鮮義坤，瞿桂英，廖友平，馬黎民，張亞輝，劉張育，魏 明，黃明亞，張貴權(quán)

（1.四川省自然資源科學(xué)研究院，四川 成都 610041；2.大熊貓國家公園珍稀動物保護(hù)生物學(xué)國家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611830；3.中國大熊貓保護(hù)研究中心，四川 成都 611830；4.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長春 130118；5.成都大帝漢克生物科技有限公司，四川 成都 611130；6.四川省動物采食調(diào)控工程技術(shù)研究中心，四川 成都 611130）

0 引言

小熊貓（Ailurus fulgens）屬于喜馬拉雅—橫斷山脈特有的珍稀獸類，被CITES（國際瀕危動植物物種國際貿(mào)易公約）列入附錄Ⅰ，被IUCN（國際自然資源保護(hù)聯(lián)盟）列為瀕危動物，為我國二級重點(diǎn)保護(hù)動物［1］。小熊貓與大熊貓?jiān)谒拇ㄅ璧匚骶壍尼荷?、邛崍、涼山和相嶺山系同域共存，相互伴生，食性相同，均以低營養(yǎng)價(jià)值的竹類為主要食物。但小熊貓只食竹葉和竹筍［2］，不食竹稈，且對不同竹種的葉和筍有著明顯的選擇性［3］。據(jù)測算，小熊貓全年食用竹葉的比例可高達(dá)89.9%［4］。小熊貓?bào)w色鮮艷、體態(tài)優(yōu)美，頗具觀賞性，具有較高的科普和科研價(jià)值，近年被許多地方的動物園、公園、保護(hù)區(qū)和科研院所與中心等單位越來越多地人工飼養(yǎng)。

飼養(yǎng)動物的經(jīng)典理念為“養(yǎng)重于防，防重于治”。喂給動物的食物即使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)種類齊全、含量豐富，但如果動物不攝食或少攝食，就會失去或降低食物應(yīng)有的飼喂價(jià)值。對于飼養(yǎng)大熊貓、小熊貓等植食性野生動物而言，首要的理念應(yīng)為“味重于養(yǎng)”，即食物的氣味和味道（二者統(tǒng)稱“風(fēng)味”）要適合動物的偏好，動物才可能多吃、多長、少生病、多產(chǎn)出，展現(xiàn)食物的營養(yǎng)功能。早在1940 年，美國科研人員就開始研究仔豬和雞的飼料適口性問題。我國同類研究始于1992 年，首先研究了飼料調(diào)味劑對仔豬采食量和生長的影響，現(xiàn)已在家養(yǎng)動物嗅覺、味覺、采食調(diào)控機(jī)理等方面取得了豐碩的理論成果，并有大量的產(chǎn)品應(yīng)用于家畜、家禽、寵物、水產(chǎn)動物和特種經(jīng)濟(jì)動物的日糧中［5］。野生動物在這些方面雖然有過零星報(bào)道［6-10］，但還缺乏系統(tǒng)性和深入性探究。本研究根據(jù)圈養(yǎng)小熊貓喜歡的食物風(fēng)味特點(diǎn)、攝食行為習(xí)慣、嗅覺和味覺生理特征，在國內(nèi)外率先自主研發(fā)出竹葉增食劑，并于2022 年4 至6 月間先后3 次在中國大熊貓保護(hù)研究中心都江堰基地進(jìn)行了飼喂試驗(yàn)，測試了竹葉增食劑的實(shí)際效果，并進(jìn)一步探討了小熊貓攝食竹葉的風(fēng)味機(jī)理，研究結(jié)果也可為圈養(yǎng)大熊貓竹葉誘食劑的研制提供借鑒和參考。

1 竹葉增食劑的研制

1.1 設(shè)計(jì)理論依據(jù)

竹葉增食劑的設(shè)計(jì)理論依據(jù)主要有以下5 個(gè)方面：①小熊貓的食性屬植食性，而植食性的很多動物主要根據(jù)氣味尋找食物［6］。②經(jīng)攝食行為觀察，小熊貓?jiān)谶M(jìn)食前都要嗅聞竹葉的氣味。③食物的氣味和味道分別由動物的嗅覺和味覺感知，是動物對食物安全性的一種常用判斷方法；對熟悉的氣味，動物才可能攝食；對喜歡的味道，動物才會較多地?cái)z食。④小熊貓具有完整的甜味受體基因［7，8］。⑤圈養(yǎng)小熊貓喜歡攝食窩窩頭、蘋果和胡蘿卜等食物，這些食物共有的香氣特點(diǎn)是甜氣［9，10］，共有的味道特點(diǎn)是甜味?；谏鲜? 個(gè)方面的理論依據(jù)，設(shè)計(jì)竹葉增食劑時(shí)既要有作用于小熊貓嗅覺的香氣，又要有作用于小熊貓味覺的味道。

1.2 原料選用原則

鑒于我國目前尚無人工飼養(yǎng)小熊貓的食物添加劑要求或標(biāo)準(zhǔn)，在選用竹葉增食劑的原料時(shí)遵循“從食物中來，到食物中去”的原則。小熊貓?jiān)谌斯わ曫B(yǎng)條件下與圈養(yǎng)大熊貓同食一樣的窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍和竹葉，酌情選用已從圈養(yǎng)大熊貓各類食物中測出的典型香氣成分物質(zhì)［9-15］，并達(dá)到我國人用食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)——《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）、《食品用香料通則》（GB 29938—2020）和2013 年12 月30 日農(nóng)業(yè)部公告第2045 號《飼料添加劑品種目錄》要求?？紤]到竹葉增食劑應(yīng)有中等偏上的嗅感愉悅度、香氣持久性和口感甜度，也可從上述國家標(biāo)準(zhǔn)和要求中適當(dāng)選用其他香料與甜味物質(zhì)。

1.3 研制技術(shù)路線

竹葉增食劑的研發(fā)經(jīng)多次的配方設(shè)計(jì)、模擬調(diào)制、工藝流程改進(jìn)、使用方法完善，終獲較好的飼喂效果，具體研制技術(shù)路線如圖1 所示。

圖1 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的研制技術(shù)路線Figure 1 The technical route of the development of the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

1.4 食品級單體呈香物質(zhì)的初步篩選

基于圈養(yǎng)小熊貓所食窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍和竹葉的氣味特點(diǎn)，創(chuàng)擬竹葉增食劑的整體氣味指標(biāo)參數(shù)和主要香氣指標(biāo)參數(shù)。按照上述原料選用原則，根據(jù)目標(biāo)參數(shù)和香原料的主要香氣和味道特征，初步篩選出擬用的66 種食品級單體呈香物質(zhì)（表1）。由表1 可知，青香相關(guān)的單體呈香物質(zhì)有22 種，甜氣有23 種，油脂（脂肪）氣有19 種，奶香有17 種，葉香（青葉香）有2 種，草香（青草香）有2 種，木質(zhì)氣（木香）有10 種，青蘋果氣有2 種。某種單體呈香物質(zhì)可呈現(xiàn)多種香氣，取決于嗅感閾值、相對濃度、溶劑、其他相生相克的呈香物質(zhì)濃度等。

表1 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的擬用單體呈香物質(zhì)Table 1 The monomer aromatic substances maybe selectively used in the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

（續(xù)表1）

1.5 風(fēng)味特點(diǎn)

香氣特點(diǎn)：7 名專業(yè)人員分別對蘸有適量竹葉增食劑液體的專用紙條進(jìn)行單獨(dú)嗅感盲評，分辨出竹葉增食劑的整體氣味指標(biāo)、主要香氣種類及其相對強(qiáng)弱。氣味相對強(qiáng)弱采用10 分定義的標(biāo)度方法計(jì)分，具體方法參照相關(guān)文獻(xiàn)［15］。每個(gè)評分指標(biāo)的最終得分為去掉1 個(gè)最高評分和1 個(gè)最低評分后的算術(shù)平均數(shù)（n ＝5）。整體氣味指標(biāo)和主要香氣指標(biāo)的品評平均得分分別如圖2、圖3 所示。

圖2 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的嗅感品評整體氣味指標(biāo)平均得分Figure 2 The average scores of overall odor indexes by olfactory evaluations of the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

從圖2 可見，竹葉增食劑具有揮發(fā)屬性，且香氣強(qiáng)度較好，愉悅度和透發(fā)性中等偏上。從圖3 可見，竹葉增食劑的青香明顯，并有輕微的甜氣，微微的油脂氣、奶香、葉香、草香和木質(zhì)氣，表明竹葉增食劑的香氣是以青香和甜氣為主的多種復(fù)合型香氣，可從表1 的單體呈香物質(zhì)中查到圖3 中主要香氣指標(biāo)的相應(yīng)支撐物質(zhì)，說明專業(yè)人員的嗅感品評結(jié)果是有物質(zhì)依據(jù)的，與配方相符。

圖3 圈養(yǎng)小熊貓竹葉增食劑的嗅感品評主要香氣指標(biāo)平均得分Figure 3 The average scores of main aroma indexes by olfactory evaluations of the bamboo leaf intake enhancer for captive red pandas

味道特點(diǎn)：經(jīng)6 位專業(yè)人員的口感品嘗，竹葉增食劑的甜味突出，有奶味和青香味，但無苦澀味。

2 飼喂試驗(yàn)

2.1 受試小熊貓與飼養(yǎng)圈舍

受試小熊貓1—10 歲，共23 只（8 只雌性、15 只雄性），分群混養(yǎng)于中國大熊貓保護(hù)研究中心都江堰基地林澤園，臨床健康狀況良好，基本信息見表2。受試小熊貓的飼養(yǎng)圈舍原本為飼養(yǎng)大熊貓所建，由內(nèi)舍和外圈組成，內(nèi)舍有一人工可控的出入口與外圈相通，圈舍所處的自然環(huán)境條件、內(nèi)舍和外圈里面的設(shè)施條件參考有關(guān)文獻(xiàn)設(shè)置［20］，具有自由隨意活動的適宜面積和空間，但不同圈舍所在的地勢和所養(yǎng)的動物只數(shù)有所差異。

表2 受試小熊貓和飼喂試驗(yàn)的一些相關(guān)信息Table 2 Some information about tested red pandas and their feeding trials

2.2 供試竹種

試驗(yàn)共用2 個(gè)竹種：①八月竹Chimonobambusa szechuanensis（Rendle）P.C.Keng，產(chǎn)于四川省汶川縣三江鎮(zhèn)，竹齡2 年，在2022 年4 月下旬、5 月底至6月初的試驗(yàn)期間使用；②刺黑竹（當(dāng)?shù)厮追Q牛尾竹）Chimonobambusa purpurea J.R.Xue ＆ T.P.Yi，產(chǎn)于四川省崇州市文井江鎮(zhèn)，竹齡3 年，在2022 年6 月下旬的試驗(yàn)期間使用。上述2 個(gè)供試竹種均為人工栽培，并經(jīng)專家鑒定確認(rèn)，且屬圈養(yǎng)大熊貓和小熊貓的常喂竹種。

2.3 飼喂試驗(yàn)方法（自由選擇攝食試驗(yàn)法）

從購回的同捆竹子（包括稈、枝、葉，下同）中挑選出本次試驗(yàn)用竹，再隨機(jī)分成竹子根數(shù)相同、竹稈粗細(xì)和枝葉數(shù)量大致相近的對照組和試驗(yàn)組，稱重。試驗(yàn)組的竹稈基部貼口序紙作為標(biāo)記，向試驗(yàn)組的竹葉霧化噴施竹葉增食劑，而對照組的竹稈不貼口序紙，也不噴施竹葉增食劑。然后將對照組和試驗(yàn)組的竹子擺放在內(nèi)舍和（或）外圈里面常放食物的地方，每處均放試驗(yàn)組和對照組的竹子各3 根，兩組竹子相鄰，打開內(nèi)舍與外圈之間的推拉門，小熊貓可隨意進(jìn)出并自由選擇內(nèi)舍和外圈的對照組竹葉或（和）試驗(yàn)組竹葉攝食。若單獨(dú)在內(nèi)舍進(jìn)行午餐時(shí)段測試時(shí)才關(guān)閉內(nèi)舍與外圈之間的出入口，其他時(shí)段均打開出入口。每天的飼喂有3 次，早飼、午飼和晚飼。測試時(shí)段結(jié)束后從圈舍中取出對照組和試驗(yàn)組的竹子，觀察竹葉攝食情況，并對剩余的竹子稱重。各圈舍飼養(yǎng)的小熊貓只數(shù)、試驗(yàn)日期和天數(shù)、內(nèi)舍和外圈擺放對照組和試驗(yàn)組竹子的處數(shù)如表2 所示。下一次飼喂竹子時(shí)對照組和試驗(yàn)組竹子要相互交換擺放的位置，以消除竹子的擺放位置對小熊貓攝食對照組和試驗(yàn)組竹葉數(shù)量的影響。除試驗(yàn)組竹子要噴竹葉誘食劑外，窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍的飼喂時(shí)間、次數(shù)、地點(diǎn)、數(shù)量等飼養(yǎng)管理工作流程均與往常相同。試驗(yàn)期間每天擺放和取出竹子的大致時(shí)間如表3 所示。

表3 試驗(yàn)期間每天擺放和取出試竹的大致時(shí)間Table 3 Approximate time of placing and removing the tested bamboos everyday during trial periods

2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量＝試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹子的投放重量-食后竹子的剩余重量；平均每只受試小熊貓?jiān)囼?yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量＝試驗(yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量／試驗(yàn)圈舍的受試小熊貓只數(shù)；平均每次試驗(yàn)每只受試小熊貓?jiān)囼?yàn)組或?qū)φ战M竹葉的攝食量（受試小熊貓攝食竹葉量的均值）＝每次試驗(yàn)的平均每只受試小熊貓?jiān)囼?yàn)組或?qū)φ战M的竹葉攝食量之和／試驗(yàn)次數(shù)；試驗(yàn)組竹葉的增食量＝試驗(yàn)組竹葉的攝食量-對照組竹葉的攝食量；試驗(yàn)組的竹葉增食率＝試驗(yàn)組竹葉的增食量／對照組竹葉的攝食量× 100%。試驗(yàn)組和對照組食后竹子的剩余重量均不包含竹子在攝食期間自然蒸發(fā)的粗水分重量。所得數(shù)據(jù)通過GranphPad Prism 8.0.2 軟件進(jìn)行配對t 檢驗(yàn)。

2.5 結(jié)果及分析

自由選擇攝食行為觀察：對受試小熊貓?jiān)陲暫蟛痪米杂蛇x擇攝食情況進(jìn)行隨機(jī)、短時(shí)觀察，結(jié)果匯總于表4。從表4 可見，試驗(yàn)共觀察了8d，總計(jì)14次。在不同時(shí)間，早飼后觀察了3 次，午飼后觀察了2次，晚飼后觀察了9 次；在不同編號的圈舍（不同地勢、不同朝向，養(yǎng)有不同性別和年齡的受試小熊貓），L - 01 號圈觀察了1 次，L - 03 號圈觀察了11次，L-04 號圈觀察了2 次；在不同的放竹地點(diǎn)（不同的面積、空間、空氣流通度、光照強(qiáng)度等），內(nèi)舍觀察了5 次，外圈觀察了9 次；對不同的供試竹種（不同竹種的竹葉形狀、大小和厚薄不同，氣味［13］和味道有所差異），八月竹觀察了11 次，刺黑竹觀察了3次。僅有1 只受試小熊貓?jiān)?022 年5 月29 日L-03號外圈早飼后在食對照組竹葉，可能因饑不擇食所致。除此之外，其他38 只次都在食試驗(yàn)組竹葉，占比97.44%（38 只次/39 只次）；而攝食對照組竹葉的只次占比僅為2.56%，兩組間差異極顯著（n ＝14，P ＜0.0001），說明受試小熊貓優(yōu)先選擇試驗(yàn)組的竹葉攝食具有一定的普遍性。試驗(yàn)組的竹葉比對照組的竹葉更能吸引受試小熊貓去攝食，即試驗(yàn)組竹葉因?yàn)閲娪兄袢~增食劑而增強(qiáng)了試驗(yàn)組竹葉的氣味強(qiáng)度，使之更具誘食性，同時(shí)說明竹葉增食劑的氣味類型是圈養(yǎng)小熊貓熟悉和喜歡的食物氣味類型。

表4 受試小熊貓飼后不久自由選擇攝食的短時(shí)觀察結(jié)果Table 4 Short- time observation results of free choice ingestions of captive red pandas soon after feeding

竹葉攝食量：竹葉攝食量是衡量竹葉增食劑飼喂效果好與不好的關(guān)鍵指標(biāo)。通過飼喂試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)及其統(tǒng)計(jì)分析詳見表5。由表5 可知：早餐段（早飼后至午飼前）的氣溫通常逐漸上升至高點(diǎn)，平均每次測試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對照組竹葉多46.53g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝6，P ＝0.0189），試驗(yàn)組竹葉的增食率為94.37%。午餐段（午飼后至晚飼前）常為全天氣溫最高的時(shí)段，平均每次測試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對照組竹葉多43.03g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝7，P ＝0.0222），試驗(yàn)組竹葉的增食率為73.76%。早餐延長段（早飼后至晚飼前）的氣溫通常逐漸上升至高溫區(qū)隨后逐漸下降，平均每次測試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對照組竹葉多51.32g，兩組之間的竹葉攝食量差異極顯著（n ＝14，P ＝0.0003），試驗(yàn)組竹葉的增食率為55.96%。晚餐段（晚飼后至次日早飼前）的氣溫變化通常呈V 字形，用八月竹試驗(yàn)，平均每次測試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對照組竹葉多98.54g，兩組之間的竹葉攝食量差異極顯著（n ＝24，P ＜0.0001），試驗(yàn)組竹葉的增食率為79.10%。為了驗(yàn)證竹葉增食劑是否在其他竹種上也有明顯的使用效果，在這個(gè)時(shí)段又用刺黑竹進(jìn)行了試驗(yàn)，平均每次測試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對照組竹葉多55.56g，兩組之間的竹葉攝食量差異極顯著（n ＝6，P ＝0.0063），試驗(yàn)組竹葉的增食率為54.80%。全天段（早飼后至次日早飼前），本時(shí)段的氣溫變化通常呈變形的N 字形，因氣溫較高原因，未在外圈試驗(yàn)，平均每次測試每只受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉的數(shù)量比對照組竹葉多67.50g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝5，P ＝0.0162），試驗(yàn)組竹葉的增食率為58.69%。受試小熊貓?jiān)诓煌瑴y試時(shí)段對試驗(yàn)組竹葉和對照組竹葉的平均攝食量、試驗(yàn)組竹葉的增食量和增食率有所不同，可能的主要影響因素有：①攝食節(jié)律和其他食物飼喂數(shù)量。每天的攝食節(jié)律和每次飼喂窩窩頭、蘋果、胡蘿卜、竹筍的數(shù)量多少。②環(huán)境氣溫。因竹葉增食劑有揮發(fā)性，故環(huán)境溫度越高，噴了竹葉增食劑后的試驗(yàn)組竹葉的香氣散失越快，誘食效果衰減速度就會越快。③放置時(shí)間。試驗(yàn)組竹葉在內(nèi)舍和外圈放置時(shí)間越長，其香氣散失就會越多。④投喂竹葉的數(shù)量。當(dāng)受試小熊貓食完試驗(yàn)組竹葉后，也會選擇對照組的竹葉攝食，導(dǎo)致試驗(yàn)組竹葉攝食量和對照組竹葉攝食量的差距縮小。⑤竹種的差異。不同竹種的竹葉有著不同的風(fēng)味濃度和類型［13］，或多或少會影響竹葉增食劑的使用效果。

表5 圈養(yǎng)小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉和對照組竹葉的重量差異與統(tǒng)計(jì)分析Table 5 Weight differences and statistical analyses between test and control bamboo leavesingested by captive red pandas

綜上，霧化噴施竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉無論是早飼、午飼還是晚飼，無論是放在內(nèi)舍還是外圈，無論放置時(shí)間是長還是短，無論是八月竹還是刺黑竹，無論是性別還是年齡，無論是大群飼養(yǎng)還是小群飼養(yǎng)，都能提高受試小熊貓對竹葉的攝食量，平均每次測試每只受試小熊貓的增食量為43.03—98.54g，增食率為54.80%—94.37%，說明竹葉增食劑都能夠促進(jìn)受試小熊貓攝食，具有顯著的增食效果。

竹葉再利用的試驗(yàn)：竹葉再利用是指內(nèi)舍里上一次飼喂的對照組竹子在下一次飼喂時(shí)竹子的葉片依然舒展，顏色仍然為綠色，經(jīng)霧化噴施竹葉增食劑后作為本內(nèi)舍的試驗(yàn)組竹葉。本試驗(yàn)于2022 年5月29 日和6 月2 日的晚餐段在L - 03 號圈、L - 04號圈和L-05 號圈的內(nèi)舍進(jìn)行，因氣溫較高已造成竹葉部分失水，但失水情況并不嚴(yán)重，未在外圈試驗(yàn)，只在內(nèi)舍用八月竹試驗(yàn)了5 次，受試小熊貓26只次，平均每次測試每只受試小熊貓攝食對照組竹葉的均值為63.33g，攝食試驗(yàn)組竹葉的均值為90.83g，試驗(yàn)組比對照組多食27.50g，兩組之間的竹葉攝食量差異顯著（n ＝5，SEM ＝8.08，P ＝0.0272），試驗(yàn)組竹葉的增食率為43.42%。雖然試驗(yàn)組的竹葉增食量和增食率均不及表5 中的高，但可提高受試小熊貓對本應(yīng)廢棄的竹葉的再利用，說明霧化噴施竹葉增食劑是圈養(yǎng)小熊貓對竹葉再利用的一項(xiàng)技術(shù)措施。

被食葉片的數(shù)量觀察：圈養(yǎng)小熊貓攝食精細(xì)，只食葉片，不食葉柄，更不食竹枝和竹稈。肉眼容易觀察到每根竹子的葉片被食情況，因?yàn)槿~片被小熊貓攝食后留有葉柄和竹枝。經(jīng)受試小熊貓自由選擇攝食后，試驗(yàn)組竹子的葉片，有的基本食完，有的食了大部分，多數(shù)剩葉較少，個(gè)別的食過少許。而對照組竹子的葉片，有的未食，有的食過少許，多數(shù)剩葉較多，個(gè)別的少量剩余。試驗(yàn)結(jié)果表明，噴有竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉被食片數(shù)明顯多于對照組，這也佐證了上述竹葉攝食量的測試結(jié)果。

受試小熊貓食入竹葉增食劑后的臨床健康狀況觀察：在飼喂試驗(yàn)期間和期后，每天對受試小熊貓的精神狀況、行為姿勢、飲食排泄、活動規(guī)律等情況進(jìn)行觀察。從2022 年4 月20 日試驗(yàn)開始，到8 月12日為止，每只受試小熊貓的臨床健康狀況都很正常，無一生病治療，而且如數(shù)健在。養(yǎng)于L-04 號圈，呼名“辰月”的受試小熊貓?jiān)陲曃乖囼?yàn)期間正常發(fā)情、交配和妊娠，在飼喂試驗(yàn)期后的7 月16 日正常分娩2仔。說明竹葉增食劑不影響受試小熊貓的臨床健康狀況和自然繁殖。

3 討論

從上述測試結(jié)果可知，竹葉增食劑可增強(qiáng)竹葉對受試小熊貓的誘食性，提高受試小熊貓對竹葉的攝食量。其誘食機(jī)制可能如下：竹葉增食劑霧化噴施于竹葉后，增強(qiáng)了竹葉的香氣強(qiáng)度，也增強(qiáng)了來自竹葉的香氣的擴(kuò)散性，使受試小熊貓不但在較遠(yuǎn)處就能感知，而且精準(zhǔn)識別香氣的發(fā)源地；竹葉增食劑的香氣與新鮮竹葉的本身氣味相互融合后，改善了竹葉的香氣類型，組建后的復(fù)合型香氣為受試小熊貓所熟悉，并認(rèn)知安全和可食，激發(fā)攝食欲望，樂意去攝食，導(dǎo)致受試小熊貓優(yōu)先選擇噴有竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉攝食，而不優(yōu)先選擇位置相鄰的對照組竹葉攝食。其增食機(jī)制可能如下：竹葉增食劑有突出的甜味，在霧化噴施之后可以中和或掩蓋竹葉的不良味道，減少不良味道對于攝食量的負(fù)面影響；小熊貓具有完整的甜味受體基因［7，8］，對食物的甜味敏感，圈養(yǎng)小熊貓喜食窩窩頭、蘋果和胡蘿卜，這些食物均有明顯的甜味，也是圈養(yǎng)小熊貓對有甜味的食物感興趣的例證；竹葉攝食量的多少主要取決于竹葉的味道是否適合小熊貓的味覺喜好，竹葉在霧化噴施竹葉增食劑之后滿足了受試小熊貓的味覺偏好，導(dǎo)致受試小熊貓自由選擇噴有竹葉增食劑的試驗(yàn)組竹葉較多攝食，而自由選擇位置相鄰的對照組竹葉較少攝食，這可能也是試驗(yàn)組的竹葉增食量和增食率大幅提升的理由。本文通過圈養(yǎng)小熊貓食物額外補(bǔ)充香氣和味道的試驗(yàn)方法，也證實(shí)了食物的氣味和味道是小熊貓?jiān)跀z食過程中最重要的兩種感覺與認(rèn)知，分別決定小熊貓是否攝食和攝食量的多少，屬小熊貓自主調(diào)控?cái)z食的主要食物因子。

鑒于大熊貓與小熊貓食性相同，均食相同竹種的竹葉和竹筍，而小熊貓?bào)w型小、食量小、易飼養(yǎng)、成本較低、性格溫順、對人的傷害性較低，在探究攝食機(jī)理、食量調(diào)控措施等方面可作為大熊貓的動物模型進(jìn)行先行試驗(yàn)。

4 結(jié)論

本研究在國內(nèi)外率先自主研制出的竹葉增食劑，經(jīng)專業(yè)人員的嗅感和口感品評，具有揮發(fā)屬性，香氣強(qiáng)度較好，愉悅度和透發(fā)性中等偏上，青香明顯，并有輕微的甜氣，甜的味道突出。通過圈養(yǎng)小熊貓自由選擇攝食試驗(yàn)組竹葉（霧化噴施竹葉增食劑）和對照組竹葉（不噴竹葉增食劑）的飼喂效果測試。結(jié)果表明：①受試小熊貓優(yōu)先選擇試驗(yàn)組的竹葉攝食，竹葉增食劑對小熊貓具有誘食功能。②在一天里的不同時(shí)段，受試小熊貓攝食試驗(yàn)組竹葉比對照組竹葉的平均增食量和增食率分別為43. 03—98.54g和54.80%—94.37%。對圈養(yǎng)小熊貓而言，竹葉增食劑能夠增強(qiáng)竹葉的誘食性，且竹葉增食效果顯著。

本文初步探討了小熊貓攝食竹葉的風(fēng)味機(jī)理，竹葉增食劑為提高圈養(yǎng)小熊貓對竹葉的食用率和降低竹葉的廢棄率提供了一項(xiàng)技術(shù)措施，具有實(shí)際應(yīng)用潛質(zhì)，但仍有待進(jìn)一步探究不同類型的氣味或（和）味道及其不同補(bǔ)加劑量對圈養(yǎng)小熊貓攝食竹葉行為和數(shù)量的影響。

（致謝：承蒙成都大帝漢克生物科技有限公司喻麟董事長和李小兵總經(jīng)理的大力支持，竹葉增食劑的研制工作得以順利實(shí)施，西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院的包清彬教授、成都大帝漢克生物科技有限公司的李松柏高級工程師、鄧虹高級工程師、武偉工程師參加了風(fēng)味品評，吳勁旭老師核定了供試竹種的學(xué)名，四川省自然資源科學(xué)研究院的張玉婷同事在數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方面提供了幫助，在此一并深表謝意?。?/p>