?？?綜述，李超 審 校

（天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，天津 300211）

微小RNA（microRNA，miRNA）是一類長度約為18~25 個核苷酸的非編碼蛋白質(zhì)、單鏈小分子RNA[1]，主要是通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)控影響目的基因的表達(dá)[2]。miR-497 是microRNA 的一種，在多種實(shí)體腫瘤組織中呈低表達(dá)，主要表現(xiàn)為基因缺失、甲基化或組蛋白修飾的改變[3]。因此miR-497 對其靶基因的抑制作用減弱與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移以及耐藥密切相關(guān)。耐藥性是限制各種癌癥患者存活率的主要問題，而且耐藥性的機(jī)制比較復(fù)雜，關(guān)于miR-497 與腫瘤耐藥性研究的報道較少。本文針對miR-497 在人類實(shí)體腫瘤研究及耐藥方面最新進(jìn)展作一綜述。

1 miR-497 簡介

miR-497 是miR-15 家族中的一員，該家族成熟的miRNAs 5′端均含有一組高度保守的AGCAGC序列。在人體的組織和細(xì)胞中，呈中至高豐度的表達(dá)[4]。人的miR-497 由位于17 號染色體短臂上13.1（17q13.1）的miR-497HG（基因ID：100506755）基因的第一個內(nèi)含子編碼，在幾乎所有人類的器官和組織中均有分布[5]。miR497 通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期或靶向其他信號通路發(fā)揮生物學(xué)功能，通常發(fā)揮抑癌基因的作用。

2 miR-497 在惡性實(shí)體腫瘤中的研究

2.1 miR-497 在女性生殖道腫瘤中的研究 卵巢癌是婦科惡性腫瘤死亡的主要原因。miR-497 在人卵巢癌組織中下調(diào)[6]，miR-497 通過靶向結(jié)合SMURF1 進(jìn)而抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲[7]。miR-497 在宮頸癌組織中呈低表達(dá)狀態(tài)。miR-497通過靶向胰島素樣生長因子1 受體（IGF-1R）和轉(zhuǎn)酮醇酶（TKT）抑制宮頸癌細(xì)胞的侵襲、遷移和耐藥性[8]，過表達(dá)的miR-497 在HeLa 細(xì)胞系中可以通過靶向結(jié)合細(xì)胞周期蛋白E1（CCNE1）來抑制細(xì)胞增殖[5]。

2.2 miR-497 在消化道腫瘤中的研究 miR-497在消化道腫瘤中如食管癌、胃癌、胰腺癌、結(jié)腸直腸癌、肝細(xì)胞癌中[9]均呈低表達(dá)狀態(tài)。miR-497 通過調(diào)節(jié)ATG14 來促進(jìn)發(fā)生自噬并誘導(dǎo)細(xì)胞抵抗，顯著上調(diào)IC50，增加細(xì)胞凋亡。抑制miR-497 則促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖和生長[11]。miR-497 直接靶向并抑制PDK3的表達(dá)GC 細(xì)胞DNA 合成，影響細(xì)胞周期，抑制GC細(xì)胞的增殖和生長[12]。在胰腺癌的研究中[13]，miR-497 直接靶向IGF-1R，抑制了胰腺癌細(xì)胞的增殖以及侵襲，miR-497 可作為指導(dǎo)胰腺癌的TNM 分期的新的生物標(biāo)志物。結(jié)直腸癌中[14]，miR-497 通過靶向fos 相關(guān)抗原-1 抑制結(jié)腸直腸癌細(xì)胞中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移。在肝細(xì)胞癌的研究中表明miR-497 負(fù)性調(diào)控檢測點(diǎn)激酶1（CHEK1），增益和損失功能的研究表明，miR-497 在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮腫瘤抑制功能，并提出miR-497 是肝細(xì)胞癌治療的潛在分子靶標(biāo)。這些結(jié)果表明miR-497 可能是潛在有效的基因治療靶標(biāo)[15]。

2.3 miR-497 在骨腫瘤中的研究 miR-497 在骨肉瘤中呈低表達(dá)狀態(tài)，miR-497 的下調(diào)與骨肉瘤患者的突觸核蛋白γ（SNCG）的上調(diào)相關(guān)，miR-497 的下調(diào)可能通過SNCG mRNA 的上調(diào)導(dǎo)致骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移[16]。在體外實(shí)驗(yàn)中miR-497 抑制骨肉瘤細(xì)胞系MG63 細(xì)胞增殖、集落形成、遷移和侵襲，并在細(xì)胞周期的G0/G1 期誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞阻滯。體內(nèi)研究的結(jié)果表明，過表達(dá)miR-497 在裸鼠模型中抑制腫瘤生長?？梢妋iR-497 在骨肉瘤進(jìn)展中發(fā)揮腫瘤抑制作用，并可以作為骨肉瘤新的治療靶標(biāo)[17]。

2.4 miR-497 在泌尿系統(tǒng)腫瘤中的研究 在膀胱癌中，通過深度測序檢測到聚簇miRNA 的異常表達(dá)，其中miR-497 的表達(dá)下調(diào)，miR-497 的下調(diào)可以促進(jìn)膀胱癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。成熟miR-497 的轉(zhuǎn)染可以顯著抑制癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，這表明miR-497 簇在膀胱癌中作為腫瘤抑制物起作用[18]。在腎細(xì)胞癌中[19]，miR-497 的表達(dá)顯著降低。降低的miR-497 表達(dá)與腫瘤分期、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。較低表達(dá)的miR-497 的患者有較差的不良預(yù)后，體外實(shí)驗(yàn)中miR-497 的過表達(dá)顯著抑制腎癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。在前列腺癌中[20]，miR-497 抑制前列腺癌細(xì)胞生長并增加細(xì)胞凋亡，表明miR-497 是未來治療前列腺癌潛在的藥物選擇。

2.5 miR-497 在頭頸部腫瘤中的研究 頭頸部鱗狀細(xì)胞癌是全世界第六大最常見的癌癥[21]。在口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）中，miR-497 的表達(dá)水平顯著增加，而SMAD7 的水平顯著降低。因此，miR-497和SMAD7 在OSCC 標(biāo)本中呈負(fù)相關(guān)。生物信息學(xué)分析表明，miR-497 靶向結(jié)合SMAD7 mRNA 的3′UTR 可以抑制其表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞侵襲[22]。miR-497 在甲狀腺癌[23]組織中下調(diào)，并且miR-497水平與晚期臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。在鼻咽癌中，miR-497 呈低表達(dá)狀態(tài)[24]，通過靶向肌動蛋白結(jié)合蛋白（ANLN）和熱休克70 kD 蛋白4（HSPA4L）進(jìn)而抑制鼻咽癌的癌癥表型，具有抑癌基因的作用。

2.6 miR-497 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的研究 miR-497在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中研究尚具有爭議，Lu 等[25]證明miR-497 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)水平下調(diào)，患者總體生存率下降，提示miR-497 低表達(dá)與疾病不良進(jìn)展相關(guān)。Regazzo 等[26]指出，通常膠質(zhì)母細(xì)胞瘤被認(rèn)為是最常見和最惡性的神經(jīng)膠質(zhì)瘤亞型，miR-497 在此組織中表達(dá)水平更低，疾病進(jìn)展更迅速。Ji等[27]報道，miR-497 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織表達(dá)水平下調(diào)，并且與預(yù)后不良相關(guān)。miR-497 可以靶向抑制CCNE1 表達(dá)從而抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖，也有報道與此相矛盾[28-29]。Lan 等[28]發(fā)現(xiàn)miR-497 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)上調(diào)，低氧環(huán)境誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增加miR-497 表達(dá)，其可能的機(jī)制與低氧應(yīng)答反應(yīng)元件激活有關(guān)。Zhu 等[29]報道，miR-497 表達(dá)水平在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中上調(diào)，miR-497 通過靶向mTOR/Bcl-2 途徑使這些細(xì)胞對替莫唑胺產(chǎn)生耐藥性。因此，miR-497 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)尚不清楚，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本研究，并明確神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織的基因表達(dá)譜，另外，需要制定統(tǒng)一的全球標(biāo)準(zhǔn)，涵蓋樣本標(biāo)準(zhǔn)化的采集、儲存、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案制定、miRNA 提取、純化、分析和鑒定。而且多中心研究和隊列研究必須取得一致和穩(wěn)定的結(jié)果，這樣才能服務(wù)于臨床。

3 miR-497 在惡性實(shí)體腫瘤耐藥中的研究

近些年腫瘤的治療手段有了長足的進(jìn)展，放療、化療、分子靶向治療、生物治療、免疫治療等蓬勃發(fā)展，但綜合來看，晚期腫瘤患者的生存期并沒有顯著的延長，腫瘤耐藥是生存期縮短的一個主要原因[30]。已有研究表明，表觀遺傳改變在耐藥性中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。在獲得耐藥性的過程中，相關(guān)基因的CpG 島發(fā)生DNA 甲基化而引起基因表達(dá)沉默[31]。由于DNA 甲基化是一個可逆過程，去甲基化試劑能夠通過逆轉(zhuǎn)DNA 的高甲基化狀態(tài)，從而恢復(fù)癌細(xì)胞對抗腫瘤藥物的敏感性。低劑量DNA 去甲基化劑可以上調(diào)miR-497 的表達(dá)，進(jìn)而能夠靶向腫瘤干細(xì)胞，提高了癌細(xì)胞的化學(xué)敏感性。已有資料顯示，miR-497 作為潛在的治療靶點(diǎn)在多種腫瘤上已得到了廣泛的研究和報道[32]。關(guān)于miR-497 的表達(dá)、靶基因位點(diǎn)、生物學(xué)機(jī)制及其在腫瘤治療中發(fā)揮的作用仍是研究的熱點(diǎn)。

3.1 miR-497 在消化道腫瘤耐藥中的研究 在食管癌細(xì)胞系KYSE180 中，經(jīng)過無毒的低劑量地西他濱治療后，食管癌細(xì)胞的化療敏感性增強(qiáng)，表明DNA 去甲基化試劑可以靶向腫瘤干細(xì)胞并通過調(diào)節(jié)miR-497 的內(nèi)源性表達(dá)來逆轉(zhuǎn)它們的化療耐藥性。miR-497 在結(jié)直腸癌中表達(dá)下調(diào)，結(jié)直腸癌細(xì)胞對新輔助化療藥物的敏感性明顯降低[33]。miR-497在耐藥的結(jié)直腸癌細(xì)胞系顯示出多種生物學(xué)特性，增加奧沙利鉑、5-FU 化療敏感性。miR-497 作為單個miRNA 可以抑制細(xì)胞中WEE1、CCNE1 等多個靶點(diǎn)，miRNA 的療法可能是改善耐藥結(jié)直腸癌患者治療效果的一種有希望的策略[34]。在肝細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)miR-497 可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞多種耐藥基因的表達(dá)[35]，如BCL-2，BCL-2 基因是表達(dá)抗凋亡蛋白的，BCL-2 表達(dá)的增加可以促進(jìn)腫瘤的耐藥，抑制BCL-2 基因的表達(dá)，蛋白合成減少，增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性。在胃癌的耐藥細(xì)胞株研究中發(fā)現(xiàn)增加miR-497 mimic 可以下調(diào)BCL-2/Bax的比值，下調(diào)耐藥基因MDR1、BCRP、MRP1 以及其編碼蛋白P-gp、BCRP、MRP1 的表達(dá)，并增加了胃癌耐藥細(xì)胞株對順鉑的敏感性，促進(jìn)了細(xì)胞凋亡，從而起到逆轉(zhuǎn)細(xì)胞耐藥的功能[36]。

3.2 miR-497 在女性生殖道腫瘤耐藥中的研究低劑量DNA 去甲基化試劑廣泛調(diào)節(jié)癌細(xì)胞對順鉑的敏感性，miR-497 表達(dá)升高，卵巢癌細(xì)胞A2780 對地西他濱的化療抵抗降低[32]。宮頸癌HeLa 細(xì)胞對紫杉醇、5-FU 的敏感性均增加，這些結(jié)果表明DNA去甲基化試劑可以克服多種癌癥的化學(xué)耐藥性。Xu等[32]發(fā)現(xiàn)miR-497 啟動子的高甲基化降低了耐藥卵巢癌細(xì)胞和腫瘤組織中miR-497 的表達(dá)水平。miR-497 的過度表達(dá)使耐藥卵巢腫瘤對順鉑治療敏感。因此，miR-497 可能作為一種治療性的補(bǔ)充藥物來增加卵巢癌對順鉑的治療反應(yīng)。mTOR 是miR-497的下游靶點(diǎn)，miR-497 通過靶向mTOR/P70S6K 信號通路顯著降低mTOR 表達(dá)增加順鉑的化療敏感性，雙熒光素實(shí)驗(yàn)證實(shí)了mTOR 是miR-497 的既定靶點(diǎn)。研究表明mTOR 信號通路是耐藥性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器，許多mTOR 抑制劑正在研發(fā)中。

3.3 miR-497 在乳腺癌耐藥中的研究 研究發(fā)現(xiàn)，miR-497 在乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中表達(dá)水平顯著低于乳腺癌細(xì)胞系，實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-497 可抑制乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，miR-497 可與PD-L1 結(jié)合并負(fù)向調(diào)控PD-L1 表達(dá)。表明miR-497 可通過靶向PD-L1 抑制乳腺癌紫杉醇耐藥細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)凋亡[37]。

以上結(jié)果表明，miR-497 可以靶向BCL-2、mTOR、PD-L1 等多種耐藥基因的表達(dá)，對多種實(shí)體瘤尤其是消化道腫瘤耐藥的治療具有潛在的臨床應(yīng)用價值。但是以miRNA 為基礎(chǔ)的腫瘤耐藥方面治療仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)，首先是如何改進(jìn)miRNA的遞送，提高miRNA 生物利用度以及改善miRNA靶向腫瘤細(xì)胞的特異性等問題。其次是miRNA 在腫瘤耐藥的治療方面資料較少，其療效和不良反應(yīng)尚未見大量報道，對于臨床的大規(guī)模應(yīng)用還需要更深入的研究。

綜上所述，miR-497 參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、耐藥等多個過程，機(jī)制復(fù)雜，其具有抑癌基因的特征；在耐藥細(xì)胞系中miR-497 的恢復(fù)可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的化療敏感性，表明了miR-497 在提高實(shí)體腫瘤化療藥物的敏感性方面具有很廣闊的臨床應(yīng)用前景。因此，miR-497 有潛力成為實(shí)體腫瘤治療的靶標(biāo)，這對于提高患者的生存率和改善患者的生活質(zhì)量意義重大，但在miR-497 廣泛應(yīng)用到臨床前還需要更深一步的研究。