馮曉川，徐延昭，張靜，張蕊*

1.北京積水潭醫(yī)院 中藥房，北京 100035；

2.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050

恒古骨傷愈合劑由杜仲、三七、人參、紅花、陳皮、黃芪、洋金花、鉆地風(fēng)和鱉甲加工而成，具有活血益氣、補(bǔ)肝腎、接骨續(xù)筋、消腫止痛、促進(jìn)骨折愈合的臨床功效，主要用于新鮮骨折及陳舊骨折、股骨頭壞死、骨關(guān)節(jié)病、腰椎間盤突出癥，現(xiàn)收載于《中華人民共和國藥典》2020 年版（一部）[1]。其中僅對(duì)陳皮所含成分橙皮苷進(jìn)行了定量控制，也僅檢索到對(duì)該制劑所含藥味進(jìn)行薄層鑒別或1～2 個(gè)成分進(jìn)行含量測(cè)定的相關(guān)報(bào)道[2-3]。中藥及其復(fù)方制劑是多組分協(xié)同發(fā)揮療效的，但現(xiàn)有質(zhì)量控制手段不能涵蓋多組分檢測(cè)，更不能有效保證其療效。近年來，高效液相色譜-一測(cè)多評(píng)法（HPLCQAMS）越來越多地運(yùn)用到中藥及其復(fù)方制劑質(zhì)量控制研究中，該方法通過選取質(zhì)穩(wěn)價(jià)廉的1 個(gè)成分作為內(nèi)參物，建立其與其他成分的相對(duì)校正因子（RCF），在一定程度上降低了檢驗(yàn)成本，為多成分質(zhì)量控制方法的應(yīng)用與普及提供了便利條件[4-5]。同時(shí)，化學(xué)計(jì)量學(xué)方法通過對(duì)多批樣品中多個(gè)成分含量數(shù)據(jù)進(jìn)行提取和降維分析，挖掘繁雜數(shù)據(jù)間的內(nèi)在關(guān)系，找出可能對(duì)質(zhì)量控制有顯著貢獻(xiàn)的主要成分[6-7]。本研究選取恒古骨傷愈合劑中君藥紅花和三七、臣藥人參和杜仲、佐藥陳皮為研究對(duì)象，分析研究其所含成分，最終以紅花的主要成分羥基紅花黃色素A 和紅花黃色素A，三七和人參所含主要共有成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1，杜仲所含主要有效成分京尼平苷酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷，陳皮所含主要藥效成分蕓香柚皮苷、橙皮苷和川陳皮素為指標(biāo)，同時(shí)以出峰時(shí)間居中、質(zhì)量穩(wěn)定的羥基紅花黃色素A 作為內(nèi)參物，采用HPLC-QAMS 對(duì)上述11 個(gè)成分含量進(jìn)行同步測(cè)定，同時(shí)通過化學(xué)計(jì)量學(xué)方法挖掘多指標(biāo)成分含量數(shù)據(jù)間潛在關(guān)系，為提升恒古骨傷愈合劑的質(zhì)量控制水平提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AT 型高效液相色譜儀［島津儀器（中國）有限公司］；e2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；XS205型電子分析天平（Mettler-Toledo公司）。

1.2 試藥

對(duì)照品京尼平苷酸（批號(hào)：111828-201805，純度：98.1%）、京尼平苷（批號(hào)：110749-201919，純度：97.1%）、松脂醇二葡萄糖苷（批號(hào)：111537-202107，純度：93.4%）、三七皂苷R1（批號(hào)：110745-201921，純度：90.4%）、人參皂苷Rg1（批號(hào)：110703-202034，純度：94.0%）、人參皂苷Rb1（批號(hào)：110704-202129，純度：94.3%）、羥基紅花黃色素A（批號(hào)：111637-202111，純度：96.8%）、橙皮苷（批號(hào)：110721-202019，純度：95.3%）、川陳皮素（批號(hào)：112055-202102，純度：99.7%）均購于中國食品藥品檢定研究院；紅花黃色素A（批號(hào)：PRF8101143，純度：98.5%）、蕓香柚皮苷（批號(hào)：PRF9062802，純度：99.8%）均購于成都普瑞法科技開發(fā)有限公司；乙腈和磷酸為色譜純；水為純凈水；其余試劑均為分析純。

恒古骨傷愈合劑（規(guī)格：每瓶25 mL）來源于賽靈藥業(yè)科技集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)分別為20210519、20210521、20210522、20210621、20210622、20210707、20210714、20210909、20210911、20210926、20211119、20211124、20211126、20211127、20211219，編號(hào)分別為S1～S15。

2 方法與結(jié)果

2.1 混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、紅花黃色素A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、川陳皮素并用50%甲醇制成質(zhì)量濃度分別為0.178、0.192、0.234、0.950、0.378、0.336、0.442、0.270、0.418、1.310、0.116 mg·mL-1的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，再進(jìn)一步用50%甲醇稀釋20 倍得質(zhì)量濃度分別為8.90、9.60、11.70、47.50、18.90、16.80、22.10、13.50、20.90、65.50、5.80μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取恒古骨傷愈合劑5 mL，用50%甲醇定容至25 mL，搖勻，即得恒古骨傷愈合劑供試品溶液。取按處方比例及工藝制備的缺杜仲、缺三七和人參、缺紅花、缺陳皮的陰性樣品，按前述方法制得陰性樣品溶液。

2.3 色譜條件及專屬性試驗(yàn)

色譜柱：Alltima C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫為30 ℃；以0.1%磷酸-乙腈（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0～11 min，10%B；11～21 min，10%～24%B；21～36 min，24%～30%B；36～47 min，30%～50%B；47～62 min，50%～64%B；62～70 min，64%～10%B）；流速為1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長分別為235 nm[8-10]（0～21 min 檢測(cè)京尼平苷酸、京尼平苷和松脂醇二葡萄糖苷）、203 nm[11-15]（21～36 min 檢測(cè)三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1）、403 nm[16-18]（36～47 min 檢測(cè)羥基紅花黃色素A 和紅花黃色素A）和283 nm[19-22]（47～70 min 檢測(cè)蕓香柚皮苷、橙皮苷和川陳皮素）；進(jìn)樣量體積為10 μL。在上述色譜條件下進(jìn)樣混合對(duì)照品溶液及供試品溶液，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果顯示，恒古骨傷愈合劑供試品溶液中11 個(gè)成分與相鄰色譜峰分離良好，陰性供試品無干擾。

圖1 混合對(duì)照品和恒古骨傷愈合劑供試品HPLC圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分別用50%甲醇稀釋200、100、40、20、10、4倍，得6個(gè)系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液1～6，依次按2.3 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸（表1）。結(jié)果表明，對(duì)照品在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系具有良好線性關(guān)系。

表1 恒古骨傷愈合劑中11個(gè)成分的線性關(guān)系

2.4.2 精密度試驗(yàn) 按2.3 項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣恒古骨傷愈合劑（S1）同一份供試品溶液6次，11個(gè)成分峰面積的RSD為0.76%～1.41%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取一份恒古骨傷愈合劑（S1）供試品溶液，于0、2、4、7、12、24、36 h 按2.3項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，得11 個(gè)成分峰面積的RSD為0.74%～1.39%，表明恒古骨傷愈合劑供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.2 項(xiàng)下方法制備6 份恒古骨傷愈合劑（S1）供試品溶液，按2.3 項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)分析，用外標(biāo)法計(jì)算含量，得11 個(gè)成分含量的RSD為1.01%～1.89%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取恒古骨傷愈合劑（S1）9 份，每份2.5 mL，均分成3 組，精密加混合對(duì)照品溶液（京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、紅花黃色素A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、川陳皮素質(zhì)量濃度分別為0.147、0.178、0.209、0.704、0.326、0.283、0.395、0.232、0.351、0.896、0.104 mg·mL-1）0.8、1.0、1.2 mL，每個(gè)質(zhì)量濃度3份，再按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法檢測(cè)，得回收率及RSD 分別為96.81%（0.60%）、98.33%（1.43%）、98.72%（1.17%）、100.12%（0.77%）、98.69%（1.25%）、98.47%（1.25%）、99.13%（0.92%）、96.83%（0.78%）、97.87%（1.63%）、100.21%（0.71%）、98.35%（1.18%）。

2.5 HPLC-QAMS

2.5.1 RCF 計(jì)算 本研究以羥基紅花黃色素A 為內(nèi)參物計(jì)算京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、紅花黃色素A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、川陳皮素的RCF。取線性關(guān)系考察中的6 個(gè)對(duì)照品溶液進(jìn)樣，按公式（1）計(jì)算各成分RCF（表2）。

表2 恒古骨傷愈合劑中各成分的RCF

式中?為RCF、W為質(zhì)量濃度、A為峰面積、k為內(nèi)參物、s為其他待測(cè)成分。

2.5.2 儀器與色譜柱對(duì)RCF影響的考察 本研究考察了2 個(gè)品牌的色譜儀（LC-20AT 型、e2695 型）及3種色譜柱（Alltima C18、Nucleosil C18和Aquasil C18，規(guī)格均為250 mm×4.6 mm，5 μm）對(duì)RCF 的影響。在2.3 項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣混合對(duì)照品溶液，結(jié)果測(cè)得各成分RCF 的RSD 為0.70%～1.55%（表3），說明儀器與色譜柱對(duì)RCF無影響。

表3 不同HPLC儀及色譜柱對(duì)恒古骨傷愈合劑各成分RCF的影響

2.5.3 流速對(duì)RCF 影響的考察 其他色譜條件不變，流速分別為0.8、1.0、1.2 mL·min-1時(shí)，進(jìn)樣對(duì)照品溶液，結(jié)果測(cè)得各成分RCF 的RSD 為0.37%～1.62%（表4），說明流速對(duì)RCF無影響。

表4 流速對(duì)恒古骨傷愈合劑各成分RCF的影響

2.5.4 柱溫對(duì)RCF 影響的考察 其他色譜條件不變，采用柱溫為25、30、35 ℃條件下，進(jìn)樣對(duì)照品溶液，結(jié)果測(cè)得各成分RCF 的RSD 在0.37%～1.69%（表5），說明柱溫對(duì)RCF無影響。

表5 柱溫對(duì)恒古骨傷愈合劑RCF的影響

2.5.5 色譜峰定位的考察 本研究為對(duì)待測(cè)成分色譜峰進(jìn)行定位，考察了色譜儀（LC-20AT 型、e2695 型）及色譜柱（Alltima C18、Nucleosil C18和Aquasil C18）對(duì)相對(duì)保留時(shí)間值（RRT）的影響。在2.3 項(xiàng)下色譜條件下，進(jìn)樣對(duì)照品溶液，結(jié)果測(cè)得京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、紅花黃色素A、蕓香柚皮苷、橙皮苷、川陳皮素和羥基紅花黃色素相對(duì)保留時(shí)間的RSD 為0.57%～1.61%（表6），表明該法可以對(duì)待測(cè)成分色譜峰進(jìn)行準(zhǔn)確定位。

表6 儀器及色譜柱對(duì)恒古骨傷愈合劑各成分RRT的影響

2.6 2種方法測(cè)定含量的對(duì)比

取15 批恒古骨傷愈合劑（S1～S15），根據(jù)2.2項(xiàng)下方法制備恒古骨傷愈合劑供試品溶液，按2.3項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣分析，分別運(yùn)用ESM 和HPLCQAMS 計(jì)算恒古骨傷愈合劑中11 個(gè)成分的含量。結(jié)果說明2 種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表7），表明HPLC-QAMS 可用于恒古骨傷愈合劑中11 個(gè)成分的含量測(cè)定。

表7 QAMS與ESM對(duì)恒古骨傷愈合劑中11個(gè)成分含量的測(cè)定結(jié)果（n=3） mg·g-1

3 恒古骨傷愈合劑的化學(xué)計(jì)量學(xué)質(zhì)量分析

3.1 聚類分析（CA）

將15 批恒古骨傷愈合劑中11 個(gè)成分QAMS 所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行CA（歐氏距離的組間聯(lián)接），見圖2。結(jié)果顯示，當(dāng)間距為15 時(shí)，15 批樣品聚為3 類，S4、S7、S2、S5、S3、S6、S1共7 批樣品聚為一類，S8～S10 共3 批樣品聚為一類，S11～S15共5批樣品聚為一類。

圖2 15批恒古骨傷愈合劑樣品聚類樹狀圖

3.2 主成分分析（PCA）

運(yùn)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)2.6項(xiàng)下QAMS測(cè)定結(jié)果進(jìn)行PCA，得各主成分特征值、方差貢獻(xiàn)率和累積方差貢獻(xiàn)率（表8）及成分矩陣（表9）。由表8 可知，特征值＞1 的有2 個(gè)主成分對(duì)應(yīng)方差的貢獻(xiàn)率分別為66.169%、22.223%，累積方差貢獻(xiàn)率為88.393%，表明選取2 個(gè)主成分即可代表恒古骨傷愈合劑中11 個(gè)成分88.393%的信息，具有較好的代表性。表9 可以看出，第一主成分的信息來于京尼平苷酸、松脂醇二葡萄糖苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、紅花黃色素A、蕓香柚皮苷、橙皮苷和川陳皮素的綜合，第二主成分的信息來于京尼平苷、三七皂苷R1和羥基紅花黃色素A 的綜合。同時(shí)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SIMCA 14.1 建立PCA 模型，得15 批恒古骨傷愈合劑樣品PCA 得分圖（圖3），共提取出2 個(gè)主成分，模型對(duì)X變量可解釋率（R2X）為0.884，超過0.5，所建立的模型穩(wěn)定性較高。從圖3 可以看出，S1～S7、S8～S10 及S11～S15 分別呈現(xiàn)一定關(guān)聯(lián)性。

圖3 15批恒古骨傷愈合劑樣品PCA 得分

表8 恒古骨傷愈合劑中特征值、方差貢獻(xiàn)率和累積方差貢獻(xiàn)率

表9 恒古骨傷愈合劑中11個(gè)成分的成分矩陣

3.3 PLS-DA

PLS-DA通過對(duì)數(shù)據(jù)的分析能夠查找出引起產(chǎn)品質(zhì)量差異的特征成分，SIMCA 14.1 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)2.6項(xiàng)下QAMS含量數(shù)據(jù)運(yùn)行PLS-DA 程序，見圖4。結(jié)果R2X為0.896，模型對(duì)Y變量可解釋率（R2Y）為0.843，預(yù)測(cè)能力參數(shù)（Q2）為0.784，理論上R2Y、Q2數(shù)值越接近1，說明模型越好，通常兩者超過50%時(shí)所建立的模型穩(wěn)定可靠、預(yù)測(cè)能力強(qiáng)。由圖4 可以看出，15 批恒古骨傷愈合劑的含量數(shù)據(jù)點(diǎn)均落在95%置信區(qū)間內(nèi)，根據(jù)分布可分為3 類，與CA 和PCA結(jié)果一致。

圖4 15批恒古骨傷愈合劑樣品的PLS-DA模型得分圖

對(duì)建立的PLS-DA 模型進(jìn)行200 次置換檢驗(yàn)（圖5），結(jié)果顯示，累積方差值（R2）擬合直線Y軸截距為0.092＜0.3；Q2擬合直線Y軸截距為-0.274，Q2為負(fù)數(shù)，且最右邊的R2和Q2值均高于左側(cè)，表明所構(gòu)建的PLS-DA 模型不存在過度擬合，預(yù)測(cè)能力好，可有效判別分析15 批恒古骨傷愈合劑的質(zhì)量差異。根據(jù)變量重要性投影（VIP）值篩選影響藥物炮制前后組方恒古骨傷愈合劑化學(xué)成分差異的標(biāo)志性成分（圖6），結(jié)果VIP 值＞1 的有5 個(gè)成分，即成分7（羥基紅花黃色素A，VIP 值=1.446）、成分4（三七皂苷R1，VIP值=1.351）、成分10（橙皮苷，VIP值=1.258）、成分2（京尼平苷，VIP值=1.138）、成分5（人參皂苷Rg1，VIP 值=1.067）對(duì)恒古骨傷愈合劑樣品質(zhì)量的影響較大，可能是影響恒古骨傷愈合劑產(chǎn)品質(zhì)量的主要潛在標(biāo)志物。

圖5 15批恒古骨傷愈合劑PLS-DA模型置換檢測(cè)結(jié)果

圖6 15批恒古骨傷愈合劑樣品中11個(gè)成分的VIP（, n=15）

4 討論

4.1 檢測(cè)指標(biāo)性成分的選擇

恒古骨傷愈合劑配方中君藥包括紅花和三七，有活血化瘀的功效；人參、黃芪益氣健脾，杜仲、鱉甲補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨，4 味藥合為臣藥；陳皮理氣和中，鉆地風(fēng)舒筋活絡(luò)，洋金花止痛，三者為佐藥。諸藥合用，共奏活血益氣、益肝腎、接骨續(xù)筋、消腫止痛之功效。本研究綜合考慮，以君藥紅花和三七，臣藥人參和杜仲，佐使藥陳皮為考察對(duì)象，分析其所含成分，選取主要成分、特征性成分或主要藥效成分為檢測(cè)指標(biāo)。最終本研究確定以京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、紅花黃色素A、蕓香柚皮苷、橙皮苷和川陳皮素為檢測(cè)指標(biāo)。

4.2 供試品溶液制備

本研究在制備供試品溶液時(shí)，考慮到該制劑在制備時(shí)已進(jìn)行了提取濃縮，且該制劑為液體制劑，參考相關(guān)文獻(xiàn)，首先對(duì)提取溶劑進(jìn)行了篩選[9,12-14,16-17,19-22]：甲醇、70%甲醇、60%甲醇、50%甲醇和25%甲醇，并采用直接稀釋法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)50%甲醇提取時(shí)，所測(cè)11 個(gè)成分的提取率較高。進(jìn)而采取超聲和加熱回流提取方式進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)50%甲醇超聲提取和直接稀釋時(shí)11 個(gè)成分的提取率相當(dāng)。綜合考慮，最終確定以50%甲醇直接稀釋為恒古骨傷愈合劑供試品溶液最佳制備方式。

4.3 化學(xué)計(jì)量學(xué)分析結(jié)果評(píng)價(jià)

化學(xué)計(jì)量學(xué)運(yùn)用數(shù)學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)等學(xué)科理論和方法，通過解析化學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)，發(fā)掘多變量復(fù)雜數(shù)據(jù)中存在的關(guān)聯(lián)關(guān)系，CA、PCA、非線性映射等無監(jiān)督統(tǒng)計(jì)方法和PLS、PLS-DA、正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA）等有監(jiān)督統(tǒng)計(jì)方法近年來廣泛應(yīng)用于中藥及其制劑的研究中。CA利用同類樣品彼此相似，在多維空間中彼此距離較小的原理，達(dá)到對(duì)未知樣本進(jìn)行分類的目的。本研究對(duì)QAMS 測(cè)定結(jié)果進(jìn)行CA，15 批恒古骨傷愈合劑聚為3 類，即S4、S7、S2、S5、S3、S6 和S1 聚為一類，S8～S10 聚為一類，S12～S15 聚為一類，表明恒古骨傷愈合劑具有明顯分類趨勢(shì)。PCA 將具有一定相關(guān)性的變量通過數(shù)據(jù)降維，排除眾多化學(xué)信息共存中相互重疊的信息，在保存大量信息的同時(shí)降低了變量個(gè)數(shù)，對(duì)成分復(fù)雜的中藥及其制劑研究具有重要意義。本研究PCA 結(jié)果顯示，選取2 個(gè)主成分即可代表恒古骨傷愈合劑中11 個(gè)成分88.393%的信息，具有較好的代表性，同時(shí)15 批樣品分類與CA 結(jié)果一致。PLS-DA 通過模式識(shí)別發(fā)掘引起產(chǎn)品質(zhì)量差異的特征成分。本研究對(duì)11 個(gè)成分含量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行PLS-DA，將PLS-DA 模型進(jìn)行200 次置換檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，所構(gòu)建的PLS-DA 模型不存在過度擬合，預(yù)測(cè)能力好，可有效判別分析15 批恒古骨傷愈合劑的質(zhì)量差異，篩選出羥基紅花黃色素A、三七皂苷R1、橙皮苷、京尼平苷和人參皂苷Rg1為影響產(chǎn)品質(zhì)量差異的標(biāo)志性化學(xué)成分，為不斷提升恒古骨傷愈合劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

本研究采用HPLC-QAMS 建立了恒古骨傷愈合劑11 個(gè)指標(biāo)成分定量質(zhì)量控制模式，對(duì)市場流通的15 批樣品進(jìn)行檢測(cè)，通過方法學(xué)驗(yàn)證及2 種方法的對(duì)比，結(jié)果顯示2 種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；又通過化學(xué)計(jì)量學(xué)識(shí)別模式對(duì)多指標(biāo)成分含量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行提取、降維分析，發(fā)現(xiàn)羥基紅花黃色素A、三七皂苷R1、橙皮苷、京尼平苷和人參皂苷Rg1可能是影響產(chǎn)品質(zhì)量差異性的主要物質(zhì)性成分，提示藥企在生產(chǎn)該制劑時(shí)要關(guān)注相關(guān)藥材的質(zhì)量，全面保證制劑臨床療效，為提高恒古骨傷愈合劑質(zhì)量控制水平提供參考。