宮頸癌屬于當(dāng)下顯著威脅女性生命安全的癌癥類型之一，應(yīng)及早診治，以提高療效，改善患者預(yù)后。目前，臨床預(yù)測早期宮頸癌的方法較多，常見如宮頸液基薄層細胞學(xué)檢測（Thinprep cytologic test，TCT）檢查、高危人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）檢測、陰道鏡檢查等[1]。而HPV感染患者被診斷為早期宮頸癌的可能性較高，應(yīng)引起重視，并結(jié)合其他檢查項目以明確診斷[2]。近幾年隨著臨床研究的不斷深入，宮頸活檢抑制基因（P16）和增殖細胞核抗原（Ki-67）蛋白表達在早期宮頸癌診斷中獲得了廣泛運用，并在一定程度上提高了該病的診斷率[3-4]?；诖?，本研究為了進一步分析宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達在高危HPV感染患者中預(yù)測早期宮頸癌的價值，就我院婦科80例高危HPV感染患者的早期宮頸癌診斷情況進行分析，旨在為臨床診斷提供參考，以提高診斷率，使患者及早獲得治療，繼而改善預(yù)后，降低死亡率?，F(xiàn)總結(jié)匯報如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料 采取回顧性研究法，選取我院婦科2020年1月-2021年1月的80例高危HPV感染患者，年齡27-68歲，平均為（46.54±10.37）歲；孕次1-6次，平均（3.22±1.06）次；產(chǎn)次0-3次，平均為（1.21±1.15）次；已婚62例，未婚有性生活史18例；有生育史55例，無生育史25例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過。納入標(biāo)準(zhǔn)：①因?qū)m頸接觸性出血、陰道流液或?qū)m頸炎就診，②高危HPV感染，③有性行為，④檢查前72h內(nèi)無陰道灌洗及用藥史，⑤患者均對研究內(nèi)容知曉，并簽下同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸治療史；②生殖道急性炎癥期與月經(jīng)期，③妊娠、哺乳期女性，④其他惡性腫瘤；⑤精神疾病、意識障礙。

1.2 方法

1.2.1 高危HPV感染診斷標(biāo)準(zhǔn) 將蘸有少許無菌生理鹽水的宮頸刷置于宮頸口，均勻同向旋轉(zhuǎn)幾圈后抽出，折斷宮頸刷柄，刷頭置于洗脫管內(nèi)，旋緊管蓋，做好標(biāo)簽，直立放于-20℃冰箱中保存待測。運用HPV核酸擴增分型檢測試劑盒（凱普生物化學(xué)科技公司）與HybrMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀檢測15種高危型HPV亞型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68），步驟為：分離提取樣本HPV-DNA，反向PCR擴增，導(dǎo)流雜交，顯色。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)程序化處理后，根據(jù)有無斑點判定結(jié)果：所有高危型HPV亞型中出現(xiàn)任意1種或多種陽性，視為高危HPV-DNA陽性，診斷為高危HPV感染[5]。

1.2.2 宮頸活檢P16和Ki-67蛋白 所用標(biāo)本以10%甲醛溶液固定，蘇木精-伊紅染色，經(jīng)顯微鏡觀察后選取。運用免疫組化方法進行檢測，經(jīng)固定、石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅染色后于光鏡下進行細胞形態(tài)觀察，判斷P16、Ki-67的陰陽性，試劑盒為福州邁新公司生產(chǎn)的免疫組化試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。運用免疫組織化學(xué)法染色，滴加辣根過氧化物酶顯色，蘇木素輕度復(fù)染，光鏡下觀察，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。P16判定標(biāo)準(zhǔn)：細胞核或細胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。Ki-67判定標(biāo)準(zhǔn)：細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。高倍鏡下于染色區(qū)域隨機選取5個視野，計數(shù)500個腫瘤細胞，分別計算P16、Ki-67細胞陽性率，陽性細胞數(shù)為細胞表達比例，＞5%視為陽性[6]。

1.2.3 組織病理學(xué)檢測 運用SLC-2000B型光學(xué)電子數(shù)碼陰道鏡觀察宮頸血管和上皮組織的變化，先行醋酸試驗，觀察醋白上皮與血管，運用綠色濾鏡觀察各種血管圖像，凍結(jié)最佳圖像，涂抹復(fù)方碘液進行碘試驗。于異常部位區(qū)活檢（包括宮頸上皮基底層的活組織部位），經(jīng)4%甲醛溶液固定后進行病理檢查，診斷結(jié)果分為正常/炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）1、CIN2-3、宮頸癌。

1.3 觀察指標(biāo) ①分析組織病理學(xué)診斷結(jié)果。②分析宮頸組織不同病變程度的P16和Ki-67蛋白表達陽性率。③以宮頸組織病理學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評價宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達在高危HPV感染患者中預(yù)測早期宮頸癌的應(yīng)用價值，計算準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。

1.4 數(shù)據(jù)處理 運用SPSS21.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以%表示，行χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織病理學(xué)結(jié)果 80例患者中，正常/炎癥有3例，CIN1有36例，CIN2-3有25例，宮頸癌有16例。

2.2 宮頸組織不同病變程度的P16和Ki-67蛋白表達陽性率 宮頸組織病理學(xué)結(jié)果中，正常/炎癥、CIN1、CIN2-3、宮頸癌的P16陽性率分別為0%、69.44%、92.00%、100.00%，正常/炎癥、CIN1、CIN2-3、宮頸癌的Ki-67陽性率分別為0%、75.00%、96.00%、100.00%。見表1。

表1 宮頸組織不同病變程度的P16和Ki-67蛋白表達陽性率[n(%)]

2.3 宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達預(yù)測早期宮頸癌的應(yīng)用價值 以宮頸組織病理學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)計算，P16表達預(yù)測早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為80.00%、73.58%、92.59%、95.12%、64.10%，Ki-67表達預(yù)測早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為83.75%、76.92%、96.43%、97.56%、69.23%，聯(lián)合檢驗預(yù)測早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為91.25%、85.42%、100.00%、100.00%、82.05%。見表2。

表2 宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達與宮頸組織病理學(xué)結(jié)果比較(n)

3 討論

宮頸癌為婦科常見的惡性腫瘤，患病率高，位居女性惡性腫瘤的第二位（僅次于乳腺癌）[7-8]。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，我國每年新診斷的宮頸癌患者人數(shù)約占全球該病患者人數(shù)的25%[9]。而且該病的發(fā)病年齡呈年輕化發(fā)展趨勢，年輕化已成為宮頸癌防治工作面臨的新的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。該病的病灶主要位于宮頸陰道處或上皮細胞交匯部位，其發(fā)生和發(fā)展是一個多步驟、多因素的繁雜過程，其癌前病變過程漫長，從癌前病變發(fā)展為宮頸癌的時間約為10年，主要可以分為如下幾個階段：低級別上皮內(nèi)瘤變—高級別上皮內(nèi)瘤變或原位癌—微小浸潤癌—浸潤癌[10]。早期發(fā)現(xiàn)癌前病變并予以有效治療則有可能治愈，而局部晚期患者的治療效果較不理想，存活率低（5年存活率不超過40%），復(fù)發(fā)者的存活率更低（不超過30%）[11-12]。宮頸癌是唯一能夠通過醫(yī)學(xué)干預(yù)，降低其發(fā)病率和死亡率的惡性腫瘤，盡早發(fā)現(xiàn)并積極治療癌前病變是關(guān)鍵。所以，對該病進行篩查與早期診斷非常關(guān)鍵。

目前已明確高危型HPV感染是誘發(fā)宮頸癌癌前病變的主要危險因素。隨著相關(guān)研究的不斷深入，新的篩查技術(shù)先后被研發(fā)出來，計算機輔助讀片技術(shù)的使用，讓細胞學(xué)篩查的準(zhǔn)確度得到了很大程度的提升；HPV、TCT的聯(lián)合應(yīng)用，能夠讓宮頸癌及其癌前病變的初篩率得到一定的提高。當(dāng)前普遍建議，女性應(yīng)從21歲開始就進行宮頸癌篩查，其中21-29歲的婚育女性應(yīng)每三年檢查1次。篩查項目中，HPV一般不作為常規(guī)檢查項目，但可用于對非典型鱗狀上皮細胞的分型診斷。30-65歲的女性人群，則建議行細胞學(xué)、HPV的聯(lián)合檢查，如果兩項檢查的結(jié)果都呈陰性，則可調(diào)整檢查時間為3-5年一次。宮頸癌的零發(fā)病率是不可能的，但過度篩查與治療也會對女性的身體造成不必要甚至是不可逆的損傷，應(yīng)引起重視，合理選擇篩查方法。

細胞繁衍與細胞死亡之間的動態(tài)平衡，對保持多細胞生物組織的自穩(wěn)定性有著至關(guān)重要的作用，一旦這一平衡遭到破壞，則可能引發(fā)相關(guān)疾病，如細胞繁衍能力異常提升、細胞凋亡抑制等，繼而增加癌癥的發(fā)生風(fēng)險。P16是細胞繁殖指數(shù)，也是調(diào)控細胞增生的主要基因[13]。P16定位于9p21，其編碼相對分子質(zhì)量為1.6萬。P16蛋白能夠通過和同細胞周期依賴性激酶4的競爭結(jié)合，繼而抑制cyclinD-CDK4復(fù)合物的形成，使其有激酶活性降低，使PRB蛋白磷酸化[13-14]。P16對細胞繁衍也有一定的調(diào)節(jié)作用，能夠抑制細胞的繁殖[15]。若P16出現(xiàn)基因突變或缺乏，則CDK4活性增強，細胞分裂加快，最終導(dǎo)致細胞惡性繁殖[16]。Ki-67是一種和細胞周期有關(guān)的蛋白質(zhì)，主要表達于繁衍期細胞的核抗原，基因處于人第10號染色體，Ki-67陽性表達時提示癌細胞呈活躍繁衍狀態(tài)，且惡性程度越高其表達越強[17]。Ki-67在評估細胞繁衍活性中可發(fā)揮顯著的指導(dǎo)意義，且敏感度較高，它與細胞有絲分裂相關(guān)，也與細胞繁衍有關(guān)聯(lián)[18]。P16、Ki-67對早期宮頸癌的診斷有良好的輔助意義，其表達陽性提示患早期宮頸癌的可能性較高[19-20]。

本研究結(jié)果顯示，正常/炎癥、CIN1、CIN2-3、宮頸癌的P16和Ki-67蛋白表達陽性率出現(xiàn)遞增的趨勢，提示P16和Ki-67蛋白表達隨宮頸組織病變嚴(yán)重程度而逐漸增加。應(yīng)用價值評價結(jié)果顯示，P16和Ki-67蛋白表達聯(lián)合檢驗預(yù)測早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為91.25%、85.42%、100.00%、100.00%、82.05%，明顯高于單項檢驗，提示P16和Ki-67蛋白表達在高危HPV感染患者早期宮頸癌的預(yù)測中可發(fā)揮一定的診斷價值，敏感度、特異度高。

綜上所述，宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達在高危HPV感染患者中預(yù)測早期宮頸癌的應(yīng)用價值高，值得推廣。