于果蠅到人類的不同物種族群中，其中最早發(fā)現(xiàn)的亞族FOXO成員之一——FOXO1，在成年小鼠的子宮、卵巢及脂肪組織表達(dá)最多，而其在人類機體中的分布大致與小鼠組織中分布類似。

FOXO1是調(diào)節(jié)卵巢顆粒細(xì)胞增殖和成熟的關(guān)鍵因子，閉鎖卵泡的顆粒細(xì)胞中FOXO1表達(dá)水平最高，若抑制顆粒細(xì)胞FOXO1激活區(qū)，顆粒細(xì)胞多停留于S期[10]；FOXO1基因敲除的小鼠卵巢表現(xiàn)為卵泡細(xì)胞激活、卵母細(xì)胞凋亡、卵泡儲備過早利用乃至繼發(fā)性不孕[11]，說明FOXO1在調(diào)控卵巢功能時起到抑制作用，這也與其不同于SIRT1對卵巢血管作用的機制有關(guān)。

研究發(fā)現(xiàn)，敲除FOXO1基因的小鼠胚胎發(fā)育過程中即出現(xiàn)卵黃囊與胚胎的異常血管形成[12]；條件性敲除包括FOXO1在內(nèi)的FOXO族基因的突變小鼠呈惡性淋巴瘤表現(xiàn)并伴隨廣泛血管瘤形成[13]。同時FOXO1可在內(nèi)皮細(xì)胞中快速誘導(dǎo)血管緊張素2（Angiotensin 2，Ang-2)的表達(dá)，Ang-2在體內(nèi)激活Tie2/Akt信號通路，從而負(fù)反饋抑制FOXO1靶基因的表達(dá)，而后者的功能是促進(jìn)新生血管的形成[14]?？梢钥闯?，F(xiàn)OXO1在血管形成中起到調(diào)控平衡的作用，抑制血管過度新生而出現(xiàn)無功能性血管，使新生血管有序構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)。

由于FOXO1與SIRT1在血管新生及卵巢功能調(diào)節(jié)中的截然不同的作用，二者常相互調(diào)節(jié)，互為平衡；且二者皆為參與細(xì)胞自噬的重要角色，F(xiàn)OXO1包含的賴氨酸位點可被去乙?；魅趿似浣Y(jié)合同源DNA序列的能力，減弱了其轉(zhuǎn)錄活性，由此顯著增加自噬啟動因子的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞自噬作用，以維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，既促進(jìn)血管出芽延伸形成新生血管，又防止異常血管過度生長，保證了卵巢周期性血管形成及卵巢功能正常運行。雖然SIRT1與FOXO1并非直接參與卵巢新生血管形成的作用因子，但二者通過多種路徑影響血管新生的直接作用因子的表達(dá)，研究它們的調(diào)控機制，對拓寬卵巢血管新生及卵巢功能改善的研究領(lǐng)域益處良多。

3 轉(zhuǎn)化生長因子β1

轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforminggrowth factor-beta1，TGFβ1)主要表達(dá)于成人卵巢中的卵泡膜細(xì)胞中，通過自分泌/旁分泌機制參與調(diào)節(jié)卵巢功能，在FSH存在條件下，TGFβ1可促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖并使LH受體表達(dá)增多，雌激素分泌增多，卵泡液生成增多，因此在促進(jìn)卵泡發(fā)育、維持理想的卵巢功能的過程中發(fā)揮重要作用。

另外，TGFβ1又作為血管生成調(diào)控因子被研究者們廣泛認(rèn)知，在血管形成以及新生中作用突出。血管內(nèi)皮細(xì)胞表面并無TGFβ1的受體，而體外實驗顯示，TGFβ1可誘導(dǎo)其他起直接作用的促血管生成因子如VEGF的表達(dá)增多，促進(jìn)血管生成[15]。現(xiàn)階段對于TGFβ1在卵巢血管形成中的作用的研究，則主要集中在卵巢相關(guān)腫瘤疾病上。

研究發(fā)現(xiàn)，TGFβ1在卵巢癌患者機體中呈高表達(dá)水平[16]，且隨著惡性腫瘤分級增加，其表達(dá)水平也隨之上升[17]。另有研究發(fā)現(xiàn)[18-19]，TGFβ1可經(jīng)TGFβ1Ⅱ型受體/Smad3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)卵巢血管內(nèi)皮因子生成，進(jìn)而促進(jìn)上皮性卵巢癌組織新生毛細(xì)血管形成，為腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移提供有力的營養(yǎng)條件。因此，TGFβ1可能在卵巢組織中通過上調(diào)促血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)卵巢血管新生、調(diào)控卵巢相關(guān)功能的作用。

4 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）

女性卵巢、子宮內(nèi)膜等部位有豐富的VEGF及其受體的表達(dá)，其中，卵泡顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞、黃體細(xì)胞及卵丘細(xì)胞都可合成和分泌VEGF并呈周期性表達(dá)，促使卵泡周圍微血管生成，使卵泡從血液中得到更多的促性腺激素以用于發(fā)育。

VEGF作為血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性有絲分裂原，促性腺激素和低氧均可刺激其表達(dá)增強，一般認(rèn)為其促進(jìn)卵巢血管新生的機制有以下：VEGF能夠引起卵巢血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖、遷移和血管構(gòu)建，從而促進(jìn)新生血管形成；它還可增加卵巢毛細(xì)血管通透性，促進(jìn)血漿蛋白外滲，使卵巢基質(zhì)增大而影響卵泡發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)[20]，可通過抑制Hh信號通路終末轉(zhuǎn)錄因子Gli靶向抑制VEGF的表達(dá)，從而抑制卵巢上皮癌的血管生成，減少腫瘤細(xì)胞的生長；早在1995年有學(xué)者通過彩色多普勒對多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）患者及正常女性的卵巢血流進(jìn)行評估對比，發(fā)現(xiàn)前者卵巢間質(zhì)血流形成增加及搏動指數(shù)增加，認(rèn)為PCOS患者卵巢血管生成增加，而后另有研究亦證實此結(jié)論[21-22]。研究者對PCOS患者血清中VEGF水平及超聲下卵巢間質(zhì)血流變化的監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，患者血清中的VEGF呈高表達(dá)，與卵巢間質(zhì)血流豐富程度相一致，一定程度上解釋了超聲下卵巢多囊樣改變及間質(zhì)血管化[23]，因此恢復(fù)正常的血清VEGF表達(dá)，使卵巢血管生成正?；煽醋魇歉纳芇COS患者卵泡發(fā)育及排卵的新策略[24]。由于VEGF在血管新生中的重要作用，并且在女性卵巢中的豐富表達(dá)，我們可認(rèn)為VEGF通過促進(jìn)新生血管形成而對女性生殖功能發(fā)揮重要的調(diào)控作用。

5 總結(jié)與展望

卵巢血管新生與卵巢功能密切相關(guān)，有序的血管形成可以維持卵巢生理功能的正常運行，為女性月經(jīng)、妊娠等生殖功能的發(fā)揮提供保障。卵巢血管的形成與多種相關(guān)因子密切聯(lián)系，SIRT1因子通過調(diào)控Notch-DLL4信號通路的表達(dá)及改善內(nèi)皮細(xì)胞炎癥促進(jìn)卵巢血管新生，反之FOXO1抑制血管過度新生而出現(xiàn)無功能性血管，使新生血管有序構(gòu)成網(wǎng)絡(luò)，在血管形成中起到調(diào)控平衡的作用；VEGF在卵泡細(xì)胞中呈周期性表達(dá)，對卵泡周圍血管新生起到促進(jìn)作用，使促性腺激素有效作用于卵泡發(fā)育，而TGFβ1可能在卵巢組織中通過上調(diào)包括VEGF在內(nèi)的促血管生成相關(guān)因子的表達(dá)，發(fā)揮促進(jìn)卵巢血管新生、調(diào)控卵巢相關(guān)功能的作用。它們或協(xié)同合作，或互為權(quán)衡，共同作用于卵巢血管形成，進(jìn)而影響卵巢功能，我們不僅可以從卵巢組織、激素分泌等方面對卵巢功能、卵巢相關(guān)疾病進(jìn)行研究，也可以進(jìn)一步從細(xì)胞因子水平探索血管新生與卵巢功能的關(guān)系，為卵巢功能調(diào)節(jié)、維持“年輕態(tài)”提供更多的思路。