馮彩霞 王增帥 高麗芝 楊利清

1.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，內(nèi)蒙古 包頭 014030；

2.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，內(nèi)蒙古 包頭 014030

腦白質(zhì)高信號（white matter hyperintensities，WMH）的患者早期常無臨床癥狀，后期可出現(xiàn)認(rèn)知障礙、步態(tài)障礙等。WMH 發(fā)生的具體機制尚不明確，慢性低灌注、血腦屏障通透性增加、血管內(nèi)皮功能障礙、炎癥反應(yīng)可能是其發(fā)病機制[1]。WMH 與大腦的退行性改變、年齡、腦血管的狹窄及腦灌注下降相關(guān)[2]。年齡每增加10 歲，WMH 的發(fā)生率可升高2 ～3 倍，80 歲以上的老年人90%存在WMH[2]。髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）可通過氧化應(yīng)激修飾脂蛋白、降低一氧化氮生物利用度、誘導(dǎo)內(nèi)皮功能障礙、損傷血管反應(yīng)性以及增加斑塊易損性，參與動脈粥樣硬化的病理生理過程[3]，是卒中的炎癥標(biāo)志物[4]。但關(guān)于MPO 與腦白質(zhì)高信號的相關(guān)性尚未闡明。本研究旨在探討MPO與老年前期、無大動脈狹窄的腦白質(zhì)高信號患者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年9 月到2021 年1 月包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診及住院部的108 例老年前期WMH 患者作為WMH 組，男52 例，女56 例，年齡43 ～59 歲，平均（51.09±4.26）歲。51 例健康體檢者為對照組，男27 例，女24 例，年齡42 ～59 歲，平均（50.26±4.13）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞ 0.05），具有可比性。WMH嚴(yán)重程度采用Fazekas 評分標(biāo)準(zhǔn)[5]，腦室周圍和深層白質(zhì)兩個部分總分0 ～6 分，1 ～2 分輕度，3 ～4 分中度，5 ～6 分重度。輕度組38 例、中度組36 例、重度組34 例。WMH 組入選標(biāo)準(zhǔn)：符合2015 年中國腦小血管病診治共識中腦白質(zhì)高信號的影像診斷標(biāo)準(zhǔn)[5-6]的40 ～59 歲患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①3 個月內(nèi)新發(fā)腦梗死者；②影像學(xué)檢查提示顱內(nèi)血管狹窄、頸部血管狹窄≥50%者；③感染、免疫、代謝、中毒、腦積水等其他病因?qū)е碌哪X白質(zhì)病變者；④有肝腎嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者。本研究獲得包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（2019 年科倫審第LW-004）。

1.2 方法

MPO 蛋白檢測：按ELISA 試劑盒步驟嚴(yán)格操作，測定血清中MPO 蛋白表達(dá)量。MPO mRNA檢測：按白細(xì)胞分離液（天津市灝洋生物制品科技有限公司）說明書步驟提取白細(xì)胞，-80 ℃保存。用TRIzol 試 劑 盒（日 本TaKaRa 公 司）提 取總RNA，反轉(zhuǎn)錄試劑盒按總RNA 1μg 為模板將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA 為模板進行PCR 擴增（試劑盒由美國Promega 北京分公司生產(chǎn)），檢測MPO 基因的相對表達(dá)量。上游引物序列：5’-TACACTTCCTGCATTGAACCTGGCT-3’，下游引物序列：5’-CCCAGATATACCCCTCACTGCTGC-3’。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件分析，符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較行t檢驗，三組間比較采用方差分析，三組均數(shù)間的多重比較采用最小顯著差異t檢驗，計數(shù)資料用[n（%）]表示，行χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson分析，采用ROC 曲線分析MPO 診斷WMH 的臨床效能，特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性+假陽性）例數(shù)×100%；敏感度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%，P＜ 0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者MPOmRNA、MPO蛋白水平比較

WMH 組MPO mRNA、MPO 蛋白水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05），見表1。

表1 兩組患者MPO mRNA、MPO蛋白水平比較（x ± s）

2.2 WMH嚴(yán)重程度影響因素分析

輕度、中度、重度組之間MPO mRNA、MPO 蛋白表達(dá)量的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05）。重度組MPO mRNA 表達(dá)量分別高于中度組（t=4.622，P=0.000）和 輕 度 組（t=6.816，P=0.000）；重 度組MPO 蛋白表達(dá)量分別高于中度組（t=3.093，P=0.003）和 輕 度 組（t=8.007，P=0.000），中 度 組MPO 蛋白表達(dá)量高于輕度組（t=4.946，P=0.000），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜ 0.05），見表2。

表2 WMH嚴(yán)重程度影響因素分析（x ± s）

2.3 MPOmRNA和MPO蛋白表達(dá)量的相關(guān)性分析及MPO蛋白的ROC曲線

Pearson 分析顯示MPO mRNA 和MPO 蛋白表達(dá)量呈正相關(guān)（r=0.637，P=0.000）。血清MPO 蛋白診斷WMH 的曲線下面積為0.680，最佳截斷值為72.29 pg/ml 時，對WMH 診斷的敏感度和特異度分別為60.20%和70.60%，見圖1。

圖1 MPO 的ROC 曲線

3 討論

WMH 的病理改變包括髓鞘脫失、少突膠質(zhì)細(xì)胞受損、星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖以及血管周圍間隙擴大等[7-8]。WMH 的傳統(tǒng)危險因素（包括年齡、常見的血管危險因素包括原發(fā)性高血壓、糖尿病、高同型半胱氨酸、高纖維蛋白原、動脈粥樣硬化、遺傳易感性等）[2]。非傳統(tǒng)危險因素可能有偏頭痛、阻塞性睡眠呼吸暫停、暈厥等[9]。WMH 可以是腦小血管病的典型影像學(xué)表現(xiàn)之一，也可以單獨存在，單純的輕度WMH 不會出現(xiàn)臨床癥狀[1]。MPO 與動脈粥樣硬化及大動脈粥樣硬化型腦梗死關(guān)系緊密[4]。隨著年齡的增長，顱內(nèi)大血管、小血管、穿支動脈病變往往伴隨發(fā)生，且動脈粥樣硬化的發(fā)生率亦逐年升高。為減少大動脈粥樣硬化及年齡對研究的干擾，本研究選擇了老年前期、無大動脈狹窄的WMH 患者作為研究對象，發(fā)現(xiàn)WMH 患者MPO mRNA 及蛋白表達(dá)水平均較正常對照組增高，且WMH 重度組MPO mRNA 及蛋白表達(dá)量均高于輕度組。血清MPO 蛋白的ROC 曲線發(fā)現(xiàn)，當(dāng)MPO 蛋白最佳截斷值為72.29 pg/ml 時，對WMH 診斷的敏感度和特異度分別為60.20% 和70.60%。MPO 為WMH 的發(fā)生及治療提供了新的靶點。

WMH 發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫活性細(xì)胞的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活[8]，氧化應(yīng)激[1]、炎癥[1]均參與了WMH 的發(fā)生。MPO 是由兩條重鏈（55 ～64 kD）和兩條輕鏈（10 ～15 kD）組成，主要存在于單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞中，部分見于小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中[10]。MPO 是連接炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激的酶[11]，可催化氧化反應(yīng)，產(chǎn)生大量具有細(xì)胞毒性的活性氧，降低一氧化氮生物利用度[12]、損害血管內(nèi)皮功能[13]，造成組織氧化損傷，進而引起髓鞘破壞和神經(jīng)傳導(dǎo)受損。Etwehi 等[12]提出，MPO 可以通過上調(diào)蛋白磷酸酶2A 的表達(dá)降低內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶的磷酸化，減少一氧化氮的生成，一氧化氮有引起鄰近血管平滑肌細(xì)胞舒張、擴血管的作用[14-15]。推測MPO 通過氧化應(yīng)激、炎癥參與了WMH 的發(fā)生。

本研究發(fā)現(xiàn)，老年前期無大動脈狹窄的WMH患者，MPO mRNA 及蛋白表達(dá)量均增加，MPO 參與了WMH 的發(fā)生，且與WMH 嚴(yán)重程度相關(guān)。本研究不足之處，研究對象存在選擇偏倚，需設(shè)計嚴(yán)謹(jǐn)?shù)拇髽颖镜呐R床研究加以驗證。