陳海燕，隨家寧，李芳嬋，郭勇秀，謝孟姣，賴(lài)信宏，黃小洪，梁資就，蔣 林，2，3*

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200；2.廣西壯瑤藥工程技術(shù)研究中心，廣西 南寧 530200；3.廣西高校中藥制劑共性技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530200)

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方由益智仁、補(bǔ)骨脂、烏藥、金櫻子、覆盆子、黃精、枸杞子、桑椹、芡實(shí)、肉蓯蓉和炙甘草十一味藥組成，諸藥合用共奏暖腎祛寒、溫脾養(yǎng)肝、縮尿止遺之功，主治腎陽(yáng)虛、脾腎兩虛，下元虛冷之腰膝酸軟，尿頻遺尿等癥，該藥在廣西扶綏壯族地區(qū)臨床應(yīng)用多年，對(duì)老年人夜尿癥有很好的療效。老年人夜尿癥是老年人臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病，70歲以上老年人的患病率大于60%，嚴(yán)重影響老年人的健康和生活質(zhì)量，可引發(fā)抑郁、認(rèn)知功能障礙、情緒障礙等癥狀[4]。目前國(guó)內(nèi)外尚缺少理想而有效的治療方法，無(wú)法滿(mǎn)足夜尿癥患者的需求，開(kāi)發(fā)治療夜尿癥藥物具有較大的應(yīng)用前景。本研究通過(guò)對(duì)復(fù)方中各藥味化學(xué)成分和藥理作用進(jìn)行梳理總結(jié)，基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物“五原則”——即有效、特有、傳遞與溯源、可測(cè)性和處方配伍對(duì)該方全面論述，預(yù)測(cè)其質(zhì)量標(biāo)志物成分，為開(kāi)發(fā)臨床有效、工藝合理、質(zhì)量可控、滿(mǎn)足社會(huì)需要的醫(yī)院制劑——壯藥調(diào)理補(bǔ)虛膏提供理論依據(jù)。

1 主要化學(xué)成分

現(xiàn)代研究表明，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中主要含有黃酮類(lèi)、多酚類(lèi)、多糖類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、倍半萜等成分。

1.1 黃酮類(lèi)

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中補(bǔ)骨脂、益智仁、金櫻子、覆盆子、枸杞子、桑椹和芡實(shí)中均含有黃酮類(lèi)成分，如楊芽黃素、白楊素、良姜素、橙皮苷、金絲桃苷、蘆丁、木犀草素、山柰素、槲皮素、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、椴樹(shù)苷、紫云英苷、二氫槲皮素、芹菜素、異補(bǔ)骨脂二氫黃酮、新補(bǔ)骨脂異黃酮、4′-O-甲基補(bǔ)骨脂查耳酮、補(bǔ)骨脂色烯查耳酮等[5，20]。

該方中還含有較多的類(lèi)黃酮-花色苷類(lèi)成分，如桑椹中含有矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷、矢車(chē)菊素-3-蕓香糖苷、矢車(chē)菊色素、芍藥色素等[21-24]。

1.2 多酚類(lèi)

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中含有較多的多酚類(lèi)成分，如烏藥中含有表兒茶素、原花青素等黃烷醇類(lèi)多酚[25]；金櫻子中含有原兒茶酸、沒(méi)食子酸、兒茶素[8，26]；覆盆子中含有鞣花酸[10]；枸杞子中含有咖啡酸、阿魏酸、反式肉桂酸等[27-28]；補(bǔ)骨脂中含有補(bǔ)骨脂酚等單帖酚類(lèi)成分[18]。

1.3 倍半萜類(lèi)

壯藥補(bǔ)虛方中倍半萜類(lèi)成分多來(lái)源于君藥益智仁，如圓柚酮、7-表-香科酮、香科酮、12-羥基圓柚酮等[29-31]。

1.4 揮發(fā)油類(lèi)

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中含有較多的揮發(fā)油成分，如益智仁中主要含有油酸、亞油酸、棕櫚酸 (十六烷酸)、香草酸等[30-34]；烏藥中含有香樟內(nèi)酯、(-)-馬兜鈴烯、β-桉葉油醇等[22，35-36]；芡實(shí)中含有棕櫚酸、硬脂酸、十五酸、月桂酸、肉豆蔻酸等揮發(fā)油成分。

1.5 多糖類(lèi)

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方的多糖類(lèi)成分較多，如金櫻子多糖[37]、桑椹多糖[38]、黃精多糖[39]、肉蓯蓉多糖[40]。

2 藥理作用

中醫(yī)將夜尿癥歸屬于“腎虛”“遺溺”等范疇，認(rèn)為其發(fā)病與脾肺肝腎密切相關(guān)，多屬中醫(yī)肝腎不足、命門(mén)火衰、膀胱氣化無(wú)力等病機(jī)，而中醫(yī)辨證求其根本，應(yīng)調(diào)以肝腎、責(zé)以膀胱氣化[41]。津液代謝的重要環(huán)節(jié)是尿液的生成，與肝、脾、肺密切相關(guān)，尿液的排泄與膀胱和腎有關(guān)，腎陰封藏與腎陽(yáng)推動(dòng)作用的平衡發(fā)揮著重要作用[42]。由此可見(jiàn)，夜尿癥的發(fā)生，與腎、肝、脾、肺、膀胱有密切的聯(lián)系。腎精虧虛，腦髓化生乏源，髓海失充失養(yǎng)，則腦功能發(fā)揮失常，出現(xiàn)眩暈耳鳴、癡呆、記憶力減退等記憶障礙[41]。且骨骼的生長(zhǎng)有賴(lài)于骨髓的滋養(yǎng)，而骨髓為腎精所化，故腎精虧虛，會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生[43]。因此，夜尿癥的發(fā)生會(huì)間接引起阿爾茲海默和骨質(zhì)疏松等病癥的發(fā)生。以下將重點(diǎn)論述壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方在調(diào)節(jié)膀胱、肝、腎功能，以及改善記憶力和抗骨質(zhì)疏松方面發(fā)揮的作用。

2.1 調(diào)節(jié)臟腑功能

2.1.1 調(diào)節(jié)膀胱功能 《素問(wèn)》有言：“水泉不止者，是膀胱不藏也?！?若下焦?jié)駸?，膀胱氣化失司，亦如熱積膀胱，小便“不禁而頻來(lái)”，夜間亦如此。因此，膀胱功能失調(diào)，會(huì)引起夜尿癥的發(fā)生。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中作用于膀胱發(fā)揮縮尿作用的主要為益智仁和烏藥。HAN YUN等[44]研究發(fā)現(xiàn)，益智仁多糖可通過(guò)增加膀胱逼尿肌蛋白激酶A蛋白的表達(dá)，降低老年尿失禁大鼠的排尿量，對(duì)尿失禁具有較好的治療效果。龔曉猛等[45]研究發(fā)現(xiàn)，益智仁中7-表-香科酮可通過(guò)抑制膀胱逼尿肌收縮張力，發(fā)揮縮尿作用。談博等[46]研究發(fā)現(xiàn)，烏藥提取物可改善膀胱過(guò)度活動(dòng)癥大鼠膀胱上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。綜上所述，益智仁多糖、7-表-香科酮以及烏藥提取物可作為發(fā)揮縮尿作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.1.2 調(diào)節(jié)肝功能 《格致余論》曰：“主閉藏者腎也，司疏泄者肝也?！比舾侮?yáng)亢盛或肝陰虛，陰不制陽(yáng)，虛火內(nèi)炎；或肝氣郁而化熱，而致肝疏泄太過(guò)，涉及水津，即肝之疏泄勝于腎之封藏，則腎主水無(wú)權(quán)而水液失調(diào)，即可出現(xiàn)夜尿頻數(shù)。因此，調(diào)節(jié)肝功能，可改善夜尿增多的情況。陳益耀等[47]研究發(fā)現(xiàn)，益智仁中原兒茶酸和白楊素可通過(guò)抗氧化應(yīng)激減少肝細(xì)胞內(nèi)脂肪滴，對(duì)非酒精性脂肪肝細(xì)胞起到保護(hù)作用。陳方亮等[48]研究發(fā)現(xiàn)，烏藥醚內(nèi)酯高劑量可降低CCl4誘導(dǎo)的肝損傷大鼠體內(nèi)MDA與ALT、AST的濃度，提高SOD和GSH-Px的活力，從而起到護(hù)肝作用。有研究表明，補(bǔ)骨脂酚可通過(guò)不同的作用機(jī)制對(duì)肝臟起到保護(hù)作用[49-51]。

大量研究表明，多糖類(lèi)、多酚類(lèi)及黃酮類(lèi)成分均具有保護(hù)肝臟的作用，如黃精多糖可通過(guò)抑制血清中酶的活性，提高抗氧化和抗凋亡作用，對(duì)肝臟起到保護(hù)作用[52-53]；桑椹花色苷提取物可對(duì)酒精性肝病模型發(fā)揮改善作用[54]；桑椹花青素提取物能通過(guò)調(diào)節(jié)紅細(xì)胞相關(guān)因子緩解肝細(xì)胞損傷[55]；桑椹多糖可改善抗氧化防御系統(tǒng)，發(fā)揮出對(duì)肝臟的保護(hù)作用[56]；芡實(shí)多酚類(lèi)成分可通過(guò)調(diào)控IRs-1和CYP2E1來(lái)消除脂質(zhì)積累和氧化應(yīng)激，從而改善非酒精性脂肪肝[57]；山柰酚-3-O-蕓香糖苷具有保護(hù)肝臟、抗肝毒性作用[58]。綜上所述，烏藥醚內(nèi)酯、補(bǔ)骨脂酚、黃精多糖、桑椹多糖、枸杞多糖、桑椹花色苷、桑椹花青素、白楊素、原兒茶酸、芡實(shí)多酚類(lèi)、毛蕊花糖苷、松果菊苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷是具有保肝作用的活性成分。

2.1.3 調(diào)節(jié)腎功能 隋代巢元方《諸病源候論》有言：“腎氣下通于陰，腑既虛寒，不能溫其臟，故小便白而多。其至夜尿偏甚者，則內(nèi)陰氣生也?！?指出體內(nèi)陰寒較勝者，腎與膀胱陽(yáng)氣虛衰更甚，在“小便白而多”基礎(chǔ)上則可見(jiàn)夜尿頻數(shù)、小便清長(zhǎng)，故腎功能失調(diào)可引起夜尿癥的發(fā)生。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中多糖類(lèi)和黃酮類(lèi)成分為改善腎功能的主要有效成分。蘇上貴等[59]研究發(fā)現(xiàn)，金櫻子多糖可增加TRPV5的表達(dá)，改善腎小管重吸收功能，恢復(fù)腎功能。籍艷秋等[60]研究發(fā)現(xiàn)，覆盆子中正丁醇可改善氫化可的松所致的小鼠腎陽(yáng)虛癥狀，研究還發(fā)現(xiàn)可從覆盆子有效部位中分離出覆盆子素、山柰酚、槲皮素等有效物質(zhì)成分。肖小妹等[61]研究發(fā)現(xiàn)，黃精多糖可增加紅細(xì)胞免疫功能，改善兒童腎病綜合征的蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥和水腫的癥狀。王忠彥等[62]研究發(fā)現(xiàn)，甘草酸可提高ConA所致急性腎損傷大鼠腎組織中白細(xì)胞介素-25 (IL-25)，從而下調(diào)巨噬細(xì)胞TLR4的表達(dá)，改善腎臟功能。綜上所述，黃精多糖、金櫻子多糖、覆盆子素、山柰酚、槲皮素、甘草酸等，可能是改善腎功能的活性成分。

2.2 對(duì)夜尿癥引起的并發(fā)癥的影響

2.2.1 保護(hù)神經(jīng) 《內(nèi)經(jīng)精義》指出：“事物之所以不忘賴(lài)此記性，記在何處，則在腎精。蓋腎生精化為髓而藏之于腦中?！庇纱丝梢?jiàn)，腎虛會(huì)導(dǎo)致健忘、記憶力衰退的癥狀[63]。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中揮發(fā)油類(lèi)、黃酮類(lèi)、苷類(lèi)和多糖類(lèi)為保護(hù)神經(jīng)的主要有效成分。益智仁中的揮發(fā)油、圓柚酮、原兒茶酸均可改善學(xué)習(xí)和記憶障礙[64-68]；補(bǔ)骨脂中的補(bǔ)骨脂素可改善阿爾茨海默病癥狀[69，70]；覆盆子中的覆盆子黃酮具有抗阿爾茲海默證的作用[71]；覆盆子中槲皮素和山柰酚對(duì)損傷的細(xì)胞具有保護(hù)作用，初步說(shuō)明黃酮類(lèi)成分可改善學(xué)習(xí)記憶功能[72]；桑椹中的矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷可提高大鼠的記憶力[73]；肉蓯蓉中肉蓯蓉多糖以及毛蕊花糖苷可保護(hù)D-半乳糖致衰小鼠的腦神經(jīng)細(xì)胞[74-75]。綜上所述，圓柚酮、原兒茶酸、白楊素、補(bǔ)骨脂素、槲皮素、山柰酚、矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷、毛蕊花糖苷等，具有保護(hù)神經(jīng)功能的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.2.2 抗骨質(zhì)疏松 《醫(yī)經(jīng)精義》載：“腎藏精，精生髓，髓生骨，故骨者腎之所合也。髓者腎精所生，精足則髓充，髓充者則骨強(qiáng)。”由此可見(jiàn)，腎虛導(dǎo)致的夜尿癥亦可引發(fā)骨質(zhì)疏松癥[43]。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可知，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)、苷類(lèi)成分為抗骨質(zhì)疏松癥的主要有效成分。王軍等[76]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)骨脂中異補(bǔ)骨脂素具有抗骨質(zhì)疏松的作用。龔劍秋等[77]研究發(fā)現(xiàn)，覆盆子覆盆子素A、覆盆子素B可抑制破骨細(xì)胞活性以及骨吸收，山柰酚、槲皮素可刺激成骨細(xì)胞的活性。王延濤等[78]通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選，發(fā)現(xiàn)肉蓯蓉中毛蕊花糖苷等13個(gè)主要成分可通過(guò)成骨分化特異性轉(zhuǎn)錄分子2 (RUNX2)等靶點(diǎn)，WNT (Wingless/Integrated)、VEGF、TNF等信號(hào)通路治療骨質(zhì)疏松。王琳琳等[79]研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷可通過(guò)刺激產(chǎn)生雌激素，從而對(duì)骨質(zhì)疏松發(fā)揮治療和預(yù)防作用。綜上所述，異補(bǔ)骨脂素、覆盆子素A、覆盆子素B、山柰酚、槲皮素、肉蓯蓉多糖、松果菊苷、毛蕊花糖苷等，具有發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.3 其他

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方還具有抗腫瘤、抗疲勞、改善更年期的作用，其中倍半萜類(lèi)、多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)和苷類(lèi)為主要有效成分。劉自堯等[80]研究發(fā)現(xiàn)，烏藥中異烏藥內(nèi)酯可通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡，且這種誘導(dǎo)作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。黃俞龍等[81]從金櫻子中分離純化出多糖以及蘆丁和槲皮素兩種黃酮類(lèi)化合物，這些化合物均可抑制人類(lèi)肝癌細(xì)胞BEL-7402的增殖，初步證明金櫻子多糖和黃酮類(lèi)化合物具有抗腫瘤作用。KWOK CHUI CHENG等[82]采用桑椹水提物作用于二乙基亞硝胺(DEN)誘導(dǎo)肝腫瘤大鼠模型，發(fā)現(xiàn)腫瘤變小。閆磊等[83]研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠可產(chǎn)生抗疲勞的作用。張娜娜[84]研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉多糖可改善內(nèi)分泌，發(fā)揮改善更年期癥狀的作用。張濤等[85]研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉多糖和松果菊苷可干擾K562白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期，從而抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，最終發(fā)揮抗白血病的作用。

3 質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)分析

3.1 基于質(zhì)量傳遞與溯源的質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)分析

以壯藥補(bǔ)虛調(diào)理方中的十一味藥材作為關(guān)鍵詞，通過(guò)TCMSP(https：//tcmspw.com/tcmsp.php)數(shù)據(jù)庫(kù)，根據(jù)藥物動(dòng)力學(xué)篩選條件“OB≥30%，DL≥0.18” 進(jìn)行檢索，共篩選出247個(gè)活性成分；其中益智中有34個(gè)成分、黃精中有14個(gè)成分、覆盆子中有12個(gè)成分、桑椹中有6個(gè)成分、肉蓯蓉中有6個(gè)成分、枸杞子中有58個(gè)成分、金櫻子中有14個(gè)成分、芡實(shí)中有2個(gè)成分、烏藥中有9個(gè)成分、甘草中有92個(gè)成分，由于在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中未載入補(bǔ)骨脂的相關(guān)成分，但是通過(guò)ETCM(http：//www.tcmip.cn/ETCM/)數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂含亞油酸、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、胡蘿卜苷等42個(gè)成分。

由于中藥里面真正發(fā)揮藥效的活性成分與其他固有成分存在不同，因此只有從血中發(fā)現(xiàn)直接作用的活性物質(zhì)才能真正揭示中藥臨床療效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[86]。本研究通過(guò)調(diào)研“中國(guó)知網(wǎng)”“維普”“萬(wàn)方”等數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)尚未有將壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方作為一個(gè)整體復(fù)方的入血成分的研究報(bào)道，同時(shí)此部分研究?jī)?nèi)容也是本課題組正在進(jìn)行研究的內(nèi)容。因此，可選取對(duì)壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中各單味藥體內(nèi)入血成分或者在其他復(fù)方中可能的入血成分，作為質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)分析基礎(chǔ)。秦子飛[87]研究發(fā)現(xiàn)，中藥復(fù)方“仙靈骨金葆”大鼠給藥后入血成分補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷等可歸屬于補(bǔ)骨脂；李夢(mèng)琪[88]通過(guò)研究縮泉丸大鼠入血成分，發(fā)現(xiàn)益智仁中含有圓柚酮、7-表-香科酮、楊黃芽素、白楊素、益智醇、益智酮甲及其代謝成分11，1-二羥基圓柚酮等有效成分；許飛等[89]通過(guò)灌胃大鼠實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)樓桂枝湯中甘草可能發(fā)揮入血作用的成分含有黃酮類(lèi)化合物，包括甘草苷、芒柄花苷、甘草素及三萜類(lèi)成分，如甘草酸、甘草次酸等；顏昱[90]對(duì)中藥肉蓯蓉進(jìn)行了體內(nèi)成分分析，結(jié)果表明肉蓯蓉中毛蕊花糖苷、松果菊苷、異毛蕊花糖苷、肉蓯蓉苷F、咖啡酸等17個(gè)成分以原型成分出現(xiàn)于血漿中；林秀蓮[91]通過(guò)研究補(bǔ)腎強(qiáng)身片血中移行成分，發(fā)現(xiàn)金櫻子中原兒茶酸以原型成分形式存在；王玲[92]對(duì)右歸丸入血成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)甜菜堿、原兒茶酸和原兒茶醛為方中枸杞子的入血成分。

3.2 基于成分特有性的質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)分析

益智仁為姜科植物益智AlpiniaoxyphyllaMiq.的干燥成熟果實(shí)，藥典規(guī)定益智仁揮發(fā)油為含量測(cè)定指標(biāo)性成分。益智仁中主要含有倍半萜類(lèi)、單萜類(lèi)、二萜類(lèi)、二苯庚烷類(lèi)、黃酮類(lèi)、簡(jiǎn)單芳香族化合物及脂肪族化合物，其中圓柚酮、7-表-香科酮等倍半萜類(lèi)為其特征性成分[93]。

烏藥為樟科植物烏藥Linderaaggregata(Sims) kosterm.的干燥塊根，藥典規(guī)定烏藥醚內(nèi)酯和去甲異波爾定為指標(biāo)性成分。烏藥主要成分為呋喃倍半萜及內(nèi)酯、揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、異喹啉生物堿類(lèi)等，其中包含一些主要且特殊的成分，如烏藥醚內(nèi)酯、去甲異波爾定等[94]。

補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂PsoraleacorylifoliaL.的干燥成熟果實(shí)，藥典規(guī)定補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為指標(biāo)性成分。補(bǔ)骨脂屬共有130種植物，我國(guó)僅補(bǔ)骨脂一種有分布。補(bǔ)骨脂主要成分為香豆素及苯并呋喃類(lèi)、黃酮類(lèi)、單萜酚類(lèi)等，具有多種生物活性[95]。

金櫻子為薔薇科植物金櫻子RosaLaevigataMichx.的干燥成熟果實(shí)，藥典規(guī)定金櫻子多糖為指標(biāo)性成分。金櫻子中主要成分為多糖類(lèi)、黃酮類(lèi)和三萜類(lèi)等[96]。

覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子RubuschingiiHu的干燥果實(shí)，藥典規(guī)定鞣花酸和山柰酚-3-O-蕓香糖苷為其指標(biāo)性成分。覆盆子中有效成分主要包括黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、甾醇、揮發(fā)油、氨基酸等，其中覆盆子素、葡萄糖苷、山柰酚和槲皮素等均具有多種生物活性[97]。

黃精為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.、黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua 的干燥根莖，藥典規(guī)定黃精多糖為其指標(biāo)性成分。黃精主要成分包括多糖類(lèi)、皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油、氨基酸等，其中黃精多糖和三萜皂苷類(lèi)毛地黃皂苷、薯蕷皂苷以及菝葜皂苷為其主要有效成分[98]。

枸杞子為茄科植物寧夏枸杞LyciumbarbarumL.的干燥成熟果實(shí)，藥典規(guī)定枸杞多糖和甜菜堿為其指標(biāo)性成分。枸杞子中主要有效成分包括黃酮類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、生物堿類(lèi)和氨基酸類(lèi)等，其中綠原酸、蘆丁、槲皮素以及山柰酚等成分在枸杞子中含量最高[99]。

桑椹為?？浦参锷orusalbaL.的干燥果穗，桑椹主要成分包括黃酮類(lèi)、多糖類(lèi)、花色苷類(lèi)等，其中矢車(chē)菊-3-O-蕓香糖苷、天竺葵-3-O-蕓香糖苷、矢車(chē)菊-3-O-葡萄糖苷和天竺葵-3-O-葡萄糖苷等花色苷類(lèi)具有廣泛的藥理活性[100-101]。

芡實(shí)為睡蓮科植物芡EuryaleferoxSalisb.的干燥成熟種仁，芡實(shí)主要成分為木脂素類(lèi)、腦苷脂類(lèi)、生育酚類(lèi)、環(huán)二肽、多酚類(lèi)和黃酮類(lèi)，其中山柰酚、沒(méi)食子酸、槲皮素、蘆丁等具有多種藥理活性[102]。

肉蓯蓉為列當(dāng)科多年生草本寄生植物荒漠肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma和管花肉蓯蓉C.tubulosa(Schenk) Wight干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，藥典規(guī)定松果菊苷和毛蕊花糖苷為其指標(biāo)性成分。肉蓯蓉主要有效成分包括苯乙醇苷類(lèi)、環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、木脂素類(lèi)成分等[103]，其中苯乙醇苷類(lèi)是列當(dāng)科的代表性成分，也是發(fā)揮藥效的基礎(chǔ)物質(zhì)，僅存在于列當(dāng)屬、肉蓯蓉屬和草蓯蓉屬中，且肉蓯蓉屬中含量最高，因此苯乙醇苷類(lèi)成分專(zhuān)屬性較強(qiáng)[104]。

炙甘草為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch、脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根和根莖，藥典規(guī)定甘草苷和甘草酸為其指標(biāo)性成分。甘草中主要有效成分包括黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、生物堿類(lèi)和糖類(lèi)等[105]。

通過(guò)以上總結(jié)可知，總多糖類(lèi)、總黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、香豆素類(lèi)、花色苷類(lèi)、苯乙醇苷類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)為壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方的主要成分，可作為基于成分特有性的質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)首選。

3.3 基于成分與藥效的相關(guān)質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)分析

據(jù)前文可知，益智仁多糖、7-表-香科酮具有縮尿作用；黃精多糖、金櫻子多糖、覆盆子素、山柰酚、槲皮素、甘草酸可對(duì)腎臟起保護(hù)作用；補(bǔ)骨脂酚、烏藥醚內(nèi)酯、黃精多糖、桑椹多糖、矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷、花青素、原兒茶酸、白楊素、毛蕊花糖苷和松果菊苷可改善肝功能；圓柚酮、原兒茶酸、白楊素、補(bǔ)骨脂素、槲皮素、山柰酚、毛蕊花糖苷、肉蓯蓉多糖、肉蓯蓉苷具有保護(hù)神經(jīng)的功效，可提高記憶力，改善學(xué)習(xí)記憶障礙。異補(bǔ)骨脂素、覆盆子素A、覆盆子素B、山柰酚、槲皮素、松果菊苷、毛蕊花糖苷、益母草堿、京尼平酸等可延緩骨質(zhì)疏松；松果菊苷可抗白血病；肉蓯蓉多糖可抗疲勞、改善更年期癥狀、抗白血病；山柰酚-3-O-蕓香糖苷具有保護(hù)肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)的作用。

因此，益智仁中益智仁多糖、7-表-香科酮、圓油酮、原兒茶酸、白楊素；補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂酚、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素；烏藥中烏藥醚內(nèi)酯、異烏藥內(nèi)酯；金櫻子中金櫻子多糖；覆盆子中覆盆子素、山柰酚-3-O-蕓香糖苷；肉蓯蓉中肉蓯蓉多糖、毛蕊花糖苷、松果菊苷、肉蓯蓉苷、益母草堿、京尼平酸；黃精中黃精多糖；芡實(shí)中山柰酚、槲皮素、蘆?。桓什葜懈什菟?；桑椹中桑椹多糖、矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷、花青素；甘草中甘草酸等，可作為與藥效相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)分析的首選成分。

3.4 基于配伍原則的質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)分析

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中君藥鹽益智仁能暖腎溫脾、固精縮尿；鹽益智仁中益智仁多糖、7-表-香科酮具有調(diào)節(jié)膀胱功能的作用；原兒茶酸和白楊素具保肝作用；圓柚酮、原兒茶酸具保護(hù)神經(jīng)的作用。君藥補(bǔ)骨脂溫腎助陽(yáng)、納氣平喘、溫脾止瀉，補(bǔ)骨脂酚具保肝作用，補(bǔ)骨脂素可保護(hù)神經(jīng)，異補(bǔ)骨脂素有抗骨質(zhì)疏松作用。烏藥行氣止痛、溫腎散寒，能除膀胱和腎間冷氣，止小便頻數(shù)；金櫻子固精縮尿；覆盆子益腎固精縮尿，三藥能收澀固腎、溫下焦虛寒以輔助君藥加強(qiáng)治療腎虛之下元虛冷，共為臣藥。烏藥醚內(nèi)酯具保肝作用，金櫻子多糖、覆盆子素A、覆盆子素B、山柰酚、槲皮素可改善腎功能，抗骨質(zhì)疏松。黃精補(bǔ)脾氣、益脾陰、益腎精；枸杞子滋補(bǔ)肝腎，益精血；桑椹滋陰補(bǔ)血，生津潤(rùn)燥，三藥均具滋腎陰之效，在補(bǔ)陽(yáng)之中配伍補(bǔ)陰藥，意在“陰中求陽(yáng)”，可協(xié)助君藥補(bǔ)腎暖脾并滋補(bǔ)肝腎而強(qiáng)筋骨、溫腰府，緩解腰膝酸軟等證；芡實(shí)益腎固精，且可健脾；肉蓯蓉具有補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便的功效；以上五藥共為佐藥。黃精多糖、桑椹多糖、桑椹花色苷和花青素、芡實(shí)多酚類(lèi)及肉蓯蓉中毛蕊花糖苷、松果菊苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷具保肝作用；桑椹中矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷改善記憶力；松果菊苷、毛蕊花糖苷、益母草堿、京尼平酸可抗骨質(zhì)疏松；黃精多糖和皂苷可改善腎功能；甘草酸可改善腎功能，甘草益氣補(bǔ)中、調(diào)和藥性，諸藥合用共為使藥。根據(jù)以上分析，上述成分可作為基于配伍原則的質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)的首選成分。

3.5 基于可測(cè)性相關(guān)質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測(cè)分析

紫外分光光度計(jì)可檢測(cè)總多糖的含量[106]，采用HPLC法可測(cè)定鹽益智仁中白楊素[107]和圓柚酮[108]，補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂酚[18]，金櫻子中槲皮素、山柰酚的含量[109]，覆盆子中山柰酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、山柰酚的含量[110]，黃精中薯蕷皂苷元、槲皮素及山柰酚的含量[111]，甘草中甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、甘草酸、甘草酸銨等成分的含量[112]。 采用UPLC-Q-TOF-MS法可測(cè)定益智仁中原兒茶酸、白楊素、山柰素、楊芽黃素、圓柚酮等成分的含量[113]，烏藥中烏藥醚內(nèi)酯、去甲異波爾定等成分的含量[25]，桑椹中天竺葵-3-O-葡萄糖苷、氯化芍藥素-3-O-葡萄糖苷、矢車(chē)菊-3-O-蕓香葡萄糖苷、錦葵色素-3-5-二葡萄糖苷、矢車(chē)菊-3-O-葡萄糖等成分的含量[114]。采用UPLC法可測(cè)出松果菊苷、肉蓯蓉苷A、毛蕊花糖苷、管花苷A、異毛蕊花糖苷、2'-乙酰毛蕊花糖苷和管花苷B等成分的含量[115]。經(jīng)過(guò)臨床研究發(fā)現(xiàn)，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方的水提液為治療夜尿癥的有效物質(zhì)，而不溶于水的烏藥醚內(nèi)酯、圓油酮，以及山柰酚、槲皮素、蘆丁等存在于多個(gè)藥材中，專(zhuān)屬性不強(qiáng)，因此不能作為質(zhì)量標(biāo)志物的首選成分。

在壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物預(yù)測(cè)分析的過(guò)程中，雖然方中有許多成分，但經(jīng)過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，部分成分不可測(cè)，或無(wú)專(zhuān)屬性和藥效相關(guān)性，故而需要選取成分特有，與壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方藥效有關(guān)聯(lián)且便于檢測(cè)的化合物。綜上所述，壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方中多糖(益智仁多糖、金櫻子多糖、黃精多糖、枸杞多糖、肉蓯蓉多糖、桑椹多糖)、原兒茶酸、白楊素、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂酚、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、松果菊苷、毛蕊花糖、甘草酸等成分均可以作為該方初步質(zhì)量預(yù)測(cè)分析的標(biāo)志物。見(jiàn)表1。

表1 壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方的質(zhì)量標(biāo)志物信息

4 結(jié)語(yǔ)

壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方是以廣西壯族自治區(qū)壯族民間常用驗(yàn)方為基礎(chǔ)研制的藥方，全方重在調(diào)理腎、脾、肝三臟，諸藥合用共奏暖腎祛寒、溫脾養(yǎng)肝、縮尿止遺之功，主治腎陽(yáng)虛、脾腎兩虛、下元虛冷之腰膝酸軟、尿頻遺尿等癥。組方符合壯醫(yī)藥主幫帶原則，藥味雖然較多，但不雜亂，立法嚴(yán)謹(jǐn)，選藥適當(dāng)，處方水提液經(jīng)多年臨床觀察和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明治療效果良好，未見(jiàn)毒副反應(yīng)。但是作為民間驗(yàn)方，尚未有研究將壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方作為一個(gè)整體復(fù)方進(jìn)行研究，本課題組也正在將壯藥調(diào)理補(bǔ)虛方作為整體復(fù)方進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、血清藥物化學(xué)等一系列研究，因此本研究的質(zhì)量標(biāo)志物初步分析為本課題組的整體復(fù)方研究提供了理論基礎(chǔ)，同時(shí)也為建立壯藥補(bǔ)虛調(diào)理膏質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系提供了參考依據(jù)。