張小雨，李木子，秦立得，王曉茵，孫曉亮，曹旭敏，宋翠平，古少鵬，趙思俊

（1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，山西晉中 030801；2.中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

食品安全問(wèn)題一直以來(lái)備受關(guān)注，尤其是肉、蛋、奶中的獸藥殘留問(wèn)題。造成動(dòng)物源性食品中獸藥殘留超標(biāo)的主要是抗生素、合成抗菌藥以及激素類(lèi)和鎮(zhèn)靜劑類(lèi)藥物。動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留不僅會(huì)對(duì)人類(lèi)健康造成威脅，還會(huì)誘導(dǎo)藥物產(chǎn)生耐藥性，繼而引發(fā)公共衛(wèi)生問(wèn)題，此外排入環(huán)境水體中的含有藥物殘留的動(dòng)物糞便也會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境安全造成影響[1-2]。因此，開(kāi)展科學(xué)、有效的獸藥殘留檢測(cè)是監(jiān)督控制藥物濫用的手段之一。免疫學(xué)技術(shù)基于抗原、抗體的特異性反應(yīng)，具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)單、快捷等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于獸藥殘留檢測(cè)[3]。使用免疫分析方法的關(guān)鍵是要獲得高質(zhì)量的特異性抗體，而單克隆抗體（簡(jiǎn)稱(chēng)單抗）是由單一B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體[4]，其理化性狀高度均一，生物活性單一，還具有純度高、制備成本低等特點(diǎn)，因此單抗技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展，對(duì)免疫分析方法的普及起了巨大推動(dòng)作用。為此，本文主要對(duì)單抗的制備及基于單抗的免疫分析方法在獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行簡(jiǎn)要綜述。

1 單抗制備

1.1 人工抗原制備

獸藥的相對(duì)分子質(zhì)量一般都小于1 000，通常被認(rèn)為是小分子，只有反應(yīng)原性，缺乏免疫原性，屬于半抗原，因而常以牛血清白蛋白（BSA）[5]、卵清蛋白（OVA）[6]、血藍(lán)蛋白（KLH）[7]等蛋白質(zhì)作為載體，與其偶聯(lián)構(gòu)成完全抗原，以此作為免疫原免疫動(dòng)物使其產(chǎn)生免疫反應(yīng)。

1.1.1 完全抗原合成 人工抗原的制備主要取決于目標(biāo)小分子的分子結(jié)構(gòu)，尤其是其活性基團(tuán)的組成和化學(xué)結(jié)構(gòu)[5-6]。一般而言，若小分子包含一個(gè)活性基團(tuán)，活性基團(tuán)就可以直接與載體蛋白偶聯(lián)成一個(gè)完全抗原。如果小分子不具有可與載體蛋白直接偶連的基團(tuán)，則需要通過(guò)氧化、水解或還原等反應(yīng)，獲得活性基團(tuán)后再與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)[8]，而衍生物的產(chǎn)生使原有化學(xué)結(jié)構(gòu)特征發(fā)生變化，進(jìn)而會(huì)對(duì)免疫學(xué)特性造成一定影響，因此在化學(xué)改造過(guò)程中需引起注意。小分子的中間體也可用于合成含有代謝物或降解產(chǎn)物的半抗原。小分子與載體蛋白常見(jiàn)的偶聯(lián)方法有碳二亞胺法[9]、戊二醛法[6]、重氮化法[10]、混合酸酐法[7]、活性酯法[5]、物理法[11]等。根據(jù)小分子半抗原的結(jié)構(gòu)不同可選擇不同的偶聯(lián)方法：（1）通過(guò)碳二亞胺法、混合酸酐法和活性酯法，將小分子的羧基與載體蛋白的氨基進(jìn)行偶聯(lián)[12]，如雌二醇[5]、頭孢噻呋鈉[9]。（2）通過(guò)重氮法、戊二醛法，將其與載體蛋白偶聯(lián)，如磺胺氯吡嗪鈉[10]、克倫特羅[6]。（3）在不破壞小分子結(jié)構(gòu)的情況下，利用離子之間的相互作用和疏水性，通過(guò)物理偶聯(lián)方式與蛋白質(zhì)結(jié)合形成完整抗原，如Liu等[13]制備的氨芐青霉素（AMP）人工抗原。為了突出小分子的結(jié)構(gòu)特征位點(diǎn)，無(wú)論采用哪種偶聯(lián)方法，小分子與蛋白質(zhì)之間都有一定長(zhǎng)度的連接臂。該結(jié)構(gòu)的存在有利于產(chǎn)生針對(duì)目標(biāo)小分子的抗體，且小分子與蛋白質(zhì)的摩爾比通常為15:1～20:1[14]。

1.1.2 完全抗原純化與鑒定 偶聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)物中包含半抗原與蛋白的偶聯(lián)物、未反應(yīng)的半抗原、游離的蛋白質(zhì)以及蛋白質(zhì)自身聚合物，所以要對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行純化，以獲得純度較高的人工抗原。常用的純化方法有離心、透析和層析。除此之外，還要對(duì)人工合成的抗原進(jìn)行鑒定，判定其結(jié)合情況。常用的抗原鑒定方法有動(dòng)物免疫法[15]、電泳法[16]、光譜法[17]、質(zhì)譜法[18]等。

1.2 單抗制備

用來(lái)制備單抗的動(dòng)物主要有小鼠、大鼠和兔。動(dòng)物種類(lèi)的選擇取決于所使用的骨髓瘤細(xì)胞類(lèi)型。用于雜交瘤技術(shù)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞系一般來(lái)源于BALB/c 小鼠，而大鼠骨髓瘤細(xì)胞系一般來(lái)源于LOU/c 大鼠，因此BALB/c 小鼠、LOU/c 大鼠是雜交瘤生產(chǎn)最常用的免疫動(dòng)物。兔單抗是Katherine等[19]于1995 年首次在轉(zhuǎn)基因兔中成功制得骨髓瘤樣腫瘤后，又經(jīng)Pytela 等[20]不斷改進(jìn)最終開(kāi)始生產(chǎn)的。實(shí)驗(yàn)室常選擇新西蘭大白兔或日本單耳白家兔用于兔單抗制備。比起鼠單抗，兔單抗具有諸多優(yōu)點(diǎn)：兔抗血清中的抗體親合力通常較高，并且與鼠抗血清相比，還可識(shí)別更多的表位；兔單抗能識(shí)別許多不能引起小鼠明顯免疫效果的抗原；此外，兔的脾臟更大，不僅可以將其用于更多的融合試驗(yàn)，還可大大提高高通量篩選融合細(xì)胞的可能性。

免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原性質(zhì)不同而定，選擇合適的免疫方案有利于提高細(xì)胞融合的成功率，并獲得高質(zhì)量抗體。免疫方案包括的因素有很多，如抗原性質(zhì)、純度、數(shù)量以及間隔時(shí)間、免疫途徑、免疫次數(shù)、佐劑選擇等。免疫間隔時(shí)間應(yīng)當(dāng)適宜，因?yàn)榭乖碳さ臅r(shí)間間隔對(duì)再次引起的免疫應(yīng)答水平起決定性作用。若間隔過(guò)短，則應(yīng)答效果降低。這是因?yàn)槌醮螒?yīng)答產(chǎn)生的抗體水平依舊很高，可與再次刺激的抗原相結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物而被迅速清除[21]；免疫過(guò)于頻繁，還可造成免疫原過(guò)量，使機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受。若間隔太長(zhǎng)，則應(yīng)答效果也會(huì)降低。這是因?yàn)槌醮蚊庖吆螽a(chǎn)生的抗體先呈對(duì)數(shù)增值，到達(dá)頂峰后就會(huì)激活機(jī)體的抑制作用，抗體增長(zhǎng)速度開(kāi)始下降，若此時(shí)對(duì)動(dòng)物加強(qiáng)免疫則產(chǎn)生的抗體水平較低。常用的獸用免疫佐劑[22]包括油佐劑、蜂膠佐劑、脂質(zhì)體佐劑、藥物類(lèi)佐劑、微生物成分及其產(chǎn)物佐劑、鋁膠佐劑。常用的免疫途徑包括皮下、肌內(nèi)、靜脈和腹腔注射等。綜合考慮免疫操作方便程度與抗體效價(jià)等因素，實(shí)驗(yàn)室操作普遍采用皮下注射[23]。

應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備目的小分子藥物的單抗，通常選擇6～8 周齡的BALB/c 小鼠，一般需要免疫4 次，免疫時(shí)通常加入弗式佐劑，免疫間隔時(shí)間一般為14 d 左右，每次免疫后7 d 檢測(cè)效價(jià)，若第3次免疫后測(cè)定效價(jià)在1:10 000 以上則可以進(jìn)行細(xì)胞融合。取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞用化學(xué)融合劑（聚乙二醇）[15]、物理方法（電刺激）[24]或者生物方法（仙臺(tái)病毒）[25]促使這兩種細(xì)胞融合，再用HAT 培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，得到融合的雜交瘤細(xì)胞，用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）篩選出能分泌目標(biāo)抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)并克隆。采用紫外分光光度法[26]、SDS-PAGE 電泳法[18]（或結(jié)合薄層掃描分析[27]）、ELISA[28]和Western Blot[29]等方法測(cè)定純化率、回收率以及免疫活性，以鑒定純化抗體。

2 在獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

ELISA與膠體金免疫層析法（gold immunochromatographic assay，GICA）是目前應(yīng)用最廣泛的基于單抗的獸藥殘留檢測(cè)方法。目前，基于單抗制備的獸藥殘留ELISA 檢測(cè)試劑盒、膠體金檢測(cè)試紙條等被廣泛使用，其準(zhǔn)確度和精密度都符合國(guó)家要求；多數(shù)產(chǎn)品在研制的過(guò)程中不僅對(duì)其檢測(cè)限、特異性進(jìn)行了驗(yàn)證，同時(shí)選取一定的樣品基質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)，均取得較優(yōu)的檢測(cè)效果。但有一些檢測(cè)方法或許是因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)等問(wèn)題，有一定的適用范圍，不能用于所有的樣品檢測(cè)。

2.1 抗生素類(lèi)

Burkin 等[30]用離子載體抗生素鹽霉素（SAL）與BSA 的結(jié)合物作為免疫原免疫家兔，從而產(chǎn)生了能夠緊密識(shí)別SAL（100%）及其結(jié)構(gòu)類(lèi)似物NAR（96.5%）的多克隆抗體，基于此建立了一種檢測(cè)雞肉、雞蛋、牛奶中鹽霉素的ELISA 方法。該方法對(duì)于SAL 及其甲基衍生物納拉辛（NAR）的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為0.55 ng/mL 和0.57 ng/mL。值得注意的是此研究第一次報(bào)道了通過(guò)使用有機(jī)溶劑進(jìn)行特殊的樣品預(yù)處理，可使牛奶中的基質(zhì)效應(yīng)基本消除，平均回收率從32%提高到93%，并闡明該現(xiàn)象與牛奶中的Na+和K+有關(guān)。同時(shí)也對(duì)雞肉與雞蛋進(jìn)行了預(yù)處理，發(fā)現(xiàn)一種簡(jiǎn)單的緩沖液提取法足以使雞肉中的回收率高達(dá)87%～110%。對(duì)于雞蛋，用乙腈（ACN）處理勻漿隨后蒸發(fā)溶劑，可消除蛋液中的基質(zhì)效應(yīng)使回收率達(dá)67%～108%。

阿維菌素類(lèi)藥物（AVMs）是由鏈霉菌產(chǎn)生的一類(lèi)新的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗寄生蟲(chóng)藥物，包括阿維菌素（AVM）、伊維菌素（IVM）、依普利霉素（EPR）和埃瑪菌素（EMA）等。Ni 等[31]選擇AVM 的C4-OH 作為偶聯(lián)位點(diǎn)與載體蛋白KLH 偶聯(lián)制備免疫原，以突出顯示屬于免疫活性部分的AVM 的非糖部分，使AVM 的抗原決定簇遠(yuǎn)離C4-OH，并最大程度地突出AVMs 的共同結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示：制備的單抗具有廣譜特異性，所建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA（ic-ELISA）方法對(duì)豬肉、肝臟、腎臟、牛肉和牛奶樣品中的AVMs 的交叉反應(yīng)率分別為IVM（100%）、AVM（141.8%）、EPR（51.2%）和EMA（48.7%）。該方法對(duì)各種基質(zhì)樣品中AVMs 的檢測(cè)限和定量限分別為0.5～5.4 μg/L和1.0～10.3 μg/L，方法回收率在78.1%～110.5%的范圍內(nèi)，變異系數(shù)低于14%。該方法制備的廣譜特異性單抗及簡(jiǎn)單的樣品制備方法，有利于實(shí)現(xiàn)AVMs 殘留的高通量分析。

Guo 等[32]分別應(yīng)用克林霉素（CLIN）、林可霉素（LIN）和吡利霉素（PIR）免疫小鼠，選出免疫效果最好的小鼠制備單抗并建立了GICA。該方法可在15 min 內(nèi)用肉眼對(duì)試紙條結(jié)果進(jìn)行半定量評(píng)估，磷酸鹽緩沖液中的LOD 分別為CLIN（1 ng/mL）、LIN（10 ng/mL）和PIR（25 ng/mL），此外在牛奶、雞蛋、牛肉和蜂蜜樣品中的CLIN、LIN 和PIR 的檢測(cè)限均可以滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

2.2 化學(xué)合成抗菌藥

王宇等[33]以氟甲喹（FLU）為原料建立了基于最佳異源包被（FLU-OVA）的ELISA。該方法的IC50為26.3 μg/L，檢測(cè)限為4.0 μg/L，定量檢測(cè)范圍為8.0～114.0 μg/L（IC20—IC80），且與其他喹諾酮類(lèi)藥物及其結(jié)構(gòu)類(lèi)似物幾乎沒(méi)有交叉反應(yīng)，特異性高。楊熠等[17]使用活性脂法，把恩諾沙星與載體蛋白OVA 進(jìn)行偶聯(lián)制備免疫原并制備了特異性的卵黃抗體，用ic-ELISA 確定包被原質(zhì)量濃度為38 ng/mL，卵黃抗體的稀釋倍數(shù)為1:64 000，方法的靈敏度（IC50）為18.207 ng/mL，LOD 為4.323 ng/mL，檢測(cè)范圍為7.350～45.102 ng/mL。與以往報(bào)道的方法相比，該方法較為靈敏，易操作，檢測(cè)范圍相對(duì)適宜。Lu 等[7]建立了可快速檢測(cè)鯰魚(yú)樣品中硝基呋喃代謝物（AMOZ）的ic-ELISA與膠體金免疫層析試紙條，ic-ELISA 方法IC50為0.049 ng/mL，膠體金免疫層析試紙條的cut-off 為0.1 μg/kg，與之前的研究相比，具有較低的cut-off（0.1 μg/kg）和LOD（0.009 μg/kg）。免疫層析檢測(cè)與ic-ELISA 檢測(cè)的結(jié)果相關(guān)性較高，這一點(diǎn)已由LC-MS 確認(rèn)。因此，該檢測(cè)方法可作為檢測(cè)AMOZ 的現(xiàn)場(chǎng)篩查工具，具有較高的靈敏度。

2.3 激素類(lèi)和β-受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物

Wei 等[6]以戊二醛為交聯(lián)劑，使其兩個(gè)醛基分別結(jié)合微懸臂梁L-半胱氨酸的氨基與克倫特羅（CL）-OVA，一旦CL 抗體與CL-OVA 結(jié)合，微懸臂梁的表面應(yīng)力就會(huì)發(fā)生變化從而發(fā)生偏轉(zhuǎn)。微懸臂梁免疫傳感器表面形成的免疫復(fù)合物越多，發(fā)生的偏轉(zhuǎn)反應(yīng)越大，因此微懸臂梁偏轉(zhuǎn)反應(yīng)程度與CL濃度呈正相關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)，該方法與沙丁胺醇、萊克多巴胺和多巴酚丁胺均無(wú)交叉反應(yīng)。以豬肉為基質(zhì)樣本監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，該方法幾乎不受基質(zhì)干擾，檢測(cè)限低至1.0×10-2μg/L，表明所制備的免疫傳感器對(duì)檢測(cè)CL 具有較高的靈敏度。

Wang 等[28]以制得的抗氫化可的松（HDS）單抗建立了可檢測(cè)牛奶中HDS 的ic-ELISA 方法和免疫層析法。該方法的IC50為0.095 ng/mL，檢測(cè)限為0.013 ng/mL，線性檢測(cè)范圍為0.026～0.356 ng/mL，與HDS 類(lèi)似物的交叉反應(yīng)性＜5%。研究開(kāi)發(fā)的ic-ELISA 和條帶分析法能夠快速、靈敏地檢測(cè)牛奶樣本中的HDS 殘留，其中免疫層析法在5～10 min 內(nèi)即可產(chǎn)生結(jié)果。

Yang 等[15]以己烯雌酚（DES）偶聯(lián)BSA 免疫小鼠制成高親和力、特異性單抗，建立了可檢測(cè)魚(yú)肉及豬肉中DES 殘留的ic-ELISA 方法。該方法靈敏度為0.49 μg/kg，檢測(cè)限為0.075 μg/kg，比色譜、液相等儀器分析更具成本效益，所需時(shí)間更短，并且易于專(zhuān)業(yè)人員操作。因此，其有可能成為檢測(cè)動(dòng)物源性食品樣品中DES 殘留的快速篩查工具。

2.4 鎮(zhèn)靜劑類(lèi)藥物

Shan 等[34]以小分子藥物氯硝西泮偶聯(lián)BSA作為免疫原，免疫小鼠制得單抗，并以此建立了可同時(shí)檢測(cè)豬樣品（肌肉、肝臟和腎臟）中氯硝西泮、氟硝西泮、硝西泮、地西泮和奧沙西泮等5 種苯二氮卓類(lèi)藥物的間接ELISA 方法。該方法不僅廣譜而且檢測(cè)限低至0.2～1.5 ng/mL。Wang 等[35]利用制備的地西泮簇特異性單抗，建立了可同時(shí)檢測(cè)7 種苯二氮卓類(lèi)藥物的ic-ELISA 方法，交叉反應(yīng)率從高到低依次為去甲西泮（140%）、地西泮（100%）、硝西泮（49%）、替馬西泮（32%）、奧沙西泮（17%）、艾司唑侖（7.5%）和阿普唑侖（2.4%）。該方法的IC50為8.9 ng/mL，且不需要復(fù)雜的樣品制備和清洗，確保了更大的檢測(cè)量，并滿(mǎn)足了苯二氮卓殘留分析的要求。孫文佳等[36]首次報(bào)道了基于氯丙嗪（CPZ）建立的間接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光酶免疫檢測(cè)方法。該方法的IC50為0.12 μg/L，檢測(cè)限為0.02 μg/L，線性范圍為0.02～24.78 μg/L，以豬肉為基質(zhì)檢測(cè)的回收率為87.4%～105.6%；與其他結(jié)構(gòu)類(lèi)似物沒(méi)有明顯交叉反應(yīng)，具有較高的靈敏度和較好的穩(wěn)定性。劉偉[37]等第一次制備了氯丙嗪（CP）的單抗，并建立了對(duì)應(yīng)的ic-ELISA 法。該方法的IC50為0.73 ng/mL，明顯優(yōu)于之前文獻(xiàn)報(bào)道的ELISA 法（IC50為20 ng/mL）。

3 展望

近年來(lái)小分子化合物檢測(cè)方法的研究日趨多樣化。在單抗科技蓬勃發(fā)展的同時(shí)，也促進(jìn)了商品化免疫試劑盒的普及，以單抗為基礎(chǔ)的食品檢驗(yàn)系統(tǒng)將在國(guó)際市場(chǎng)中占有日益重要的地位。雖然ELISA 與GICA 被廣泛使用，但這些方法在實(shí)際檢測(cè)中有一定的局限性：高度特異性的單殘留檢驗(yàn)產(chǎn)品通常只能檢出一種靶標(biāo)化合物，而在實(shí)際工作中往往偏向于需要快速檢出多種藥物殘留；基于GICA 的多殘留檢驗(yàn)產(chǎn)品也均限于單個(gè)檢測(cè)線的多殘留檢驗(yàn)。因此，此類(lèi)快速檢驗(yàn)的產(chǎn)品往往無(wú)法精確界定、量化，且僅限于對(duì)幾種藥物的檢測(cè)，僅適用于對(duì)樣品的初篩。

很多學(xué)者認(rèn)為ELISA法與GICA法簡(jiǎn)單、快速、靈敏且檢測(cè)產(chǎn)品攜帶方便，是現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)篩查的一種理想手段[38]。依前文所述，該方法雖然優(yōu)點(diǎn)居多，但其實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確呈現(xiàn)結(jié)果需基于對(duì)樣品進(jìn)行一定的前處理，而最簡(jiǎn)單的前處理方法也需要對(duì)樣品進(jìn)行離心、稀釋、過(guò)濾等操作，檢測(cè)復(fù)雜樣品時(shí)則前處理會(huì)更加復(fù)雜，因此其便捷僅僅建立在對(duì)藥物的測(cè)定環(huán)節(jié)。ELISA 法與GICA 法在實(shí)際操作中較易出現(xiàn)假陽(yáng)性，這也給實(shí)際操作帶來(lái)了困擾。傳統(tǒng)的具有一條檢測(cè)線的膠體金免疫層析產(chǎn)品，只可以定性檢測(cè)樣品中的一種藥物，或者對(duì)樣品中的某種藥物進(jìn)行半定量。雖然可以通過(guò)在同一層析膜上組合多條單一顏色檢測(cè)線來(lái)改善其檢測(cè)范圍和定量精度[39]，但由于檢測(cè)線與樣品墊距離的延長(zhǎng)，不僅反應(yīng)時(shí)間被延長(zhǎng)，還存在更多無(wú)法預(yù)估的干擾[40]。

研究新型的免疫分析技術(shù)，可提高檢驗(yàn)敏感度、穩(wěn)定性、特異性、便捷性和檢測(cè)通量。例如，通過(guò)研究納米材料聚集實(shí)現(xiàn)免疫層析試紙條（ICTS）的信號(hào)放大。因?yàn)閱蝹€(gè)納米材料發(fā)光強(qiáng)度是有限的，為了增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度，研究者開(kāi)始探索將納米材料聚集在一起來(lái)實(shí)現(xiàn)信號(hào)增強(qiáng)的目的。Yao等[41]將納米金材料分別標(biāo)記抗體和抗抗體，使其在試紙條上形成納米金-抗體-二抗-納米金復(fù)合物進(jìn)而實(shí)現(xiàn)了納米金材料的聚集。該方法對(duì)17β-雌二醇的檢測(cè)限為0.5 ng/mL，和傳統(tǒng)方法相比，靈敏度提高了3 倍。Yin 等[42]通過(guò)納米金材料的聚集實(shí)現(xiàn)了對(duì)食品樣品（豬肉、蝦和雞蛋）中的呋喃唑酮代謝物檢測(cè)，檢測(cè)限低至0.6 ng/mL。

為進(jìn)一步探索單抗在獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用，結(jié)合采用表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）技術(shù)和金標(biāo)檢測(cè)試紙（LFA）實(shí)現(xiàn)超靈敏檢測(cè)[43]，采用微流控免疫分析芯片技術(shù)聯(lián)合ELISA 的原理實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)[44]等。諸多研究將為基于單抗的免疫分析方法在獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用提供新思路。