藍(lán)師海綜述 洪 濤審校

蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）是臨床上常見的腦血管病，具有高病死率和高致殘率的特點(diǎn)[1]。從分子角度研究SAH 的發(fā)病機(jī)制是近年來SAH 研究的熱點(diǎn)。研究表明，微小RNA（microRNA，miRNA）作為重要的調(diào)節(jié)因子，與SAH的發(fā)病密切相關(guān)。本文就miRNA 在SAH 中的研究進(jìn)展做一綜述。

1 miRNA與SAH的關(guān)系

miRNA 是內(nèi)源性非編碼RNA，長(zhǎng)度在18～25 bp，可通過結(jié)合mRNA 的3'-UTR，調(diào)節(jié)基因的表達(dá)[2]。miRNA 依賴序列互補(bǔ)性的兩個(gè)原理負(fù)調(diào)控靶基因表達(dá)：①miRNA與靶基因mRNA完全互補(bǔ)，導(dǎo)致其降解；②miRNA與靶基因mRNA不完全互補(bǔ)，在蛋白質(zhì)翻譯水平抑制靶基因的表達(dá)。目前，已發(fā)現(xiàn)1 000個(gè)以上的miRNA，它們可調(diào)節(jié)30%以上的基因表達(dá)，并形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

研究證實(shí)miRNA 與SAH 的發(fā)病存在著緊密聯(lián)系。miRNA不但參與SAH后神經(jīng)細(xì)胞凋亡、炎癥發(fā)生、神經(jīng)突觸重塑和其它細(xì)胞功能，而且SAH 病人血液、腦脊液及大鼠SAH 模型大腦中動(dòng)脈均檢測(cè)到miRNA 的差異性表達(dá)。研究表明，miR-15a 升高可能導(dǎo)致血管表型的改變，從而導(dǎo)致腦血管痙攣（cerebral vasospasm，CVS）。持續(xù)高水平的miR-502-5p 與動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血（aneurysmal subarachnoid hemorrhage，aSAH）病人的預(yù)后不良有關(guān)[3]。上調(diào)miRNA-24 能夠抑制內(nèi)皮型一氧化氮合酶的表達(dá)，可導(dǎo)致SAH后CVS[4]。

2 SAH后miRNA的差異性表達(dá)

研究發(fā)現(xiàn)，SAH 病人或動(dòng)物模型存在差異性表達(dá)的miRNA，與SAH發(fā)生相關(guān)的信號(hào)通路受miRNA的調(diào)節(jié)[5]。

2.1 SAH動(dòng)物模型異常表達(dá)的miRNA 目前，SAH大鼠模型大腦中動(dòng)脈miR-30a 和miR-143 顯著上調(diào)[6]。Yang 等[7]在小鼠SAH 模型中發(fā)現(xiàn)褪黑素通過調(diào)控H19/miR-675/p53/細(xì)胞凋亡和H19/let-7a/神經(jīng)生長(zhǎng)因子/細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，對(duì)SAH 后早期腦損傷（early brain injury，EBI）有保護(hù)作用。Yu等[8]在SAH小鼠模型中發(fā)現(xiàn)p53/miR-22 的神經(jīng)保護(hù)作用可能調(diào)節(jié)SAH后炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。

2.2 SAH 病人異常表達(dá)的miRNA Su 等[9]發(fā)現(xiàn)SAH病人外周血miR-132 和miR-324 上調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)SAH 病人腦脊液66 個(gè)miRNA 表達(dá)增加，含miR-21和miR-221[10]。還有研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈瘤性SAH 病人腦脊液miR-92a 和let-7b 表達(dá)隨著時(shí)間延長(zhǎng)明顯降低，而miR-491 隨著時(shí)間延長(zhǎng)明顯增加[11]。最近，Stylli等[2]發(fā)現(xiàn)13個(gè)miRNA與SAH后CVS有關(guān)，包括miR-27a-3p、miR-516a-5p、miR-566和miR-1197。

3 與SAH相關(guān)的幾種主要miRNA的作用機(jī)制

3.1 miR-24 屬于miR-23～27～24 家族，在血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascularendothelialcells，VECs）中高表達(dá)，調(diào)控VECs 特異性基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-24 與內(nèi)皮型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase 3，NOS3）mRNA 3'-UTR結(jié)合，抑制NOS3的表達(dá)；SAH病人血miR-24和NOS3的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)；而且，CVS病人miR-24 表達(dá)水平升高，而NOS3 則相反[12]。在線miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示，NOS3為miR-24的靶點(diǎn)。

3.2 miR-206 研究顯示，卡英酸（kainic acid，KA）誘導(dǎo)的癲癇大鼠模型海馬組織miR-206的表達(dá)明顯降低；過表達(dá)miR-206，可作用于靶基因CCL2，降低癲癇發(fā)作活性，減少神經(jīng)元丟失[13]。研究表明，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是miR-206 的靶基因，調(diào)控焦慮相關(guān)行為和慢性收縮損傷引起的神經(jīng)性疼痛[14]。Zhao等[15]研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用SAH 大鼠模型，敲低miR-206，通過靶向作用腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，顯著改善神經(jīng)功能缺損、腦水腫和抑制神經(jīng)元凋亡，從而減輕EBI。

3.3 miR-502-5p 研究顯示，miR-502-5p 能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。Lai 等[16]研究表明，miR-502-5p可能是SAH的一個(gè)潛在的標(biāo)志物。miR-502-5p 作為SAH 潛在有價(jià)值的診斷指標(biāo)的機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

3.4 miR-15a 研究表明，miR-15a 參與缺血誘導(dǎo)的腦血管內(nèi)皮損傷或后肢缺血中內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells，ECs）和VSMCs 的血管生成或增殖。此外，miR-15a 還與缺血后的腦血管保護(hù)密切相關(guān)。Zheng 等[17]研究發(fā)現(xiàn)，miR-15a 通過誘導(dǎo)KLF4 上調(diào)，抑制ECs 和VSMCs 的增殖和血管生成。最近，Kik?kawa 等[18]研究顯示，SAH 后3～5 d 腦脊液和血漿miR-15a顯著升高，而KLF4表達(dá)顯著降低。

4 miRNA在治療應(yīng)用方面的局限性

盡管，miRNA 及其相關(guān)的信號(hào)通路在SAH發(fā)病過程中具有重要作用，但能否用于臨床并發(fā)癥的治療靶點(diǎn)還需很長(zhǎng)路要走。一個(gè)特定的miRNA 可以有數(shù)百個(gè)靶基因，而一個(gè)單獨(dú)的基因通常有多個(gè)靶向miRNA。但多個(gè)靶基因具體到哪一個(gè)才是被miRNA所影響并參與SAH發(fā)病，仍未有效解決。從治療方面講，miRNA 可以同時(shí)調(diào)控多種蛋白質(zhì)的表達(dá)，但是這既有利亦有弊：一方面，miRNA 能夠調(diào)控同SAH 相關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)；另一方面，與疾病無關(guān)的mRNA 可能也同時(shí)受到影響，產(chǎn)生不可預(yù)知的副作用。除此之外，對(duì)于miRNA 抑制劑的應(yīng)用，抑制劑是否能夠作用除miRNA外的其它靶點(diǎn)，這也是一個(gè)問題。因此，miRNA 做為應(yīng)用于SAH 的診治，仍需要解決以下幾個(gè)問題：①精確下游的靶mRNA；②如何有效避免miRNA治療所帶來的副作用；③促進(jìn)劑與抑制劑作用的具體靶點(diǎn)；④抑制劑通過血腦屏障率低；⑤抑制劑與已進(jìn)入臨床藥物藥理學(xué)相互影響的問題；⑥miRNA的脫靶問題。

綜上所述，miRNA 在SAH發(fā)病過程中具有重要的作用。但是，從技術(shù)角度來說，因組織含量少，特異性要求高等，使miRNA的檢測(cè)并不十分容易。目前，miRNA 的檢測(cè)方法主要是Northern blot、PCR 和芯片檢測(cè)。隨著技術(shù)的發(fā)展和研究的深入，會(huì)有更多的miRNA被證實(shí)參與SAH的發(fā)生、發(fā)展過程。