李旭東，吳靜瀾，田孟斌，聶 琴

1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院(貴州 貴陽 550025)2.國家苗藥工程技術(shù)研究中心(貴州 貴陽 550025)3.貴州中藥炮制與制劑工程技術(shù)研究中心(貴州 貴陽 550025)

高粱泡葉是薔薇科植物高粱泡(RubuslambertianusSer)的干燥葉，藥味甘、苦，性平，具有清熱涼血、解毒消瘡等功效，可應(yīng)用于治療感冒發(fā)熱、咳、便血、崩漏、外傷出血、皮膚糜爛、黃水瘡等[1]。通過抑菌試驗研究表明其對金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等均有抑制作用[2]。查閱文獻，未見對高粱泡葉化學(xué)成分研究的相關(guān)報道，而高效液相色譜-四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-Q-TOF-MS/MS)作為現(xiàn)代常用分析技術(shù)，具有操作簡便、分析快速、靈敏度高等優(yōu)點。本研究擬采用HPLC-Q-TOF-MS/MS對高粱泡葉的化學(xué)成分開展研究，為探明其藥效物質(zhì)提供實驗依據(jù)，并為高粱泡葉后續(xù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)構(gòu)建、藥效學(xué)研究及新藥開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥高粱泡葉樣品采自貴州省貴陽市花溪區(qū)元芳村，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為薔薇科植物高粱泡；甲醇(分析純)國藥集團化學(xué)試劑有限公司；乙醇(分析純)國藥集團化學(xué)試劑有限公司；甲酸(分析純)天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水為超純水。

Dionex Ultimate 3000 RSLC(HPG)液相系統(tǒng)(Thermo Fisher Scientific)；Thermo Scientific Q Exactive Focus質(zhì)譜系統(tǒng)(Thermo Fisher Scientific)；HESI-II離子源(Thermo Fisher Scientific)；752型紫外可見分光光度計(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；AUW12D型電子分析天平(日本Shimadzu公司)；超聲波清洗器(型號：SK8200H，上?？铺柍晝x器有限公司)。

1.2方法

1.2.1 供試品溶液制備 精密稱取高粱泡葉粉末(過60目篩)1.0 g置于100 mL錐形瓶中，加入80%乙醇30 mL，稱重，80 ℃回流提取1 h，補重，過0.22 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

1.2.2 液相色譜分析條件

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱：ACE Ultracore2.5 SuperC18(100 mm×2.1 mm,0.5 μm)；流動相為乙腈(0.1%甲酸)-超純水(0.1%甲酸水)；柱溫40 ℃；流速：0.3 mL/min；進樣量5 μL；梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2.2.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源(ESI)；正/負離子模式；噴霧電壓3.0 kV(負離子為-2.5 kV)；毛細管溫度320 ℃；鞘氣：35 arb；輔助氣：10 arb；質(zhì)譜儀使用前分別對正、負離子分辨率進行校正，使其能在全質(zhì)荷比范圍內(nèi)滿足<2×10-6質(zhì)譜精度的基本要求。分別設(shè)置Fullscan和DD-MS22掃描模式；掃描離子范圍100～1 500 m/z；分辨率Fullscan模式為：70 000；DD-MS2模式為：17 500。

1.2.3 化學(xué)成分鑒定 根據(jù)其相對分子質(zhì)量和一級、二級質(zhì)譜碎片離子結(jié)合mzVaul本地譜庫、mzCloud云譜庫及相關(guān)文獻、色譜峰對應(yīng)的化合物定性分析，鑒定高粱泡葉的相關(guān)化學(xué)成分。

2 結(jié)果與分析

2.1化學(xué)成分鑒定正、負離子模式下，得到的高粱泡葉醇提物的正、負離子見圖1，根據(jù)其相對分子質(zhì)量和一級、二級質(zhì)譜碎片離子結(jié)合mzVaul本地譜庫、mzCloud云譜庫及相關(guān)文獻、色譜峰對應(yīng)的化合物定性分析得到化合物61種，主要包括酚酸類、鞣質(zhì)類、黃酮類、皂苷類、糖類等成分(見表2)。

圖1 高粱泡葉樣品正、負離子模式下的TIC

表2 高粱泡葉化學(xué)成分鑒定信息

2.2化合物裂解規(guī)律分析化合物12得到179.033 75[M-H]-質(zhì)譜信號，碎片離子為135.043 85[M-H-CO2]-、107.049 4[M-H-C2O3]-，結(jié)合相關(guān)文獻報道，推測其為咖啡酸[15]。

正離子模式下，保留時間12.49 min，得到287.0542 3[M+H]+，碎片離子為287.0542 3[M+H]+、153.017 88[M+H-C8H6O2]+，和相關(guān)文獻報道的一致[10]，推測其為山柰酚。

化合物17在負離子模式下的一級質(zhì)譜信息得到準(zhǔn)分子離子峰m/z 300.998 50[M-H]-，二級質(zhì)譜碎片離子從高到低有m/z 283.995 64,257.008 456,229.013 335,201.018 48,185.023 30,173.023 38,145.028 09等，對應(yīng)的離子峰為[M-H-OH]-,[M-H-CO2]-,[M-H-CO2-CO]-,[M-H-CO2-2CO]-,[M-H-2CO2-CO]-,[M-H-CO2-3CO]-,[M-H-CO2-4CO]-，結(jié)合相關(guān)文獻，鑒定該成分為鞣花酸[11]。

在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為，m/z 268.103 42[M+H]+在二級質(zhì)譜中，[M+H]+失去1分子呋喃核糖殘基形成特征碎片m/z 136.061 61[M+H-C5H8O4]+，根據(jù)質(zhì)譜信息、數(shù)據(jù)庫及文獻報道，該碎片與腺苷的理論裂解碎片相似度高，推測該化合物為腺苷[13]。

3 討論

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有高分辨率、高通量及高靈敏度等特點，常被應(yīng)用于中藥成分分析[14]。近年來已成為中藥等復(fù)雜成分分析的重要手段。通過比較高粱泡葉化學(xué)成分在正、負離子模式下的基峰離子流圖，發(fā)現(xiàn)正、負離子模式下均有較好的響應(yīng)，為最大程度地獲取藥材成分豐富的質(zhì)譜信息。

本研究利用UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS對高粱泡葉醇提物進行全局定性分析，采用Full MS/dd-MS2檢測模式結(jié)合數(shù)據(jù)庫分析篩查、文獻對比等方法，鑒定出高粱泡葉醇提物中61種化合物，由于之前沒有對高粱泡葉的化學(xué)成分進行過研究，因此本研究所獲得的61個化學(xué)成分均為首次在高粱泡葉中發(fā)現(xiàn)，為后續(xù)高粱泡葉醇提物成分及藥效研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。在所得到的高粱泡葉化學(xué)成分中，鞣花酸具有較好的抗癌作用，如肺癌、肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌及乳腺癌等，還具有抗氧化和抗炎作用[15]。異槲皮素具有抗疲勞、抗炎、抗癌等藥理作用[16]，槲皮素具有神經(jīng)保護，抗阿爾茲海默癥、抗肺癌、抗氧化、抗炎等作用[17-20]，這些成分的確定可為深入研究高粱泡藥材的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

綜上所述，本研究通過UPLC-Q-Exactive Focus-MS/MS對高粱泡葉化學(xué)成分進行分析，根據(jù)其相對分子質(zhì)量和一級、二級質(zhì)譜碎片離子結(jié)合mzVaul本地譜庫、mzCloud云譜庫及相關(guān)文獻定性分析得到化合物61種，主要包括酚酸類、鞣質(zhì)類、黃酮類、皂苷類、糖類等成分。