劉瑞巧，杜寶蘭，孟欣宇

1.北京市華都峪口禽業(yè)有限責(zé)任公司，北京 101206；2.國(guó)家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系平谷綜合試驗(yàn)站，北京 101206

馬立克氏?。∕D）又名神經(jīng)淋巴瘤病，是由細(xì)胞結(jié)合性皰疹病毒引起的傳染性腫瘤??；本病主要以外周神經(jīng)、內(nèi)臟器官、虹膜及皮膚等發(fā)生淋巴樣浸潤(rùn)，并發(fā)展成淋巴瘤；臨床表現(xiàn)以免疫抑制、神經(jīng)性障礙、內(nèi)臟器官腫瘤、虹膜色素消失、瞳孔縮小和皮膚羽囊結(jié)節(jié)為主。其易感雞群為未經(jīng)疫苗免疫的雛雞。因本病無(wú)有效治療方法，故加強(qiáng)對(duì)本病的預(yù)防具有十分重要的意義，孵化場(chǎng)將1 日齡雛雞馬立克氏病疫苗免疫作為控制本病的有效手段，免疫接種后可使損失降低至5%以下。免疫效果主要受疫苗質(zhì)量、儲(chǔ)存、融化、稀釋、注射部位和劑量、雛雞出殼后的免疫時(shí)間、生產(chǎn)場(chǎng)衛(wèi)生情況、疫苗干擾等因素的影響，任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，都會(huì)對(duì)免疫效果造成影響，導(dǎo)致免疫失敗。下面根據(jù)免疫環(huán)節(jié)，淺談如何做好孵化場(chǎng)雛雞1 日齡馬立克氏病疫苗的有效免疫，避免免疫失敗的發(fā)生。

1 疫苗采購(gòu)

目前國(guó)產(chǎn)雞馬立克氏病疫苗產(chǎn)品有雞馬立克氏?、?Ⅲ型二價(jià)活疫苗（CVI988+FC126 株）、雞馬立克氏病活疫苗（814 株）、雞馬立克氏病活疫苗（CVI988/Rispens 株）、雞馬立克氏病活疫苗（CVI988株）、雞馬立克氏病火雞皰疹病毒活疫苗（FC126株）、雞馬立克氏病火雞皰疹病毒耐熱保護(hù)劑活疫苗。其中，需要液氮保存的CVI988 株、814 株的馬立克疫苗因保護(hù)效果好而在國(guó)內(nèi)被廣泛使用[1]。疫苗采購(gòu)及入庫(kù)時(shí)確保疫苗的高質(zhì)量。

1.1 疫苗廠家

選擇優(yōu)質(zhì)廠家確保采購(gòu)疫苗質(zhì)量。采購(gòu)疫苗時(shí)必須從有資質(zhì)的獸藥廠家進(jìn)行采購(gòu)。進(jìn)貨前，查驗(yàn)疫苗廠家的《獸藥經(jīng)營(yíng)許可證》《生物制品經(jīng)營(yíng)許可證》等信息，購(gòu)入的疫苗瓶包裝上要有批準(zhǔn)文號(hào)、生產(chǎn)日期、GMP 認(rèn)證等信息。

1.2 疫苗采購(gòu)計(jì)劃

孵化場(chǎng)根據(jù)雛雞生產(chǎn)計(jì)劃制定雛雞免疫計(jì)劃及疫苗采購(gòu)計(jì)劃，并嚴(yán)格按照計(jì)劃采購(gòu)；采購(gòu)時(shí)做到疫苗與稀釋液配套進(jìn)貨。

1.3 疫苗入庫(kù)

要求疫苗在規(guī)定的條件下運(yùn)輸，為確保接收的疫苗質(zhì)量，到貨后技術(shù)人員先查看疫苗的運(yùn)輸條件，條件不符合標(biāo)準(zhǔn)拒收；接貨時(shí)檢查購(gòu)進(jìn)疫苗法定的批準(zhǔn)文號(hào)、批簽發(fā)檢驗(yàn)報(bào)告書、生產(chǎn)批號(hào)、生產(chǎn)日期、有效期等信息；卸貨后做好疫苗購(gòu)進(jìn)驗(yàn)收記錄，包括進(jìn)貨數(shù)量、供貨單位、購(gòu)貨日期、疫苗生產(chǎn)日期、質(zhì)量檢查報(bào)告及驗(yàn)收人簽名等。

2 疫苗儲(chǔ)存

2.1 儲(chǔ)存環(huán)境

關(guān)注疫苗儲(chǔ)存大環(huán)境，在疫苗儲(chǔ)存方面，孵化場(chǎng)要設(shè)立通風(fēng)效果好、干燥、衛(wèi)生、遠(yuǎn)離熱源的疫苗專用庫(kù)，并由專人負(fù)責(zé)，每日對(duì)儲(chǔ)存環(huán)境進(jìn)行查看。

關(guān)注疫苗儲(chǔ)存的液氮環(huán)境。冰凍馬立克疫苗的病毒是一種特殊的病毒，必須保存在活的細(xì)胞中才有免疫作用，細(xì)胞死亡后，病毒隨即死亡，疫苗失去有效作用，-196 ℃的液氮可以長(zhǎng)時(shí)間保持細(xì)胞活性[1]，疫苗需保存在-196 ℃的液氮中。任何導(dǎo)致疫苗暴露在液氮之外的操作都會(huì)引起疫苗溶解而失效。疫苗儲(chǔ)存時(shí)，要確保疫苗保存在液氮罐內(nèi)液氮面以下，一般液氮面高于疫苗面8～10 cm，并且垂直存放，做到定期對(duì)保存疫苗的液氮罐補(bǔ)充液氮。以35 L的液氮罐為例，疫苗提斗柄長(zhǎng)度31 cm，如果液氮罐口離液面的距離大于31 cm，疫苗就會(huì)暴露在空氣中，導(dǎo)致疫苗溶解而影響疫苗效價(jià)，為保證保存質(zhì)量，要求液氮罐口離液面的距離必須控制在26 cm內(nèi)[2]，負(fù)責(zé)人每天使用木尺測(cè)量液氮面高度，及時(shí)添加液氮。如保存的過(guò)程中出現(xiàn)液氮意外泄露或者蒸發(fā)，疫苗失效不能繼續(xù)使用，需及時(shí)丟棄。

關(guān)注疫苗稀釋液的儲(chǔ)存環(huán)境。疫苗專用稀釋液為清亮、紅色、無(wú)雜質(zhì)的透明液體，需儲(chǔ)存在干燥、衛(wèi)生、常溫環(huán)境中，并根據(jù)生產(chǎn)日期規(guī)律存放、使用，稀釋液若保存過(guò)程質(zhì)量出現(xiàn)問(wèn)題，發(fā)現(xiàn)變色或有雜質(zhì)，應(yīng)棄用。

2.2 儲(chǔ)存時(shí)間

疫苗的有效期為24 個(gè)月，超過(guò)有效期不能起到預(yù)期的免疫效果，會(huì)造成免疫失敗，應(yīng)嚴(yán)禁使用。

首先要做到有計(jì)劃地采購(gòu)，在制定疫苗采購(gòu)計(jì)劃時(shí)，要嚴(yán)格按照疫苗的使用計(jì)劃進(jìn)行訂購(gòu)，以保證所用疫苗在有效期內(nèi)用完，防止由于采購(gòu)不當(dāng)造成儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)而引起的疫苗失效；其次在疫苗庫(kù)管理方面，要設(shè)立專門的疫苗檔案，疫苗庫(kù)負(fù)責(zé)人在疫苗接收卸貨時(shí)，檢查疫苗生產(chǎn)時(shí)間、失效時(shí)間，做好接收記錄；收貨后存放時(shí)，應(yīng)將生產(chǎn)日期最早的疫苗放在庫(kù)房最外面，根據(jù)生產(chǎn)日期進(jìn)行規(guī)律存放；疫苗使用時(shí)，按照疫苗生產(chǎn)日期規(guī)范使用，定期檢查疫苗庫(kù)存、疫苗生產(chǎn)日期，確保庫(kù)內(nèi)疫苗均在有效期范圍內(nèi)免疫。

3 雛雞免疫時(shí)間

馬立克氏病疫苗要求雛雞出殼后24 h 內(nèi)接種完畢，雛雞出殼超過(guò)24 h，免疫保護(hù)率降低。為保證雛雞按時(shí)免疫，首先要在孵化期內(nèi)縮短雛雞出殼的間隔時(shí)間，做到雛雞出雛整齊度高；其次要做到集中出雛，縮短雛雞處理時(shí)間，確保所有雛雞出殼24 h 內(nèi)免疫。

精準(zhǔn)孵化，縮短雛雞出殼的間隔時(shí)間。蛋雞標(biāo)準(zhǔn)的孵化時(shí)間為504 h，不同品種、日齡、蛋重的種蛋對(duì)孵化參數(shù)的需求有一定的差距。首先實(shí)現(xiàn)所有孵化器的雛雞整齊度高。在生產(chǎn)計(jì)劃編制時(shí)，根據(jù)種蛋品種、日齡、蛋重進(jìn)行分級(jí)。精準(zhǔn)生產(chǎn)計(jì)劃，實(shí)現(xiàn)分品種、日齡、蛋重的專機(jī)孵化；精準(zhǔn)孵化參數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)不同品種、日齡、蛋重的種蛋孵化參數(shù)的調(diào)整，縮短孵化設(shè)備之間出殼時(shí)間的差異，實(shí)現(xiàn)每臺(tái)機(jī)器的出雛時(shí)間一致。其次實(shí)現(xiàn)單臺(tái)孵化器內(nèi)的雛雞整齊度高，做好孵化器內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，及時(shí)檢查風(fēng)機(jī)、加溫加濕系統(tǒng)、保溫、護(hù)板、翻蛋等，降低孵化車內(nèi)部的溫差，確保不同位置胚蛋積溫值一致，縮短孵化器內(nèi)部雛雞出殼的間隔時(shí)間。

集中出雛，縮短雛雞處理時(shí)間。孵化場(chǎng)在雛雞處理時(shí)，應(yīng)采取集中出雛的生產(chǎn)模式，縮短第一只雛雞與最后一只雛雞的處理時(shí)間，做到所有雛雞24 h 內(nèi)免疫接種，保證免疫質(zhì)量。若當(dāng)批次出雛數(shù)量多，不能保證按時(shí)免疫完畢，孵化廳可采取分批次入孵的方式進(jìn)行操作。

4 免疫器材準(zhǔn)備

免疫前需對(duì)免疫所使用的器材進(jìn)行嚴(yán)格衛(wèi)生消毒。稀釋、注射等免疫器材是直接接觸疫苗的工具，解凍、稀釋及接種過(guò)程中衛(wèi)生不合格會(huì)導(dǎo)致馬立克病疫苗品質(zhì)下降、影響免疫效果。免疫前，稀釋疫苗和接種用的注射器、針頭等器材，首先用清水沖洗干凈，然后用121 ℃高壓滅菌至少15 min 或置沸水浴中消毒至少20 min，最后用生理鹽水沖洗后使用，沖洗過(guò)程不能接觸化學(xué)消毒劑。在免疫過(guò)程中所有的針頭和注射器做到1 h 更換1 次。

5 疫苗準(zhǔn)備

馬立克疫苗的準(zhǔn)備工作包括疫苗的融化、稀釋，要求嚴(yán)格，且整個(gè)疫苗的融化、稀釋要在1.5 min 內(nèi)完成。在摘取疫苗的過(guò)程中不能影響液氮罐中存儲(chǔ)的疫苗。

1）取苗：取苗時(shí)，操作人員戴上保護(hù)手套及面罩，一只手提起液氮中的疫苗提桶，從液氮罐中提出一小筒苗，并從其中取出1 根鋁桿，同時(shí)從上面摘取1 瓶疫苗，觀察疫苗瓶是否完好，其余疫苗立即放回液氮罐中，蓋好液氮罐。取苗時(shí)不能將整個(gè)提桶提出液氮罐外。

2）融化：將取出的疫苗迅速放到37 ℃或27 ℃（根據(jù)疫苗廠家要求）標(biāo)準(zhǔn)的恒溫水浴鍋中，輕輕搖動(dòng)疫苗瓶，使疫苗在1 min 內(nèi)迅速溶解。

3）稀釋：溶解完畢后，用干凈紙巾擦干瓶口后開瓶，再用已抽取稀釋液的注射器（18G 針頭）緩慢吸出疫苗，將疫苗沿著稀釋液瓶壁緩慢加入稀釋液中，推入過(guò)程不能產(chǎn)生氣泡。再次抽取混有疫苗的稀釋液沖洗疫苗瓶及瓶蓋，不少于3 次。最后輕輕晃動(dòng)稀釋液瓶子，使疫苗混合均勻。疫苗融化完后必須使用，絕不允許將融化的疫苗重新冰凍。

6 疫苗注射

6.1 疫苗有效時(shí)間

疫苗稀釋后，需要在有效時(shí)間內(nèi)進(jìn)行免疫，一般控制在30 min 內(nèi)，不得超過(guò)60 min。在免疫時(shí)間管理方面，首先做好免疫人員的匹配，疫苗配備結(jié)束后，疫苗袋上標(biāo)記配制結(jié)束后的時(shí)間、疫苗使用結(jié)束時(shí)間、配藥人員姓名等信息。

6.2 免疫部位

雛雞頸背部正中1/3 處皮下注射免疫，注射方式有手動(dòng)注射、半自動(dòng)注射、自動(dòng)注射3 種模式。免疫前根據(jù)不同的模式進(jìn)行注射部位的確定、調(diào)整，并做到及時(shí)檢查。

6.3 注射劑量

每2 000 羽份疫苗用400 mL 無(wú)菌稀釋液稀釋，用20 號(hào)或21 號(hào)針頭接種，每只雛雞按照0.2 mL（1 羽份）免疫，疫情危險(xiǎn)區(qū)可提高至每只0.24 mL，做到注射劑量準(zhǔn)確。注射針頭劑量檢查很關(guān)鍵，免疫前調(diào)試免疫設(shè)備、并用塑料量管測(cè)定注射操作的每把/臺(tái)注射器的注射劑量，測(cè)量方式為在塑料管0.6 mL 上端的凹面畫線，連續(xù)注射3 次，看是否達(dá)到0.6 mL。在注射過(guò)程中，每隔1 h 測(cè)定1次。在保證免疫效果的基礎(chǔ)上，避免疫苗浪費(fèi)，出雛完畢前正確評(píng)估所需疫苗數(shù)量。免疫完畢后，當(dāng)批次用剩下的疫苗要遺棄。

7 免疫質(zhì)量檢查

免疫時(shí)，做到有效免疫，防漏免、空免。免疫前向馬立克疫苗稀釋液中加入0.01%的馬立克疫苗無(wú)菌藍(lán)色專用染液，檢查有無(wú)漏免、滲液、出血等情況，如出現(xiàn)漏免或滲液應(yīng)及時(shí)補(bǔ)免，對(duì)出血雞只淘汰，同時(shí)查找原因，及時(shí)調(diào)整免疫設(shè)備；免疫過(guò)程觀察疫苗瓶?jī)?nèi)的疫苗情況，避免發(fā)生注射針頭堵針現(xiàn)象；關(guān)注疫苗稀釋瓶?jī)?nèi)的疫苗量，做到及時(shí)更換疫苗，防止出現(xiàn)空瓶注射。

8 免疫雞群衛(wèi)生管理

雛雞出殼前、出殼后、入舍前、入舍后的有效消毒有利于雞只對(duì)馬立克氏疫苗建立起良好的免疫應(yīng)答。孵化過(guò)程中做好孵化廳內(nèi)環(huán)境、孵化器、出雛器、雛雞處理設(shè)備及附屬設(shè)備的衛(wèi)生；雛雞處理前對(duì)雛雞處理場(chǎng)地、運(yùn)輸工具等進(jìn)行徹底消毒；養(yǎng)殖戶引進(jìn)雛雞前也要對(duì)雞舍熏蒸消毒，引進(jìn)后帶雞消毒，及時(shí)殺滅空氣中的病原體。

9 關(guān)于其他疫苗的混合使用

雛雞1 日齡馬立克疫苗免疫不能在馬立克疫苗專用稀釋液中加入其他疫苗、抗生素、維生素等，以免降低藥效，造成無(wú)效免疫。

10 結(jié) 語(yǔ)

綜上所述，免疫有效率受采購(gòu)疫苗質(zhì)量、保存、免疫操作、免疫劑量、免疫時(shí)間、雞群衛(wèi)生等方面的影響，無(wú)論哪方面出現(xiàn)問(wèn)題，都會(huì)造成不同程度的免疫失敗。孵化場(chǎng)配備專業(yè)的防疫免疫人員，經(jīng)過(guò)培訓(xùn)考核合格后持證上崗，做到定期培訓(xùn)、隨時(shí)檢查，通過(guò)對(duì)疫苗采購(gòu)、質(zhì)量保證、環(huán)境衛(wèi)生方面加強(qiáng)管理，做到雛雞有效免疫。