趙玉雪，朱佳敏，楊 霞，吳柳燕

(貴州省核桃研究所 貴州 貴陽(yáng)550005)

核桃長(zhǎng)足象(AlcidodesjuglansChao)屬鞘翅目(Coleoptera)象甲科(Curculionidae)，是核桃樹(shù)主要害蟲(chóng)種類(lèi)之一，在我國(guó)的核桃產(chǎn)地多有分布，發(fā)生十分嚴(yán)重，主要蛀果危害[1]。核桃長(zhǎng)足象一年發(fā)生一代，成蟲(chóng)在果實(shí)里產(chǎn)卵，嚴(yán)重情況下一果達(dá)到幾十個(gè)產(chǎn)卵孔，卵孵化后形成幼蟲(chóng)，其幼蟲(chóng)在果內(nèi)蛀害時(shí)間長(zhǎng)且隱蔽，防治困難，早期幼蟲(chóng)會(huì)蛀食種仁，導(dǎo)致落果，而后期幼蟲(chóng)會(huì)導(dǎo)致核桃青皮腐爛而污染果殼，損害其商品價(jià)值[2-5]。

球孢白僵菌是一種廣譜性昆蟲(chóng)病原真菌，具有致病力強(qiáng)、殺蟲(chóng)譜廣、容易培養(yǎng)及飛揚(yáng)擴(kuò)散等特點(diǎn)，因而被普遍應(yīng)用在農(nóng)林害蟲(chóng)的防治上[6]。在核桃上，楊世璋等人就球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象成蟲(chóng)的致病性與防治效果做了初步的研究[7]。本文以不同溫、濕度條件下球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的致病力的影響為研究?jī)?nèi)容，旨在掌握球孢白僵菌施用的最佳溫、濕條件，為后續(xù)生產(chǎn)上應(yīng)用球孢白僵菌防治長(zhǎng)足象的實(shí)踐提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx(chóng)

采集受幼蟲(chóng)危害后的落果帶回實(shí)驗(yàn)室，放入飼養(yǎng)盒中，以紗網(wǎng)封住頂部，待羽化后收集成蟲(chóng),以新鮮核桃果實(shí)和核桃枝條飼養(yǎng)備用。

供試菌株與菌液的制備：供試菌株購(gòu)買(mǎi)的農(nóng)保生物生產(chǎn)的100億/g的球孢白僵菌。將其在(26 ±1) ℃下用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)10 d，待完全產(chǎn)孢后，刮下分生孢子，用0.1%吐溫-80無(wú)菌水潤(rùn)濕，并用攪拌器攪拌均勻。經(jīng)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，配成分生孢子濃度為2．0 ×108個(gè)/mL的孢子懸浮液；并以0.1%吐溫-80無(wú)菌水作對(duì)照。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溫度對(duì)球孢白僵菌致病力的影響

挑選健壯、個(gè)頭一致的核桃長(zhǎng)足象成蟲(chóng)，用無(wú)菌水清洗后，浸泡在配制好的球孢白僵菌孢子懸浮液中10 s，后放置在塑料杯中，每3頭放一個(gè)杯中，杯底墊濾紙，杯中放入新鮮的核桃枝條，并以紗網(wǎng)封住頂部。以0.1%吐溫-80無(wú)菌水作對(duì)照，分別置于5個(gè)溫度梯度為18 ℃、21 ℃、24 ℃、27 ℃、30 ℃的人工氣候箱中，相對(duì)濕度為80%±10%，每個(gè)溫度梯度處理15頭，重復(fù)3次，后每天定時(shí)檢查成蟲(chóng)的被侵染情況，并及時(shí)更換新鮮核桃枝條，以蟲(chóng)體長(zhǎng)出白色菌絲，最后被菌絲包圍，產(chǎn)生分生孢子層為死亡蟲(chóng)體，記錄死亡數(shù)量。

1.2.2 濕度對(duì)球孢白僵菌致病力的影響

挑選健壯、個(gè)頭一致的核桃長(zhǎng)足象成蟲(chóng)，用無(wú)菌水清洗后，浸泡在配制好的孢子懸浮液中10s，后放置在塑料杯中，每3頭放一個(gè)杯中，杯底墊濾紙，杯中放入新鮮的核桃枝條，并以紗網(wǎng)封住頂部。以0.1%吐溫-80無(wú)菌水作對(duì)照，分別置于(95±5)%、(85±5)%、(75±5)%、(65±5)%、(55±5)%5個(gè)濕度梯度的的人工氣候箱中，溫度設(shè)置為27 ℃，每個(gè)濕度梯度處理15頭，重復(fù)3次，后每天定時(shí)檢查成蟲(chóng)的被侵染情況，并及時(shí)更換新鮮核桃枝條，以蟲(chóng)體長(zhǎng)出白色菌絲，最后被菌絲包圍，產(chǎn)生分生孢子層為死亡蟲(chóng)體，記錄死亡數(shù)量。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

累計(jì)死亡率 = 死亡數(shù) / 處理總數(shù) × 100%[8]。數(shù)據(jù)采用EXCEL和SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度與白僵菌致病力的關(guān)系

根據(jù)不同溫度條件下核桃長(zhǎng)足象受球孢白僵菌侵染后的死亡情況，獲得死亡曲線及相關(guān)回歸方程，結(jié)果如圖1、表1所示。結(jié)果顯示：在設(shè)置的溫度范圍內(nèi)，核桃長(zhǎng)足象的累計(jì)死亡率隨著溫度變化而有所不同。在18～27 ℃范圍內(nèi)，死亡率隨溫度的升高而增加，在27 ℃下達(dá)到最高84.44%，而致死中時(shí)間(LT50)則隨著溫度升高而降低，并在27 ℃下達(dá)到最低10.258 d。在較高溫度30 ℃條件下，核桃長(zhǎng)足象死亡率卻明顯低于24 ℃和27 ℃，LT50也較之要高。因此，可以得出結(jié)論，在設(shè)置的溫度范圍內(nèi)，27 ℃最有利于球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的侵染。

表1 不同溫度下感染球孢白僵菌后核桃長(zhǎng)足象的毒力回歸方程

圖1 不同溫度下感染球孢白僵菌后核桃長(zhǎng)足象的死亡曲線上

2.2 濕度與白僵菌致病力的關(guān)系

用濃度為2×108/mL的球孢白僵菌分生孢子懸浮液侵染核桃長(zhǎng)足象后，于27 ℃溫度條件下進(jìn)行培養(yǎng)，在設(shè)置的濕度范圍內(nèi)，獲得核桃長(zhǎng)足象的死亡率及相關(guān)回歸方程結(jié)果如圖2、表2所示。由此可知，不同濕度條件下，核桃長(zhǎng)足象的死亡率隨著濕度的增加而增長(zhǎng)。試驗(yàn)后期，在濕度為(95±5)%的環(huán)境下，核桃長(zhǎng)足象的死亡率達(dá)86.67%，與濕度為(85±5)%的環(huán)境下接近，顯著高于其他濕度環(huán)境，且其LT50分別為10.285 d與10.572 d，均顯著低于其他幾組數(shù)據(jù)。因此，可以判定較高的濕度環(huán)境更有利于球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的侵染。

圖2 不同濕度條件下感染球孢白僵菌后核桃長(zhǎng)足象的死亡曲線

表2 不同濕度條件下感染球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的毒力回歸方程

3 討論

球孢白僵菌在侵染寄主時(shí)，其致病力通常會(huì)受溫、濕度、寄主齡期、菌液濃度等因素影響[9-10]，本文就是對(duì)不同溫、濕度條件下球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的致病力進(jìn)行研究。不同昆蟲(chóng)在受白僵菌侵染所需溫度不一定相同，研究表明，球孢白僵菌孢子萌發(fā)的適宜溫度范圍一般為18～28 ℃[11]，且在本研究中27 ℃是利于球孢白僵菌侵染核桃長(zhǎng)足象的最佳溫度，這與菌絲適宜萌發(fā)生長(zhǎng)的溫度相吻合，而溫度過(guò)高或過(guò)低都影響其致死率，尤其是高溫條件下，可能會(huì)導(dǎo)致球孢白僵菌孢內(nèi)酶活代謝加快，影響其致病力。同時(shí)，濕度也是影響球孢白僵菌侵染寄主的一個(gè)因素，在高相對(duì)濕度下，寄主昆蟲(chóng)致死率較高，且多數(shù)研究認(rèn)為，在濕度為95%～100%的環(huán)境下，白僵菌孢子萌發(fā)率最高，萌發(fā)速度最快[12]。在本研究以球孢白僵菌侵染核桃長(zhǎng)足象時(shí)，同樣是在高濕度條件下致病力表現(xiàn)為最高，與孢子萌發(fā)的濕度一致；而在當(dāng)相對(duì)濕度<70%時(shí)，多數(shù)昆蟲(chóng)的死亡率會(huì)顯著減少[13]，與本研究中低濕度環(huán)境下球孢白僵菌致病力減弱一致。因此，根據(jù)當(dāng)?shù)氐臏囟取穸?，進(jìn)行球孢白僵菌的噴施，能夠取得較好效果[14]。

4 結(jié)論

在一定的范圍內(nèi)，球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的致病力會(huì)隨著溫濕度的變化而變化，在相同濕度下，溫度為27 ℃時(shí)，球孢白僵菌致死效果最好，核桃長(zhǎng)足象的死亡率最高，LT50最短，溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)降低其致死率；而在相同溫度下，濕度為(95±5)%的條件下，球孢白僵菌致死效果最好，核桃長(zhǎng)足象的死亡率最高，LT50最短，這也表明高濕條件更利于球孢白僵菌對(duì)核桃長(zhǎng)足象的侵染。因此，在應(yīng)用球孢白僵菌防治核桃長(zhǎng)足象時(shí)，掌握好其溫、濕度條件，能更有效的應(yīng)用好球孢白僵菌，才能獲得更好的防治效果。