魏 艷,劉 勇,葉 倩,盧丁伊慧,張戰(zhàn)泓,張 卓,張德詠,章松柏,史曉斌,*

(1.長江大學,農(nóng)林病蟲害預警與調(diào)控湖北省工程技術(shù)研究中心,湖北荊州 434025;2.湖南省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所,長沙 410125;3.湖南省農(nóng)業(yè)科學院蔬菜研究所,長沙 410125)

番茄黃化曲葉病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)是威脅番茄生長的主要病毒之一(劉馨等,2015)，隸屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金黃花葉病毒屬(Begomovirus)(劉佰明等,2021)，是具有孿生顆粒形態(tài)的單鏈環(huán)DNA病毒。TYLCV的發(fā)病癥狀主要表現(xiàn)為新葉先發(fā)病，葉片皺縮變小并向上卷曲，葉緣黃化，植株生長緩慢，無法正常開花結(jié)實并且影響果實色澤、口感和營養(yǎng)成分，使番茄的品質(zhì)大大降低(王賢等,2021)，素有“番茄癌癥”之稱。TYLCV在田間極易與番茄褪綠病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)復合侵染(汪怡蓉等,2019)，造成更嚴重的致病性，加速宿主植物死亡，不及時防治將會給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成重大損失(廖錦鈺等,2021)。自然條件下TYLCV只能通過煙粉虱Bemisiatabaci傳播，病毒泛濫往往伴隨著煙粉虱的大暴發(fā)，因此控制煙粉虱種群數(shù)量可以有效減緩病毒傳播。

煙粉虱屬于半翅目(Hemiptera)粉虱科(Aleyrodidae)，是危害番茄、黃瓜、辣椒、茄子、甘藍等農(nóng)業(yè)經(jīng)濟作物生長的主要害蟲之一，其繁殖周期短、速率快，適應環(huán)境能力強，可以全年繁殖(李英梅等,2020)。煙粉虱可以攜帶并傳播的植物病毒超過200種，為害600多種寄主植物(陳文斌等,2021)，吸食植物汁液的同時傳播植物病毒，造成寄主植物生長緩慢、無法正常結(jié)實，嚴重時導致植物死亡(劉國霞等,2021)。煙粉虱以持久性的傳毒特性傳播TYLCV：吸食帶毒番茄植株后，病毒粒子通過唾液管和消化系統(tǒng)釋放到血淋巴，最后再次回到唾液腺，在體內(nèi)長時間保留。當帶毒煙粉虱在未感染TYLCV番茄植株上取食時，體內(nèi)的病毒粒子隨著唾液通過口針一起進入植物體內(nèi)，導致未感染TYLCV的番茄染病。此外，煙粉虱取食過程中分泌的蜜露會附著在葉片表面誘發(fā)煤污病(劉國霞等,2021)。因此，在防御手段上應該做好媒介昆蟲的防治，切斷傳播途徑(苑麗彩等,2016)。

化學感受蛋白(chemosensory proteins,CSPs)是一類小分子的可溶性蛋白，有4個保守的半胱氨酸形成兩個非連鎖的二硫鍵，能識別并結(jié)合周圍環(huán)境中的信號分子(Calvelloetal.,2005)，再傳遞給相應的受體，幫助昆蟲感應外界信號。這類蛋白最初在美洲大蠊Periplanetaamericana的再生足上檢測到，隨后發(fā)現(xiàn)于黑腹果蠅Drosophilamelangaster的觸角，之后苜蓿盲蝽Adelphocorislineolatus的不同感覺器官包括觸角、唇須和喙等部位也發(fā)現(xiàn)了這類蛋白(Guetal.,2012)，甚至少量分布于非感覺器官中。從病毒傳播的角度出發(fā)，探究影響病毒傳播時發(fā)揮作用的昆蟲化學感受蛋白，發(fā)掘潛在的分子機制，可以有效控制病毒傳播。因此，研究化學感受蛋白可以作為設計和開發(fā)新型害蟲管理策略的重要分子靶標(Zhangetal.,2016;Wangetal.,2019)。本研究旨在探明煙粉虱的化學感受蛋白基因在雌雄成蟲傳毒過程中的表達差異，探明差異基因?qū)Σ《緜鞑サ挠绊?，為控制病毒發(fā)生尋找新途徑。

1 材料與方法

1.1 供試煙粉虱MED隱種

本實驗使用的煙粉虱MED隱種成蟲由湖南省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所提供，飼喂在棉花植株上，并用紗籠隔絕。養(yǎng)蟲室溫度保持在26±2℃，相對濕度控制為60%±10%，光周期設定14L∶10D。番茄(鉆紅美娜)種植的溫室條件：溫度26±2℃，相對濕度75%±5%，光周期16L∶8D。

1.2 煙粉虱MED隱種成蟲獲毒

使用TYLCV侵染性克隆方法獲得帶毒番茄植株：TYLCV侵染性克隆是由浙江大學生物技術(shù)研究所周雪平教授課題組構(gòu)建并提供，為上海TYLCV分離株(TYLCV-SH2)。將含有TYLCV侵染性克隆的農(nóng)桿菌Agrobacteriumtumefaciens菌液在YEP固體培養(yǎng)基上進行劃線操作，28℃恒溫培養(yǎng)箱(冠森生物科技有限公司，上海)倒置培養(yǎng)48 h；挑取單菌落，接種于含有卡那霉素(50 μg/mL Kan+)和利福平(25 μg/mL Rif+)的YEP液體培養(yǎng)基中，28℃恒溫搖床200 r/min過夜培養(yǎng)，收集農(nóng)桿菌菌液至50 mL無菌離心管中，離心機(Eppendorf，德國)轉(zhuǎn)速調(diào)至4 000 r/min，室溫離心10 min，去除上清液，底部菌體用無菌去離子水重新懸浮，使用分光光度計調(diào)節(jié)OD600為1.0，室溫靜置4 h后進行接種。用一次性無菌注射器吸取1 mL接種液注射至番茄真葉及莖桿中，8 h黑暗處理后轉(zhuǎn)至溫室繼續(xù)培養(yǎng)，約3周后觀察發(fā)病癥狀并通過PCR檢測感染情況。

微蟲籠收集未感染病毒的煙粉虱MED隱種成蟲，夾在已感染TYLCV的番茄植株葉背面飼喂48 h，收集取食后的煙粉虱，使用蛋白酶K、樹脂溶液提取單頭煙粉虱MED隱種DNA。根據(jù)Taq DNA Polymerase (Mg2+Plus Buffer)試劑盒(南京諾唯贊生物科技股份有限公司，南京)的操作說明書，使用TYLCV特異性引物(廖錦鈺等,2021)(表1)，進行PCR擴增，反應體系:10×Taq Buffer (Mg2+plus) 2.5 μL,TYLCV正反向引物(10 μmol/L)各1 μL,dNTP Mix (10 mmol/L each) 0.5 μL,Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 0.5 μL,模板DNA 1 μL,ddH2O 18.5 μL。擴增程序:95℃ 3 min;95℃ 15 s,56℃ 15 s,72℃ 1 min 30 s,35次循環(huán)；72℃ 5 min。擴增產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，檢測結(jié)果正確的PCR產(chǎn)物送至公司測序并進行序列比對，鑒定TYLCV。

從飼養(yǎng)的煙粉虱MED隱種中隨機抽取20頭進行種群鑒定，首先使用蛋白酶K、樹脂溶液提取單頭煙粉虱MED隱種DNA，使用2×Taq Plus Master Mix Ⅱ (Dye Plus)試劑盒(南京諾唯贊生物科技股份有限公司，南京)并結(jié)合特異性引物(劉微等,2019)(表1)進行PCR擴增。PCR反應體系:2×Taq Plus Master Mix Ⅱ (Dye Plus) 10 μL,上下游引物(10 μmol/L)各1 μL，模板DNA 1 μL,ddH2O 7 μL。擴增程序:95℃ 5 min;95℃ 15 s,53℃ 45 s,72℃ 1 min,35次循環(huán)；72℃ 10 min。擴增產(chǎn)物進行酶切，AseⅠ酶可將煙粉虱MED隱種的PCR產(chǎn)物酶切成兩條鏈，煙粉虱MEAM1隱種的PCR產(chǎn)物則不能被切開(劉微等,2019)。

1.3 煙粉虱MED隱種成蟲體內(nèi)CSP基因相對表達量測定

人工自制吸蟲管分別收集50頭未感染和感染TYLCV的煙粉虱MED隱種雌雄成蟲并提取RNA，根據(jù)HiScript?ⅡQ RT SuperMix for qPCR (+gDNA Wiper)試劑盒的說明書 (南京諾唯贊生物科技股份有限公司，南京)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA并定量至200 ng，使用AceQ?qPCR SYBRGreen Master Mix試劑盒(南京諾唯贊生物科技股份有限公司，南京)參考CSP基因序列(Zengetal.,2019)，使用Primer Premier 5軟件設計qBtabCSP1-8特異性引物(表1)，于qTOWER3G熒光定量PCR儀(耶拿，德國)進行RT-qPCR。PCR反應體系:Nuclease-free Water 8.2 μL,正反向引物(10 μmol/L)各0.4 μL,cDNA 1 μL,5×HiScript Ⅱ qRT SuperMix Ⅱ 10 μL。擴增程序:95℃ 5 min;95℃ 10 s,60℃ 30 s,95℃ 15 s,40次循環(huán)；60℃ 1 min,95℃ 15 s。以未感染TYLCV的雌雄成蟲體內(nèi)BtabCSP1-8基因表達量為參照，采用比較周期閾值法(2-ΔΔCt)計算煙粉虱MED隱種雌雄成蟲體內(nèi)BtabCSP1-8基因的相對表達量。

1.4 RNAi效果測定

取100頭未感染TYLCV的煙粉虱MED隱種成蟲RNA為模板，按照1.3節(jié)的方法逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。合成dsGFP(GenBank 登錄號:U70496.1)(對照組)的正反向引物(Luetal.,2021)，使用Primer Premier 5軟件設計合成dsBtabCSP6(處理組)的正反向引物(表1)，使用Phanta?Max Super-Fidelity DNA Polymerase試劑盒(南京諾唯贊生物科技股份有限公司，南京)進行擴增，反應體系:ddH2O 10 μL,2×Phanta Max Buffer 12.5 μL,dNTP Mix (10 mmol/L each) 0.5 μL,正反向引物 (10 μmol/L)各0.5 μL,cDNA 0.5 μL,Phanta?Max Super-Fidelity DNA Polymerase 0.5 μL。擴增程序同1.2節(jié)，擴增產(chǎn)物純化回收后使用pEASY?-T1 Cloning Kit試劑盒(北京全式金生物技術(shù)股份有限公司，北京)連接到pEASY-Blunt克隆載體獲得重組子，轉(zhuǎn)化到Trans1-T1感受態(tài)細胞(北京全式金生物技術(shù)股份有限公司，北京)中得到轉(zhuǎn)化子，提取克隆質(zhì)粒。用T7 RiboMAXTMExpress RNAi System試劑盒[普洛麥格(北京)生物技術(shù)有限公司]將目標DNA片段合成為dsRNA。納米滴分光光度計[賽默飛世爾科技(中國)有限公司，上海]測定dsRNA的濃度和純度。合成的dsRNA與15%的蔗糖混合配制成為飼喂液(dsRNA定量400 ng/μL，每管200 μL飼喂液)，吸50頭煙粉虱MED隱種雌成蟲飼喂dsGFP(對照組)和dsBtabCSP6(處理組)，48 h取樣進行RT-qPCR,檢測BtabCSP6的表達量(方法同1.3節(jié))，技術(shù)重復3次，生物學重復3次。

表1 引物信息Table 1 Primer information

1.5 BtabCSP6 RNAi后煙粉虱MED隱種獲毒率和傳毒率的測定

1.5.1獲毒率的測定：選擇未感染TYLCV的雌成蟲，按照1.4節(jié)的步驟飼喂dsGFP(對照組)和dsBtabCSP6(處理組)，參考1.1節(jié)的方法獲毒不同時間(6,12,18,24,48和72 h)，每個時間段各30頭，檢測不同時間段單頭雌成蟲獲毒情況，根據(jù)每個時間段獲毒雌成蟲數(shù)量計算獲毒率。獲毒率=感染TYLCV煙粉虱總數(shù)/每組用于實驗煙粉虱總數(shù)(30頭)×100%。生物學重復3次。

1.5.2傳毒率的測定：吸取1.4節(jié)飼喂dsGFP(對照組)和dsBtabCSP6(處理組)后48 h的煙粉虱MED隱種雌成蟲，參考1.1節(jié)的方法獲毒后，每組分別吸取1,5,10,25和50頭煙粉虱，共5組，置于不同微蟲籠中，微蟲籠夾在長勢相同的未感染TYLCV的5株番茄植株上傳毒。每組實驗番茄總數(shù)為25株，一周后移去微蟲籠，番茄植株繼續(xù)培養(yǎng)兩周，使用1.1節(jié)的方法檢測感染TYLCV番茄植物株數(shù)量，計算對照組與處理組的傳毒率。傳毒率=感染TYLCV番茄植株數(shù)量/每組用于實驗的番茄植株總數(shù)(25株)×100%。生物學重復3次。

1.6 數(shù)據(jù)分析

用IBM SPSS Statistics 21(SPSS Inc.,Chicago,IL,美國)進行統(tǒng)計分析，采用獨立樣本T檢驗分析方法比較感染TYLCV的雌性與雄性成蟲之間BtabCSP基因表達量差異顯著性，RNAi處理前后不同時間段之間獲毒率、不同數(shù)量級傳毒率的差異顯著性；使用作圖軟件 SigmaPlot 12.50和Graph Pad Prism 8作圖。

2 結(jié)果

2.1 感染TYLCV后煙粉虱MED隱種體內(nèi)BtabCSP1-8基因表達量變化

RT-qPCR結(jié)果表明，與未獲毒成蟲相比，獲毒雌成蟲中BtabCSP3和BtabCSP6表達量變化最為明顯；雄成蟲中BtabCSP4和BtabCSP6表達量變化最為明顯，均可考慮為與TYLCV相關(guān)的差異表達基因。與獲毒煙粉虱MED隱種雄成蟲相比，獲毒煙粉虱MED隱種雌成蟲有4個基因(BtabCSP2,BtabCSP5,BtabCSP6和BtabCSP8)表達顯著上調(diào)(P<0.05)；與獲毒煙粉虱MED隱種雌成蟲相比，雄成蟲有3個基因(BtabCSP1,BtabCSP3和BtabCSP7)表達顯著上調(diào)(P<0.05)，其中BtabCSP3與BtabCSP6表達量在雌雄成蟲間差異極顯著(P<0.001)。BtabCSP6在雌成蟲中的表達量顯著高于在雄成蟲中的(P<0.001)，且與未侵染TYLCV的雌雄成蟲相比，在侵染TYLCV的雌雄成蟲體內(nèi)均表達量差異顯著(P<0.05)，最終挑選BtabCSP6進行后續(xù)實驗(圖1)。

圖1 TYLCV侵染后BtabCSP1-8 (A-H)在煙粉虱MED隱種雌雄成蟲中的相對表達量Fig.1 Relative expression levels of BtabCSP1-8 (A-H) in female and male adults of Bemisia tabaci MED after TYLCV infectionNV:TYLCV未侵染煙粉虱TYLCV-noninfected B. tabaci;V:TYLCV侵染煙粉虱TYLCV-infected B. tabaci. 圖中數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；柱上符號表示兩組間的差異顯著性(*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001;nsP>0.05)(獨立樣本T檢驗)。下圖同。Data in the figure are mean±SE.Symbols above bars indicate significance of difference between two groups (*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001;nsP>0.05)(Independent samples T-test).The same for the following figures.

2.2 RNAi干擾BtabCSP6后基因表達量變化

結(jié)果顯示，與飼喂dsGFP的對照組比較，飼喂dsBtabCSP6 48 h后雌成蟲體內(nèi)BtabCSP6的表達量顯著下降(P<0.001)(圖2)，證明RNAi實驗成功降低了基因的表達，干擾效果良好。

2.3 RNAi干擾BtabCSP6對煙粉虱MED隱種雌成蟲獲毒率和傳毒率的影響

結(jié)果顯示，與飼喂dsGFP的對照組比較，飼喂dsBtabCSP6 18-72 h的煙粉虱MED隱種雌成蟲獲毒率(圖3:A)與傳毒率(圖3:B)均顯著降低(P<0.05)，其中，獲毒率隨著時間的延長呈上升趨勢，對照組從48 h獲毒率75%到72 h獲毒率82%，RNAi干擾BtabCSP6后48 h獲毒率為53%，比對照組24 h的獲毒率高4%，在72 h后煙粉虱獲毒率為59%，相比對照顯著降低了23%(P<0.05)。傳毒率隨著番茄植株上煙粉虱MED隱種雌成蟲數(shù)量的增多呈上升趨勢。使用1頭煙粉虱傳毒時，對照組和處理組傳毒率均低于10%;用5頭煙粉虱傳毒時，對照組和處理組傳毒率分別為29%和16%；用10頭煙粉虱傳毒時，處理組的傳毒率比對照組低23%;用25頭煙粉虱進行傳毒時，對照組傳毒率達到92%，相比處理組的高出25%，二者差異極顯著(P<0.01)；用50頭煙粉虱傳毒時對照組傳毒率幾乎可達到100%，而處理組傳毒率僅為80%，二者差異顯著(P<0.05)。

圖2 飼喂dsGFP和dsBtabCSP6后48 h煙粉虱MED隱種雌成蟲中BtabCSP6相對表達量Fig.2 Relative expression level of BtabCSP6 in female adults of Bemisia tabaci MED at 48 h after feeding dsGFP and dsBtabCSP6

圖3 飼喂dsGFP和dsBtabCSP6后48 h煙粉虱MED隱種雌成蟲的獲毒率(A) 和傳毒率(B)Fig.3 Virus acqusition rate (A) and transmission rate (B) of female adults of Bemisia tabaci MED at 48 h after feeding dsGFP and dsBtabCSP6

3 討論

本研究采用RT-qPCR檢測煙粉虱MED隱種成蟲感染TYLCV后體內(nèi)BtabCSP基因表達量，結(jié)果顯示不同BtabCSP基因的表達量差異較大(圖1)，這可能是不同基因參與不同功能造成的。例如，CSP在煙粉虱觸角中表達與其參與揮發(fā)物的識別和檢測有關(guān)，在胸部、足以及腹部的表達與覓食場所選擇有關(guān)(Zengetal.,2019)；此外，RNAi實驗證明CSP除了參與昆蟲嗅覺感知外還與昆蟲發(fā)育有關(guān)，并且可以作為效應蛋白觸發(fā)植物生理防御反應、作為潤濕劑降低溶液表面張力(Liuetal.,2016;Zengetal.,2019)。本研究還發(fā)現(xiàn)不同BtabCSP基因在雌雄成蟲之間差異較大(圖1)，這種差異首先會被認為是生殖因素的影響所致，因為雌成蟲具備生殖產(chǎn)卵的特點且為二倍體，相比單倍體的雄成蟲來說，核DNA含量也更加豐富，轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果也證明了較多功能性基因會在雌成蟲中高表達(Guoetal.,2014)，但本研究結(jié)果更傾向于感染TYLCV后BtabCSP基因表達量的變化。已有研究表明，煙粉虱雌成蟲在葉背面的刺探時間高于雄成蟲(盧少華等,2015)，且無論是MED或MEAM1隱種，雌成蟲的攝食能力均優(yōu)于雄成蟲，從而造成煙粉虱MED隱種雌成蟲在TYLCV的獲得和傳播方面也更加有效(Guoetal.,2014)。因此，本研究以未感染TYLCV的煙粉虱雌雄成蟲中BtabCSP基因的表達量作為參照，分析感染后BtabCSP基因表達量的差異(圖1)，確定感染TYLCV后雌成蟲體內(nèi)表達明顯上調(diào)，且與雄成蟲之間也有差異表達的基因，探明其對病毒傳播是否造成影響。結(jié)果顯示BtabCSP6在雌雄成蟲之間的表達量具有顯著差異，且在雌成蟲中高表達(圖1)，因此推測BtabCSP6更可能成為煙粉虱MED隱種雌成蟲獲得與傳播TYLCV過程中發(fā)揮作用的關(guān)鍵基因。煙粉虱雌成蟲在生存能力、傳毒效率、寄主適應性等方面均優(yōu)于雄成蟲，且個體數(shù)量會直接影響種群密度，這也是TYLCV會隨著煙粉虱種群數(shù)量上升而大暴發(fā)的重要原因。探究雌成蟲傳播病毒過程中發(fā)揮作用的關(guān)鍵基因，并對其進行干擾，從而減少煙粉虱種群數(shù)量，阻礙病毒傳播并減緩病毒蔓延，為防治番茄病害提供新的思路和理論依據(jù)，但其內(nèi)在的分子機制仍需要深入研究。

本研究合成dsGFP和dsBtabCSP6并與15%的蔗糖混配為飼喂液飼喂煙粉虱MED隱種雌成蟲，干擾靶標基因BtabCSP6的表達(圖2)，分析干擾前后煙粉虱對TYLCV的獲毒率(圖3:A)與傳播率(圖3:B)的結(jié)果可知，煙粉虱MED隱種雌成蟲在不同獲毒時間段的獲毒率均比飼喂dsGFP的對照組低，且在48 h存在顯著差異，不僅如此，獲毒的煙粉虱MED隱種雌成蟲在飼喂dsBtabCSP6 48 h后，不同數(shù)量煙粉虱的傳毒率相比對照也大大降低，雖然干擾BtabCSP6并不能完全阻斷病毒傳播，但仍然考慮BtabCSP6對傳毒獲毒造成了一定影響，實驗結(jié)果符合預期，證明BtabCSP6可以影響TYLCV的傳播，BtabCSP6可能是與TYLCV傳毒獲毒相關(guān)的基因，但不一定是最關(guān)鍵的基因。之前研究表明，TYLCV侵染煙粉虱后，病毒粒子可以在體內(nèi)循環(huán)至血淋巴，且存在于整個生命周期，植物感染TYLCV后防御反應被抑制，營養(yǎng)條件的改變反而更利于煙粉虱種群增長，因此，煙粉虱獲毒2 d再傳毒，侵染率基本可以達到100%(丁天波等,2021)。采用相同的RT-qPCR分析方法發(fā)現(xiàn)，煙粉虱MED隱種尤其是雌成蟲，獲得和傳播TYLCV的能力均顯著高于MEAM1隱種，表明病毒傳播能力的差異不僅與生物型相關(guān)，還受性別的影響(Guoetal.,2014)。本研究中BtabCSP6對傳毒獲毒造成了一定影響，據(jù)報道，在昆蟲味覺感受器中高度表達的CSP在攝食中可以作為疏水性營養(yǎng)物質(zhì)的增溶劑以及口器表面活性劑，減少吮吸過程中的壓力(Sánchez-Graciaetal.,2009)，考慮本實驗獲毒率和傳毒率的降低，其原因可能是干擾BtabCSP6后煙粉虱刺吸次數(shù)減少造成的。另有研究表明，在斜紋夜蛾Spodopteralitura中腸中高表達的CSP可能在特化和適應不同生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮功能(Yietal.,2017)，中腸是病毒在體內(nèi)運輸?shù)囊坏乐匾琳希彩遣《灸芊裨诶ハx體內(nèi)存留的關(guān)鍵，因此BtabCSP6也可以考慮是否在中腸高表達，進而影響昆蟲的獲毒與傳毒。本實驗推測BtabCSP6是與TYLCV傳毒獲毒相關(guān)的基因，其抑制病毒傳播的機理還有待深入挖掘。BtabCSP6有望成為減緩病毒傳播的新靶標基因，RNAi也可以考慮用做控制煙粉虱MED種群的新方法，成為殺蟲劑的替代品且對植物無毒害作用。

現(xiàn)在已經(jīng)篩選出煙粉虱MED隱種中的許多基因可能成為RNAi的作用靶標，如Hormone-receptor-likein78 (BtabHR78),Ultraspiracle(USP),Nuclearreceptorsubfamily5groupAmember1 (NR5A1),Hormonereceptor-likein39 (HR39),Estrogen-relatedreceptor(ERR)和Pannier(PNR)(Heetal.,2020)；很多基因成為RNAi的靶標候選基因：乙酰膽堿受體α亞基、α葡萄糖苷酶、水通道蛋白、熱休克蛋白、海藻糖酶和海藻糖轉(zhuǎn)運蛋白基因等(Vyasetal.,2017)。干擾BtabCSP6表達可以從傳播過程阻礙病毒獲取和擴散，因此化學感受蛋白除了可以識別并結(jié)合周圍環(huán)境中的信號分子使機體做出相應的反應外，還可以與煙粉虱體內(nèi)相應的受體相互作用控制病毒在體內(nèi)的傳導。本實驗發(fā)現(xiàn)BtabCSP6影響了TYLCV的傳播，未來可以定位與BtabCSP6相互作用的受體，闡明CSPs與病毒之間相互作用的分子機制，開發(fā)新的生物殺蟲劑來防治煙粉虱。