常潞，荊文光，程顯隆，魏鋒*，馬雙成*

1.中國(guó)藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198；

2.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050

防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikovia divaricate（Turcz.）Schischk.春、秋二季采挖未抽花莖植株的干燥根，載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，有祛風(fēng)解表、勝濕、止痛止痙的功效，在臨床上的應(yīng)用非常廣泛，常用于治療皮膚病、偏正頭痛、消化系統(tǒng)疾病、胃病、呼吸系統(tǒng)疾病、面癱、乳癰癥、內(nèi)臟脫垂、目眩、耳鳴等多種疾病[1]。防風(fēng)按生產(chǎn)方式可分為野生防風(fēng)、仿野生防風(fēng)和栽培防風(fēng)。野生防風(fēng)主產(chǎn)于黑龍江、吉林、遼寧、河北、山東、內(nèi)蒙古等地；仿野生栽培防風(fēng)主要集中在內(nèi)蒙古和黑龍江；栽培防風(fēng)種植區(qū)域廣泛，山東、河南、甘肅、黑龍江等地均有種植，河北是目前栽培防風(fēng)的主要產(chǎn)地[2]。目前，隨著野生防風(fēng)資源逐漸匱乏，栽培防風(fēng)成為市場(chǎng)上的主流品種，按栽培方式可分為籽播品和秧播品。由于生產(chǎn)方式不同、栽培年限不一，市場(chǎng)上的防風(fēng)質(zhì)量良莠不齊，特別是部分栽培品性狀與傳統(tǒng)野生防風(fēng)性狀差異極大，而《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）2020 年版的質(zhì)量控制指標(biāo)亦不足以區(qū)分不同質(zhì)量的防風(fēng)。

按傳統(tǒng)“辨狀論質(zhì)”評(píng)價(jià)，防風(fēng)多以頭節(jié)堅(jiān)如蚯蚓頭者為好或以黃色而潤(rùn)者為佳，其外在性狀描述具有抽象性，因此十分有必要通過(guò)全面總結(jié)防風(fēng)內(nèi)在的化學(xué)成分，進(jìn)一步尋找既能體現(xiàn)傳統(tǒng)“辨狀論質(zhì)”內(nèi)涵又能真正代表防風(fēng)質(zhì)量的標(biāo)志物，這對(duì)于防風(fēng)藥材和飲片的質(zhì)量提升具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

劉昌孝院士于2016 年提出了質(zhì)量標(biāo)志物（quality marker，Q-marker）的全新概念，并將其用于多種中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)與質(zhì)量控制，明確了篩選Qmarker 的五原則：特有性、有效性、傳遞與溯源、可測(cè)性、配伍環(huán)境，為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了新的思路和方法[3]。但中藥質(zhì)量特別是作為原料的中藥材質(zhì)量的形成過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜的體系，道地性和生產(chǎn)規(guī)范性是其質(zhì)量形成的關(guān)鍵，在傳統(tǒng)藥效物質(zhì)尚不明確的情況下，牢牢把握道地性和生產(chǎn)規(guī)范性亦是保證中藥材質(zhì)量的重要手段?；诖?，本文從中藥材質(zhì)量形成過(guò)程中的關(guān)鍵要素出發(fā)，結(jié)合Q-marker 的篩選原則，對(duì)防風(fēng)化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展進(jìn)行歸納總結(jié)，并對(duì)防風(fēng)的Q-marker 進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，以期為其質(zhì)量控制研究提供參考。

1 化學(xué)成分

防風(fēng)的化學(xué)成分主要包括色原酮類、香豆素類、多糖類和揮發(fā)油類，目前已見(jiàn)報(bào)道的化學(xué)成分包括香豆素類41 個(gè)、色原酮類22 個(gè)、多糖類9 個(gè)、有機(jī)酸類7個(gè)、聚乙炔類2個(gè)、甾醇類4個(gè)、腺苷類1個(gè)、嘧啶類1 個(gè)、酯類3 個(gè)和生物堿類1 個(gè)。此外，防風(fēng)中還含有一些甘油酯類成分、揮發(fā)油、微量元素等。

1.1 色原酮類

色原酮類成分是防風(fēng)發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的主要活性成分，也是防風(fēng)中備受關(guān)注的一類成分。Liu等[4]使用制備型高速逆流色譜從防風(fēng)中分離得到4個(gè)色原酮類化合物茅亥酚苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和3'-O-glucosylhamaudol。Ma等[5]在防風(fēng)70%甲醇提取部位中分離得到2 個(gè)新的色原酮苷類化合物，分別為(3'S)-3'-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl hamaudol 和(2'S)-4'-O-β-Dapiofuranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranosyl visamminol。Yang等[6]總結(jié)了防風(fēng)中鑒定出的17 個(gè)色原酮類化合物，其中3-O-乙酰亥茅酚、升麻素、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇和5-O-甲基維斯阿米醇苷為主要成分。目前，已經(jīng)從防風(fēng)中分離得到了22 個(gè)色原酮類成分[4-15]，見(jiàn)表1和圖1。

圖1 防風(fēng)中的色原酮類化合物結(jié)構(gòu)

表1 防風(fēng)中的色原酮類成分

1.2 香豆素類

香豆素類成分是防風(fēng)中另一類主要藥效成分，按其母核結(jié)構(gòu)主要為簡(jiǎn)單香豆素、呋喃香豆素和二氫呋喃香豆素。Kim等[11]從防風(fēng)的乙酸乙酯部分中分離得到9 個(gè)香豆素類化合物，并首次分離得到了1 個(gè)呋喃香豆素類化合物nodakenin。趙博等[16]首次從防風(fēng)的甲醇提取物中分離得到4 個(gè)香豆素類化合物，分別為異香柑內(nèi)酯、紫花前胡素、5-甲氧基-7-(3,3-二甲基烯丙氧基)-香豆素、紫花前胡醇當(dāng)歸酰酯。目前，從防風(fēng)中分離得到的香豆素類化合物[8-14,16-19]見(jiàn)表2和圖2。

圖2 防風(fēng)中部分香豆素類成分結(jié)構(gòu)

表2 防風(fēng)中的香豆素類成分

1.3 揮發(fā)油類

防風(fēng)中含有大量揮發(fā)油類成分，且以萜類、脂肪烴、烯烴和芳香烴類為主，顯示出抗炎、止血作用[20]。陳勇等[21]采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）對(duì)防風(fēng)揮發(fā)油進(jìn)行分析，從中鑒定出45 個(gè)揮發(fā)油類成分。Yu等[22]使用GC-MS 從防風(fēng)中分離鑒定了39 個(gè)揮發(fā)油類化合物。嚴(yán)云麗等[23]采用GC-MS 分別鑒定出防風(fēng)中52 個(gè)、關(guān)防風(fēng)中53 個(gè)、西防風(fēng)中48 個(gè)、口防風(fēng)中49 個(gè)揮發(fā)油類化合物，除去共有峰，共鑒定出69 個(gè)化合物，主要為萜類和鏈狀脂肪族化合物。

1.4 多糖類

多糖是由單糖連接而成的多聚物，因其具有多種生物活性而成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。防風(fēng)多糖在不同產(chǎn)地樣品中含量略有差異，總多糖在藥材中質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%～2.5%。Shimizu等[24]從防風(fēng)中分離得到2種均一多糖，分別為saponikovan A和saponikovan C。其中saponikovan A 的單糖組成為D-半乳糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖醛酸（摩爾比6∶15∶10）；saponikovan C的單糖組成為D-半乳糖醛酸、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖（摩爾比為27∶7∶8∶8）。王松柏等[25]分離并鑒定了2 個(gè)新的酸性雜多糖SPSa和SPSb，并給出兩者單糖組成及摩爾比。戴晶晶等[26]分離鑒定了2 個(gè)多糖SPS0 和SPS1，其中SPS0 是一種具多分枝結(jié)構(gòu)的酸性多糖；SPS1 是一種含β-D-吡喃環(huán)的均一多糖，熱穩(wěn)定性較高。Dong等[27]從防風(fēng)中分離鑒定得到2 個(gè)多糖類成分SDNP-1 和SDNP-2。SDNP-1和SDNP-2 由摩爾比約為1∶1 的阿拉伯糖和半乳糖組成。推斷其為具有不同相對(duì)分子質(zhì)量和主鏈的AGⅡ型阿拉伯半乳聚糖。其中，SDNP-2 的主鏈主要由(1→3)-和(1→6)-連接的Galp殘基組成，摩爾比約為1∶3。生物活性評(píng)價(jià)表明，SDNP-1 有顯著的免疫抑制拮抗作用。多糖類成分是防風(fēng)發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用和抗腫瘤作用的主要活性成分。

1.5 其他類

防風(fēng)中還含有20 個(gè)其他類成分，包括7 個(gè)有機(jī)酸類、2個(gè)聚乙炔類、4個(gè)甾醇類、1個(gè)腺苷類、1個(gè)嘧啶類、3個(gè)酯類、1個(gè)糖醇類和1個(gè)生物堿類成分，見(jiàn)表3。

表3 防風(fēng)中其他類化合物

2 藥理作用

2.1 解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用

祛風(fēng)解表、勝濕止痛是防風(fēng)的傳統(tǒng)功效。眾多學(xué)者利用現(xiàn)代藥理學(xué)方法針對(duì)防風(fēng)解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎等活性做了大量研究工作。楊波等[29]通過(guò)乙酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)、小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)及2,4-二硝基苯酚致熱實(shí)驗(yàn)探究防風(fēng)CO2超臨界流體提取物的有效性，結(jié)果表明，防風(fēng)CO2超臨界提取物有鎮(zhèn)痛、抗炎、解熱作用。薛寶云等[30]采用酵母致熱法、乙酸致痛法、溫?zé)嶂峦捶岸妆街卵追ǚ謩e研究了防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗血小板聚集作用，證明2 個(gè)色原酮苷類化合物均可降低大鼠體溫，使乙酸致大鼠扭體次數(shù)減少，提高溫?zé)嵬撮y，減輕二甲苯引起的耳腫脹，對(duì)腺苷二磷酸（ADP）誘導(dǎo)的血小板聚集有明顯的抑制作用，具有良好的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗血小板聚集作用，與防風(fēng)的傳統(tǒng)功效相符合。

趙娟等[31]研究了防風(fēng)色原酮提取物對(duì)大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的作用，結(jié)果表明，防風(fēng)色原酮提取物能控制大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展，其機(jī)制可能與抑制促炎細(xì)胞因子有關(guān)。Kong等[32]研究結(jié)果表明，防風(fēng)色原酮類提取物通過(guò)降低膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)滑膜和軟骨中核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）水平，抑制磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（p-ERK）、磷酸化氨基末端蛋白激酶（p-JNK）和磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38 抗體（p-p38）的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用。戴錦娜[33]采用角叉菜膠致大鼠足腫脹急性炎癥模型和大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎慢性炎癥模型，系統(tǒng)考察了防風(fēng)的抗炎作用，結(jié)果表明，防風(fēng)能顯著抑制角叉菜膠引起的大鼠急性足腫脹，且大劑量的防風(fēng)對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)性足腫脹即免疫反應(yīng)性炎癥有顯著的抑制作用。Wang等[34]采用異硫氰酸熒光素致敏誘導(dǎo)制備特應(yīng)性皮炎小鼠模型，探究玉屏風(fēng)散抗過(guò)敏性炎癥的機(jī)制，證明玉屏風(fēng)散中的防風(fēng)可能通過(guò)調(diào)節(jié)NF-κB-胸腺間質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素/白細(xì)胞介素-33（NF-κB-TSLP/IL-33）通路減輕特應(yīng)性皮炎初期的過(guò)敏性炎癥。Li等[35]采用膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型結(jié)合超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法，研究防風(fēng)湯對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠的藥效學(xué)作用及其作用機(jī)制，結(jié)果表明，防風(fēng)湯通過(guò)調(diào)節(jié)色氨酸代謝、甘油磷脂分解代謝、初級(jí)膽汁酸生物合成和脂肪酸代謝起到有效緩解風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用。

王長(zhǎng)林等[36]研究結(jié)果表明，荊芥、防風(fēng)2味藥物單獨(dú)應(yīng)用具有一定的抗炎、解熱鎮(zhèn)痛和抑制家兔離體腸管蠕動(dòng)作用。兩藥配合應(yīng)用則顯示出明顯的協(xié)同作用，抗炎、解熱鎮(zhèn)痛作用更為明顯；毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明2味藥物臨床使用安全。

2.2 抗過(guò)敏作用

在中醫(yī)臨床實(shí)踐中，過(guò)敏性疾病與風(fēng)邪、毒邪及體質(zhì)密切相關(guān)，防風(fēng)作為祛風(fēng)良藥，在眾多治療過(guò)敏性疾病的中成藥中均有使用，說(shuō)明防風(fēng)配合其他中藥使用具有一定的抗過(guò)敏作用。陳子珺等[37]采用離體器官實(shí)驗(yàn)法、血清藥理學(xué)及整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法研究防風(fēng)的抗過(guò)敏作用，結(jié)果顯示，防風(fēng)-刺蒺藜（1∶1）合煎劑能顯著抑制組胺所致的豚鼠離體器官平滑肌收縮，且防風(fēng)對(duì)組胺所致的藥物性哮喘及卵白蛋白所致的過(guò)敏性休克有一定的緩解作用。吳賢波等[38]采用胰蛋白酶刺激小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815的方法制備肥大細(xì)胞脫顆粒模型，研究防風(fēng)抗過(guò)敏作用的機(jī)制，結(jié)果表明防風(fēng)醇提物可能通過(guò)抑制蛋白酶激活受體-2（PAR-2）表達(dá)、阻斷肥大細(xì)胞脫顆粒、選擇性減少相關(guān)細(xì)胞因子分泌，繼而抑制肥大細(xì)胞“瀑布效應(yīng)”，發(fā)揮抗過(guò)敏作用。耿玉梅等[39]采用免疫因子水平變化考察防風(fēng)多糖對(duì)卵蛋白致大鼠過(guò)敏性鼻炎模型的治療作用，證明防風(fēng)多糖可通過(guò)下調(diào)過(guò)敏性鼻炎大鼠血清中IL-4、IL-5 水平，上調(diào)可溶性二聚體細(xì)胞因子γ-干擾素（IFN-γ）、IL-12 水平，調(diào)節(jié)輔助性T 細(xì)胞1/2（Th1/Th2）淋巴細(xì)胞亞群平衡和機(jī)體免疫應(yīng)答，減輕鼻黏膜充血炎癥，起到抗過(guò)敏性鼻炎的作用，作用機(jī)制可能是抑制免疫因子的生成和釋放。Jia等[40]通過(guò)建立G 蛋白耦聯(lián)受體X2-細(xì)胞膜色譜-高效液相色譜-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜法（MRGPRX2-CMC-HPLC-IT-TOF-MS）對(duì)防風(fēng)中抗過(guò)敏成分進(jìn)行篩選和鑒定，結(jié)果顯示防風(fēng)中的升麻素、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)致敏豚鼠離體氣管收縮、回腸平滑肌過(guò)敏性收縮及2,4-二硝基氯苯所致的遲發(fā)型超敏反應(yīng)均具有明顯抑制作用。Yu等[41]研究了防風(fēng)提取物對(duì)過(guò)敏性接觸性皮炎模型小鼠的影響及其發(fā)揮作用的機(jī)制，結(jié)果表明，防風(fēng)80%乙醇提取物能阻止幼稚T 細(xì)胞向Th1分化，抑制IFN-γ和T-bet mRNA 在淋巴細(xì)胞中的表達(dá)，可有效治療小鼠過(guò)敏性接觸性皮炎。

2.3 抗腫瘤作用

Ding等[42]研究了防風(fēng)多糖對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞U937，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231的生長(zhǎng)，以及小鼠MDA-MB231 細(xì)胞異種移植模型中腫瘤生長(zhǎng)的影響，研究結(jié)果表明防風(fēng)多糖可能是一種潛在的乳腺癌抑制劑。李莉等[43]研究表明，防風(fēng)在體內(nèi)可抑制骨肉瘤細(xì)胞S180 移植瘤生長(zhǎng)。孫曉紅等[44]采用電子顯微鏡、流式細(xì)胞儀、DNA 末端原位標(biāo)記染色法等，觀察防風(fēng)對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-7901生長(zhǎng)的抑制作用及作用機(jī)制，證明防風(fēng)對(duì)SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用隨濃度和時(shí)間的增加而增強(qiáng)，其既可誘導(dǎo)SGC-7901 細(xì)胞凋亡，也可直接殺死腫瘤細(xì)胞。Tai等[45]在體外研究防風(fēng)70%乙醇提取物對(duì)白血病和乳腺癌細(xì)胞的作用，結(jié)果表明，防風(fēng)70%乙醇提取物與較低濃度的喜樹(shù)堿或紫杉醇的組合可以獲得與高濃度喜樹(shù)堿或紫杉醇相當(dāng)?shù)目鼓[瘤細(xì)胞增殖活性。Kuo等[46]檢測(cè)了防風(fēng)乙醇提取物對(duì)K562、Raji、Wish、HeLa、Calu-1 和Vero 細(xì)胞增殖的影響，研究防風(fēng)乙醇提取物的抗腫瘤作用，證明從防風(fēng)提取物中純化得到的人參炔醇有較高的抗腫瘤活性，其作用可能與阻斷cyclin E mRNA 表達(dá)有關(guān)。而Rosskopf等[47]的研究表明防風(fēng)中的香豆素在質(zhì)量濃度高于100 μg·mL-1時(shí)顯示出良好的抗腫瘤活性。

2.4 抗氧化作用

多項(xiàng)研究表明，防風(fēng)中分離出的多糖和香豆素類化合物，如升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、歐前胡素和石防風(fēng)素等，具有顯著的抗氧化活性[48-49]。Tai等[45]研究結(jié)果表明，防風(fēng)70%乙醇提取物對(duì)細(xì)菌脂多糖激活的RAW264.7 細(xì)胞具有抗氧化、抗炎和保護(hù)作用。張澤慶等[50]采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除實(shí)驗(yàn)研究防風(fēng)中多糖類成分的抗氧化作用，證明多糖類成分A-SPS 對(duì)羥基自由基和DPPH 自由基具有較強(qiáng)的清除作用。李麗等[51]采用Folin-Ciocalteu法測(cè)定防風(fēng)不同提取物的總酚含量，并采用DPPH 法測(cè)定防風(fēng)不同提取物的抗氧化活性，結(jié)果表明，超聲120 min 得到的防風(fēng)80%乙醇提取物表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化活性，但其抗氧化活性與總酚含量沒(méi)有必然關(guān)系。鐘才寧等[52]利用DPPH法檢測(cè)防風(fēng)揮發(fā)油的自由基清除率，表明防風(fēng)揮發(fā)油類成分具有一定的自由基清除能力。孟瑤[53]從防風(fēng)中分離得到了4 種多糖SDP1～SDP4，通過(guò)自由基清除實(shí)驗(yàn)證明4 種防風(fēng)多糖均能保護(hù)雙氧水（H2O2）損傷的RAW264.7細(xì)胞，保護(hù)作用呈劑量依賴性。

2.5 對(duì)血液系統(tǒng)的作用

防風(fēng)在臨床上常與其他中藥配伍用于心血管系統(tǒng)疾病如卒中、高血壓等的治療，說(shuō)明其復(fù)方制劑有祛風(fēng)、通絡(luò)、活血等功效。高英等[54]研究結(jié)果表明，防風(fēng)CO2超臨界流體提取物可縮短小鼠出血時(shí)間，縮短大鼠凝血酶原時(shí)間（PT）及活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT），體現(xiàn)出促凝血作用。根據(jù)其延長(zhǎng)大鼠優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間（ELT）的趨勢(shì)，提示其可能有降低纖溶活性的作用。李文等[1]采用乙酸致炎法、抗凝血和血液流變學(xué)方法研究防風(fēng)對(duì)小鼠血液的影響，表明防風(fēng)有效部位有明顯的抗炎、降低血漿黏度、延長(zhǎng)凝血酶原時(shí)間和抗血小板聚集作用。朱惠京等[55]研究防風(fēng)正丁醇提取物對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響，結(jié)果表明防風(fēng)正丁醇提取物可減低大鼠全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、纖維蛋白原含量、血球壓積及全血還原黏度，證明防風(fēng)正丁醇提取物有一定的活血化瘀作用。吳禎久等[56]給小鼠腹腔注射防風(fēng)正丁醇提取物，研究其抗凝作用，也得到類似結(jié)果。張曉穎[57]研究表明防風(fēng)具有增強(qiáng)桃紅四物湯活血化瘀功能的作用。此外，也有研究表明防風(fēng)正丁醇萃取物有一定抗血小板黏附及血栓形成的作用[58]。

2.6 調(diào)節(jié)免疫作用

防風(fēng)水提取液和防風(fēng)多糖有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用[59]，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，防風(fēng)不僅能提高小鼠的非特異性免疫，還對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫功能具有明顯的增強(qiáng)作用[60]。周勇等[61]通過(guò)比較防風(fēng)多糖的體內(nèi)和體外抑瘤作用研究防風(fēng)多糖的免疫調(diào)節(jié)作用，結(jié)果表明其抑瘤作用是通過(guò)促進(jìn)宿主免疫系統(tǒng)功能實(shí)現(xiàn)。黃健[62]采用黏膜免疫損傷小鼠研究防風(fēng)多糖的免疫調(diào)節(jié)作用，研究證明防風(fēng)多糖有較好的提高非特異性免疫的作用。Dong等[27]從防風(fēng)中分離得到2個(gè)多糖SDNP-1和SDNP-2，采用RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活力測(cè)定，顯示多糖SDNP-2 對(duì)免疫抑制表現(xiàn)出強(qiáng)烈的拮抗作用，SDNP-1則沒(méi)有顯示出效果。王玲[63]研究發(fā)現(xiàn)防風(fēng)提取物能顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)，表明防風(fēng)具有明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。

2.7 其他作用

李高峰等[64]研究發(fā)現(xiàn)防風(fēng)多糖能夠提高切除卵巢后骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，其可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子-α、IL-6 水平而發(fā)揮作用。黃亞男[65]研究結(jié)果，防風(fēng)對(duì)三氧化二砷造成的大鼠組織病理?yè)p傷有一定程度的保護(hù)作用。姜超等[66]采用四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型研究防風(fēng)提取物對(duì)肝臟的保護(hù)作用，結(jié)果表明防風(fēng)水提物和醇提物高劑量能顯著降低小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性，降低肝勻漿中丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶活性，證明防風(fēng)提取物具有一定的保肝作用，其作用機(jī)制可能與抗脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)。梁瑞峰等[67]采用大鼠腹瀉模型研究防風(fēng)不同提取部位的止瀉作用，結(jié)果表明石油醚部位和正丁醇部位是其止瀉的活性部位，且兩者對(duì)腸道不同亞型的水通道蛋白（AQP）調(diào)控具有差異。譚許朋[68]采用感染后腸易激綜合征（PI-IBS）大鼠模型研究防風(fēng)對(duì)腸黏膜機(jī)械屏障的影響及對(duì)Caco-2 細(xì)胞屏障的作用，結(jié)果表明防風(fēng)有保護(hù)腸屏障的作用。

3 Q-marker預(yù)測(cè)分析

由于中藥成分復(fù)雜，品種多樣，且質(zhì)量易受到種植、采收、加工等多種因素影響，導(dǎo)致中藥質(zhì)量良莠不齊，難以監(jiān)管。為了進(jìn)一步規(guī)范中藥質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立，劉昌孝等[3]提出了Q-marker 概念，即存在于中藥材或中藥產(chǎn)品（如中藥飲片、中藥煎劑、中藥提取物、中成藥制劑）中固有的或加工制備過(guò)程中形成的、與中藥功能屬性密切相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)，并以此作為反映中藥安全性和有效性的標(biāo)示性物質(zhì)。

防風(fēng)主產(chǎn)于我國(guó)東北及華北地區(qū)，在陜西、甘肅、青海等地亦產(chǎn)[69]。過(guò)去防風(fēng)的使用以野生品為主，隨著野生資源逐漸匱乏，大量習(xí)用品防風(fēng)與栽培品防風(fēng)涌進(jìn)市場(chǎng)，藥材質(zhì)量良莠不齊，對(duì)防風(fēng)的規(guī)范使用造成了困難。王麗麗等[70]通過(guò)一測(cè)多評(píng)法測(cè)定了防風(fēng)中4個(gè)色原酮類成分的含量。薛雪等[71]建立了防風(fēng)中升麻素及4 個(gè)色原酮類成分含量之和的近紅外光譜預(yù)測(cè)模型，用于準(zhǔn)確快速地預(yù)測(cè)防風(fēng)中升麻素及4 個(gè)色原酮類成分含量之和。這些研究為防風(fēng)的質(zhì)量指標(biāo)的選擇提供了依據(jù)，但真正能反映防風(fēng)道地性、生產(chǎn)規(guī)范性的質(zhì)量指標(biāo)依然研究不足，亟待行之有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)策略和方法保障防風(fēng)藥材、飲片的質(zhì)量。本文基于中藥質(zhì)量形成過(guò)程，結(jié)合Q-marker 篩選的原則及防風(fēng)藥材自身特性，從道地性、生產(chǎn)規(guī)范性和真實(shí)性、藥效藥性關(guān)聯(lián)性及化學(xué)成分可測(cè)性這4 方面對(duì)防風(fēng)的Q-marker 進(jìn)行預(yù)測(cè)分析。

3.1 基于道地性的Q-marker預(yù)測(cè)分析

從古至今，防風(fēng)的產(chǎn)地經(jīng)歷了從南到北的遷移過(guò)程，因此目前防風(fēng)沒(méi)有確切的道地產(chǎn)區(qū)。目前栽培防風(fēng)占市場(chǎng)份額約90%，主產(chǎn)于河北、內(nèi)蒙古。野生品占市場(chǎng)份額約10%，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古及東北地區(qū)。市場(chǎng)上認(rèn)為產(chǎn)自內(nèi)蒙古、黑龍江的防風(fēng)品質(zhì)較佳，因此認(rèn)為內(nèi)蒙古、黑龍江為防風(fēng)的道地產(chǎn)區(qū)[72]?；艚鸷５萚73]通過(guò)超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）結(jié)合主成分分析探究26 個(gè)道地產(chǎn)區(qū)及其他產(chǎn)地的78 批防風(fēng)的質(zhì)量差異性標(biāo)記物，表明不同產(chǎn)地防風(fēng)中5-O-甲基維斯阿米醇苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇、亥茅酚苷、3'-O-乙酰亥茅酚、3'-O-當(dāng)歸酰亥茅酚、紫花前胡苷元含量差異較大，可作為防風(fēng)產(chǎn)地區(qū)分的關(guān)鍵Q-marker。ledeouriellol、亥茅酚、補(bǔ)骨脂素、花椒毒素也可以在一定程度上表征關(guān)防風(fēng)與其他產(chǎn)地防風(fēng)的差異，可以作為質(zhì)量差異標(biāo)志物來(lái)鑒定關(guān)防風(fēng)。郭駿騏等[74]以升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷作為標(biāo)志物對(duì)來(lái)自吉林、河北、內(nèi)蒙古的30 批防風(fēng)飲片的質(zhì)量等級(jí)進(jìn)行了劃分，結(jié)果表明來(lái)自內(nèi)蒙古的飲片質(zhì)量較好。Batsukh等[75]采用液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）結(jié)合核磁共振（NMR）鑒定化合物結(jié)構(gòu)，采用高效液相色譜法-二極管陣列檢測(cè)器（HPLC-DAD）檢測(cè)了44 批來(lái)自蒙古國(guó)和8 批來(lái)自中國(guó)的防風(fēng)樣品，研究表明，蒙古國(guó)的防風(fēng)樣品的升麻素苷含量顯著高于中國(guó)。因此，5-O-甲基維斯阿米醇苷、升麻素、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇、亥茅酚苷、3'-O-乙酰亥茅酚、3'-O-當(dāng)歸乙酰亥茅酚、紫花前胡苷元，ledeouriellol、亥茅酚、補(bǔ)骨脂素、花椒毒素可能是區(qū)分防風(fēng)道地性的潛在的Q-marker。

3.2 基于生產(chǎn)規(guī)范性和真實(shí)性的Q-marker預(yù)測(cè)分析

《中國(guó)藥典》2020 年版中防風(fēng)需以未抽薹的干燥根入藥，但市場(chǎng)上的商品防風(fēng)?；煊幸恍┮殉檗返姆里L(fēng)。為此，韓忠明等[76]通過(guò)在防風(fēng)不同生長(zhǎng)階段進(jìn)行采樣檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其防風(fēng)的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚這4 個(gè)色原酮含量在抽薹后顯著下降，與未抽薹的防風(fēng)有顯著差別，因此可將升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚這4 個(gè)色原酮作為鑒定未抽薹防風(fēng)與抽薹防風(fēng)的Q-marker。據(jù)報(bào)道，抽薹后的防風(fēng)解熱作用僅為抽薹前的55%[77]。Wang等[78]以5-O-甲基維斯阿米醇苷和升麻素苷為指標(biāo)建立了一個(gè)快速檢定不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)年限防風(fēng)樣品的超高效液相色譜-紫外法（UHPLC-UV），并對(duì)結(jié)果進(jìn)行非靶向代謝組學(xué)和化學(xué)計(jì)量學(xué)分析，研究結(jié)果表明2～3 年的關(guān)防風(fēng)質(zhì)量更佳。Yoshitomi等[15]采用液相色譜-高分辨質(zhì)譜法（LC-HR-MS）代謝組學(xué)研究防風(fēng)和前胡的特征性標(biāo)志物，結(jié)果表明5-O-甲基維斯阿米醇苷為防風(fēng)中的特有性物質(zhì)，可以用來(lái)區(qū)分防風(fēng)和前胡。王思淼等[79]采用UPLC-Q-TOF-MS/MS 對(duì)1、2、3 年生防風(fēng)樣本進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)結(jié)果分析其香豆素類物質(zhì)的積累規(guī)律，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂素含量隨生長(zhǎng)年限逐年增加，8-羥基補(bǔ)骨脂素在2 年生防風(fēng)中含量最高。因此，升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、亥茅酚、8-羥基補(bǔ)骨脂素和補(bǔ)骨脂素可能是防風(fēng)生產(chǎn)規(guī)范性和真實(shí)性的Q-marker。

3.3 基于藥效藥性關(guān)聯(lián)性的Q-marker預(yù)測(cè)分析

防風(fēng)味辛、甘，性微溫，歸膀胱、肝、脾經(jīng)，能祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙，用于感冒頭痛、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢、破傷風(fēng)。根據(jù)分子藥性假說(shuō)，辛溫藥性多與揮發(fā)油相關(guān)，甘味與多糖相關(guān)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，防風(fēng)具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗過(guò)敏、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤的作用。其中抗過(guò)敏、增強(qiáng)免疫和抗腫瘤作用與多糖有關(guān)，解熱鎮(zhèn)痛作用與揮發(fā)油和色原酮有關(guān)。Chen等[80]通過(guò)酶聯(lián)免疫試驗(yàn)和蛋白質(zhì)印跡分析評(píng)估了升麻素苷對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的影響，表明升麻素苷通過(guò)抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和NF-κB 信號(hào)通路的激活顯示出抗炎作用。Khan等[81]采用脂多糖刺激小鼠巨噬細(xì)胞，研究防風(fēng)中川白芷內(nèi)酯的抗炎作用，結(jié)果顯示川白芷內(nèi)酯通過(guò)下調(diào)NF-κB 通路減少細(xì)胞促炎因子腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素起到抗炎作用。洪敏等[82]應(yīng)用2,4-二硝基氯苯制備小鼠變態(tài)反應(yīng)性接觸性皮炎模型，考察人參炔醇對(duì)模型小鼠耳廓腫脹的影響，結(jié)果顯示人參炔醇對(duì)實(shí)驗(yàn)性遲發(fā)型超敏反應(yīng)有顯著的抑制作用，該作用可能與抑制T 細(xì)胞增殖和IFN-γ的分泌有關(guān)。戴錦娜[33]制備了大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，鑒定了防風(fēng)5 個(gè)入血成分升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、5-O-甲基維斯阿米醇和亥茅酚苷。因此，人參炔醇、茅亥酚苷、升麻素、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、5-O-甲基維斯阿米醇和川白芷內(nèi)酯可能是防風(fēng)藥材潛在的Q-marker，當(dāng)然這些指標(biāo)的藥理作用仍要結(jié)合防風(fēng)的臨床核心功效進(jìn)行驗(yàn)證。

3.4 基于化學(xué)成分可測(cè)性的Q-marker預(yù)測(cè)分析

良好的可測(cè)性是Q-marker 的必要條件。色原酮類、香豆素類、多糖類、揮發(fā)油類都是防風(fēng)的重要活性成分，但多糖類結(jié)構(gòu)復(fù)雜，純化困難，給檢測(cè)帶來(lái)了一定的不便。色原酮類成分由于廣受關(guān)注，已經(jīng)研究出了許多簡(jiǎn)便且準(zhǔn)確的檢測(cè)方式。Li等[83]通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化防風(fēng)中4 個(gè)色原酮類成分的提取方式，開(kāi)發(fā)了一套超聲波輔助提取方式用于最大限度地提取防風(fēng)中的4個(gè)色原酮類成分。盧泳等[84]采用近紅外光譜結(jié)合偏最小二乘法建立了2 個(gè)色原酮成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)間的定量校正模型，可快速、準(zhǔn)確地對(duì)防風(fēng)中的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷進(jìn)行定量分析。趙博等[85]建立了同時(shí)測(cè)定防風(fēng)中升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、印枳樹(shù)皮苷、防風(fēng)靈和亥茅酚苷6 個(gè)主要有效成分含量的HPLCDAD。李碩等[86]運(yùn)用灰色關(guān)聯(lián)度法測(cè)定防風(fēng)中的總多糖、醇浸出物、升麻素、升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量，構(gòu)建防風(fēng)質(zhì)量評(píng)價(jià)模型，結(jié)果表明，該模型與防風(fēng)商品質(zhì)量等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)相符合。Seo等[87]用升麻素、升麻素苷、歐前胡素、7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、佛手柑內(nèi)酯、亥茅酚苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷作為指標(biāo)構(gòu)建了HPLC-光電二極管陣列檢測(cè)器（PDA），用來(lái)區(qū)分防風(fēng)、北沙參和前胡。可見(jiàn)防風(fēng)中的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基維斯阿米醇苷、亥茅酚苷、歐前胡素、7-β-D-吡喃葡萄糖苷、佛手柑內(nèi)酯具有良好的可測(cè)性，可以作為防風(fēng)藥材潛在的Q-marker。

4 結(jié)語(yǔ)

防風(fēng)在我國(guó)分布廣泛，藥效突出，但其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理作用機(jī)制目前尚不明確，能夠真正反映防風(fēng)內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)一直未確立。本文在總結(jié)近10 年防風(fēng)化學(xué)成分和藥理作用的基礎(chǔ)上，結(jié)合Qmarker的篩選原則，對(duì)防風(fēng)中的Q-marker進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果表明部分色原酮和香豆素類化合物，如補(bǔ)骨脂素、亥茅酚苷、歐前胡素等可作為防風(fēng)潛在的Qmarker。

近年來(lái)，由于防風(fēng)野生資源短缺，出現(xiàn)了仿野生栽培品和家種栽培品，家種栽培也出現(xiàn)不同的栽培方式，這些生產(chǎn)加工的各方因素對(duì)于防風(fēng)品質(zhì)的影響需進(jìn)一步探究。鐘芬[88]比較了栽培防風(fēng)與野生防風(fēng)的質(zhì)量差異，結(jié)果表明，栽培品和野生品的性狀和顯微特征有較大差別，理化指標(biāo)沒(méi)有明顯差別。種子栽培防風(fēng)和移栽防風(fēng)在根型上有較大差別，顯微上差別較小。在質(zhì)量指標(biāo)方面，野生品的5-O-甲基維斯阿米醇苷和升麻素苷含量高于栽培品，河北栽培品中這2 個(gè)色原酮含量與野生品相當(dāng)，種子栽培品中這2 個(gè)色原酮含量高于移栽品。栽培品的醇溶性浸出物含量比野生品高10%。不同產(chǎn)地及不同播種方式栽培品的醇溶性浸出物含量沒(méi)有明顯差別。安國(guó)栽培防風(fēng)水溶性浸出物含量最高，高于東北栽培防風(fēng)和野生防風(fēng)。栽培防風(fēng)的多糖含量高于野生防風(fēng)，扦插防風(fēng)的多糖含量高于種子栽培防風(fēng)。野生防風(fēng)和東北栽培防風(fēng)的揮發(fā)油得率相當(dāng)，安國(guó)栽培品種防風(fēng)揮發(fā)油得率較低。因此，不能確定栽培品與野生品是否起到一樣的藥效?！吨袊?guó)藥典》2020年版將升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷作為含量測(cè)定的質(zhì)量指標(biāo)，但王浩等[89]研究表明不同規(guī)格防風(fēng)的5-O-甲基維斯阿米醇苷與升麻素苷含量的和既無(wú)顯著性差異也無(wú)相關(guān)性。同時(shí)升麻素、亥茅酚苷含量與不同防風(fēng)規(guī)格存在顯著相關(guān)性，且野生防風(fēng)升麻素、亥茅酚苷至少為栽培防風(fēng)的2 倍以上，且不同等級(jí)防風(fēng)藥材商品與內(nèi)在含量大多呈負(fù)相關(guān)，即等級(jí)較高的藥材內(nèi)在指標(biāo)性含量較低，這可能與根莖類藥材次生代謝產(chǎn)物主要存在于韌皮部相關(guān)，提示僅以藥材大小劃分等級(jí)較為片面，往往不能很好地反映藥材的內(nèi)在質(zhì)量。因此，以道地性、生產(chǎn)規(guī)范性較好的防風(fēng)藥材為研究對(duì)象，充分挖掘能體現(xiàn)防風(fēng)藥材生長(zhǎng)、生產(chǎn)和加工規(guī)律的特異性質(zhì)量指標(biāo)，篩選和確立反映其內(nèi)在真實(shí)質(zhì)量和體現(xiàn)其臨床核心功效的Q-marker勢(shì)在必行。