王亞楠， 霍健， 黃冉， 程航航， 范道朋， 王淑琪， 何華， 張改平

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 國家動物免疫學(xué)國際聯(lián)合研究中心，河南 鄭州 450046)

非洲豬瘟(African swine fever, ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fever virus, AFSV)感染野豬和家豬引起的急性并帶有出血性的傳染性疾病。被感染的豬主要出現(xiàn)發(fā)熱、心跳加速和呼吸不暢等癥狀，其中部分被感染豬的眼和鼻內(nèi)出現(xiàn)漿液性分泌物，皮膚發(fā)紺，腎臟和淋巴結(jié)明顯出血[1-3]。ASFV為非洲豬瘟病毒科(Asfarviridae)非洲豬瘟病毒屬(Asfivirus)的唯一成員，而且是目前已知的唯一蟲媒DNA病毒[4]。ASFV宿主包括家豬、非洲疣豬和叢林豬，同時還包括無脊椎節(jié)肢動物軟蜱[5]。ASFV具有高死亡率和傳染性，這導(dǎo)致ASF一旦發(fā)生就會造成養(yǎng)殖場的豬成規(guī)模死亡，對養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟效益損失[6]。與自然宿主非洲疣豬感染ASFV基本無癥狀相比，家豬和野豬在感染該病毒后大多會出現(xiàn)嚴重臨床表現(xiàn)，甚至?xí)诟腥竞?～10 d內(nèi)死亡[7]。目前，ASF已經(jīng)在全球范圍內(nèi)引起高度重視，中國也將ASF列為一類動物疾病[8]。2018年8月，ASF首次傳入中國并廣泛傳播，導(dǎo)致中國生豬產(chǎn)量大幅下降。截至2021年5月，ASF在中國已發(fā)生191起，累計撲殺生豬約121.01萬頭，嚴重影響中國養(yǎng)豬行業(yè)的發(fā)展[6]。

目前，嚴格的生物安全措施(消毒、隔離和撲殺等)是防控ASF的主要方式。但是，受養(yǎng)殖人員生物安全意識薄弱和大量野豬存在等因素的影響，利用生物安全措施防控ASF效果有限，新的疫情仍在不斷發(fā)生[9-11]。另外，其他治療措施包括向病豬施用恩諾沙星以及月桂酸單甘油酯等被證實對ASF無效[12]。疫苗接種是通過加強動物自身免疫力進而達到對動物傳染性疫病預(yù)防、管理、控制、凈化及消滅等目的的重要手段。疫苗在制備過程本身保留了病原刺激動物體免疫系統(tǒng)的特性。當動物體內(nèi)接觸到這種不具傷害力的病原后，機體自身的免疫系統(tǒng)便會產(chǎn)生一定的保護物質(zhì)，例如免疫激素、活性生理物質(zhì)和特異性抗體等。當再次被病原侵襲時，動物體的免疫系統(tǒng)便會發(fā)揮特異性功能，依循其原有的記憶制造更多的保護性抗體阻止病原的傷害。由于現(xiàn)階段沒有ASF特異性治療藥物，因此，疫苗接種被認為是防控ASF最有效的手段。但是，疫苗接種的安全性和保護性仍是其亟待解決的問題。納米疫苗是基于納米材料與納米技術(shù)制備出來的新型疫苗，具有增強疫苗免疫激活能力、提高穩(wěn)定性以及降低毒性等優(yōu)勢，因而被廣泛用于疫苗遞送系統(tǒng)，但是目前少見關(guān)于ASF納米疫苗的研究報道。本綜述針對ASF疫苗的研制現(xiàn)狀進行論述，探討新型納米疫苗在畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域的應(yīng)用以及在防控ASF中的展望，以期為ASF疫苗的研發(fā)提供新的方向。

1 ASF疫苗研究現(xiàn)狀

1921年ASF首次在非洲肯尼亞發(fā)現(xiàn)，并在撒哈拉以南的非洲國家擴散；1957年后相繼擴散到西歐和拉美等地區(qū)。ASFV表現(xiàn)出存活時間長、抵抗力強、基因組強大及易變異等特點，使其疫苗研發(fā)工作十分困難。早期ASF疫苗研究主要停留在滅活疫苗的研制上，到20世紀70年代隨著基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展，基因工程疫苗逐漸成為主流。

1.1 滅活疫苗

滅活疫苗是利用β-丙內(nèi)酯、福爾馬林處理及加熱等方式將病原滅活，在病原喪失毒性及傳染性的前提下保持其免疫原性的常規(guī)疫苗。滅活疫苗具有制備方法簡單、價格低等優(yōu)勢。滅活疫苗是豬細小病毒病、豬鏈球菌病、高致病性豬藍耳病和豬肺疫等傳染性疾病治療初期首選的疫苗制劑[13]。ASF疫苗在初期也曾嘗試利用這類經(jīng)典的疫苗制備方式，雖然疫苗效價活性在一定程度上有所增強，但最終都未能起到有效的細胞免疫保護效果[14]。BLOME等[15]將滅活的ASF疫苗與最新型佐劑Emulsigen?-D聯(lián)合使用，在對豬免疫之后進行攻毒試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬的血液中能夠檢測到該病毒的特異性抗體，但在機體內(nèi)無法發(fā)揮免疫保護作用，推測可能與ASFV在宿主細胞內(nèi)外具有不同的病毒生物學(xué)的特性相關(guān)。成熟的ASFV病毒粒子在不同成熟方式中具有巨大的免疫原性差異。ASFV病毒粒子成熟包括細胞內(nèi)成熟和細胞外成熟。細胞內(nèi)成熟是指在被感染細胞的病毒工廠中組裝，最終形成含有病毒基因組、核心殼層、雙層脂膜和衣殼結(jié)構(gòu)的ASFV病毒粒子，包含50多種蛋白。細胞外成熟是指在病毒工廠中組裝后以出芽的方式獲得囊膜并釋放至細胞外，形成包含CD2V、p12等病毒蛋白和部分細胞蛋白的ASF病毒粒子[16]。這兩者表面蛋白種類數(shù)量差異較大。成熟的ASF病毒粒子表面蛋白在宿主細胞內(nèi)外的不同結(jié)構(gòu)區(qū)域有著巨大的差異，這種差異導(dǎo)致這2種類型的病毒的免疫原性不同，推測是誘導(dǎo)免疫原性改變和影響滅活疫苗的效果因素之一[17]。因此，滅活疫苗無法有效防控ASF。

1.2 弱毒疫苗

弱毒疫苗是通過人工將ASFV在細胞內(nèi)(包括豬骨髓來源細胞、Vero細胞和COS-1細胞等)中斷傳代以降低病毒毒力的病原性疫苗[18]，其病原致病性相對較弱但仍具有免疫原性。MONTEAGUDO等[19]研究表明，ASF的BA71毒株在缺失CD2v基因后毒力水平明顯減弱；在此基礎(chǔ)上制備的基因缺失弱毒疫苗不僅對同源強毒株具有抵抗力，而且對不同基因型毒株也具有交叉保護作用。弱毒疫苗在臨床上表現(xiàn)出免疫原性好、同源包含率高的特點，但存在毒力返強的可能性[20]。GAUDREAULT等[21]研究表明，基因重組的NH/P68弱毒疫苗能夠有效促進豬體內(nèi)細胞毒性T細胞與NK細胞的活性，并且能夠有效抵御強毒株的攻擊。但是，在整個免疫反應(yīng)過程中，該弱毒疫苗也產(chǎn)生了不同程度的副作用，例如行動障礙、病毒血癥、肺炎及流產(chǎn)等癥狀。同時，隨著時間的延長，豬體內(nèi)的CD8+T細胞不斷消耗，該弱毒疫苗的免疫效果逐漸減退，對病毒出現(xiàn)不完全保護[22-24]。目前，這些已經(jīng)研發(fā)的基因缺失ASF弱毒疫苗仍處于試驗性階段，其安全性仍然存在巨大挑戰(zhàn)。

1.3 基因工程疫苗

基因工程疫苗是利用生物技術(shù)將保護性抗原的基因片段克隆到表達載體，進而在體外表達并純化重組蛋白的疫苗。該類疫苗克服了傳統(tǒng)弱毒疫苗毒力返強以及滅活疫苗滅活不完全時的安全性問題，是目前尚不能培養(yǎng)或繁殖有困難的病毒相關(guān)疫苗研發(fā)的重要途經(jīng)[25-26]。目前，ASF的基因工程疫苗研究主要有亞單位基因工程疫苗、DNA疫苗和病毒活載體疫苗。其中，相關(guān)研究主要集中在p30、p54、p72、CD2v、EP153R、p12、D117L和pp62等蛋白上，這些蛋白被認為具有免疫原性，能夠用于構(gòu)建亞單位疫苗。但是，該類疫苗的安全性問題仍有待驗證。楊思成等[27]研究表明，用p30或p54蛋白免疫的家豬雖然能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和ASFV的抗體，但存在免疫后家豬被感染死亡的風(fēng)險。研究人員利用重組桿狀病毒同時表達p30和p54蛋白所制備的亞單位疫苗，在使用中發(fā)現(xiàn)不僅不能抵抗ASFV體內(nèi)攻擊[28]，而且可能導(dǎo)致豬出現(xiàn)病毒血癥等疾病[29]。WU等[30]研究表明，利用桿狀病毒表達CD2v蛋白，并用弗氏佐劑接種豬之后，豬對同源ASFV E75毒株的攻擊具有劑量依賴的保護作用，但不具有中和抗體的作用。GALLARDO等[31]研究表明，缺乏A238L基因的重組NH/P68毒株對同源強毒株L60表現(xiàn)出理想的保護效果，但接種疫苗的豬中有一部分出現(xiàn)病毒血癥和其他副作用。因此，基因缺失疫苗雖然取得了一些成功，但仍有不確定性。

傳統(tǒng)方式制備的疫苗存在免疫原性不強、安全性差等問題[32]。其中，ASF滅活疫苗或亞單位疫苗難以誘導(dǎo)中和抗體，不能為機體提供有效免疫保護效率；而弱毒疫苗只在理論上存有可行性，在體外試驗中只能在豬的原代巨噬細胞中增殖，難以通過傳代致弱的途徑獲得安全并且有效的弱毒疫苗[33]。因此，尋求一種新型的疫苗形式用于防控ASF并增強體內(nèi)免疫反應(yīng)就很有必要。

2 納米疫苗防控ASF的潛力

2.1 納米疫苗的概況

納米技術(shù)是具有廣闊應(yīng)用前景的技術(shù)。納米技術(shù)與免疫學(xué)融合的新型產(chǎn)物已經(jīng)成為當前疫苗研究開發(fā)的熱點[34]。納米疫苗(nanovaccine，NVs)是以納米材料作為載體或免疫調(diào)節(jié)劑，通過化學(xué)或物理方式連接抗原和佐劑制備出的用于疾病預(yù)防和治療的疫苗[35]。納米顆粒由天然高分子物質(zhì)或合成高分子物質(zhì)包括聚乳酸-羥基乙酸共聚物(ploy(D,L-lactic-coglycolic acid), PLGA)、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)以及殼聚糖(chitosan, CS)等構(gòu)成，制備材料來源廣泛，具有優(yōu)異的生物相容性和生物可降解性，廣泛應(yīng)用于生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域[36]。大多數(shù)納米材料具有激活體內(nèi)免疫效果的能力，但仍有少數(shù)納米材料不足以刺激機體固有的免疫反應(yīng)。因此，為實現(xiàn)高效、特異性多重激活細胞免疫和體液免疫，在制備納米疫苗的過程中需要在納米材料中添加特異性抗原，并通過包埋、吸附和化學(xué)鍵合等方式將抗原與粒子緊密結(jié)合，最終遞送到動物體內(nèi)發(fā)揮效用[37]。表面吸附通常是非共價鍵作用，這會導(dǎo)致抗原從納米顆粒中快速解離。因此，將抗原與納米載體通過化學(xué)鍵或包封的方式連接在一起，能夠使二者之間更加穩(wěn)定[38]。由于通過簡單的混合反應(yīng)就能將抗原有效封裝至納米載體中，且在納米載體部分解離后該納米顆粒才能釋放抗原，這使得抗原可以在體內(nèi)緩慢釋放。納米疫苗具有延長體內(nèi)循環(huán)時間、增強抗原穩(wěn)定性、生物相容性好、安全性高、抗原儲存效果強、提高抗原攝取和減少免疫次數(shù)等優(yōu)勢，已被廣泛應(yīng)用于畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域。

2.2 納米疫苗在獸用疫苗中的應(yīng)用

納米技術(shù)的發(fā)展為獸用疫苗提供了新的研究方向與思路，但是目前還未有針對ASF納米疫苗的研究報道。本綜述介紹目前在獸用疫苗中納米疫苗的種類，以期為ASF納米疫苗的研究提供參考。

2.2.1 聚乳酸-羥基乙酸共聚物 聚乳酸-羥基乙酸共聚物(ploy(D,L-lactic-coglycolic acid)，PLGA)是由2種單體(乳酸和羥基乙酸)聚合而成的可降解的功能高分子有機化合物。PLGA因其具有良好的生物相容性、無毒性及釋放緩慢而被廣泛用于制藥和醫(yī)用材料。由于 PLGA的降解產(chǎn)物是乳酸和羥基乙酸，同時乳酸又是體內(nèi)的正常代謝產(chǎn)物，因此不會產(chǎn)生毒副作用。為了增強豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus 2，PCV2)抗原特異性淋巴細胞增殖，增強外周血單核細胞中T細胞的免疫效率，WANG等[39]以PCV2 Cap蛋白親和肽為基礎(chǔ)與PLGA共價偶聯(lián)，得到含有PCV2 Cap抗原的PLGA納米顆粒(PLGA-Cap NPs)。PLGA-Cap NPs能夠更好地被抗原呈遞細胞(antigen-presenting cells, APC)識別并吞噬，其引起的免疫反應(yīng)作用強，在RAW264.7細胞中IL-1β、IL-12和TNF-α的分泌水平高于游離蛋白組，并且可以特異性富集PCV2 Cap，增強APC對抗原的靶向性，促進APC的攝取。WANG等[39]還將不同拷貝數(shù)的甲型流感病毒保守肽M2e插入到PCV2 Cap蛋白中，構(gòu)建了對甲型流感病毒和PCV2具有雙重保護作用納米疫苗。

2.2.2 金納米粒 金納米粒(AuNPs)是非常適合應(yīng)用在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的新型材料。AuNPs粒徑通常為10～20 nm，一般以金溶膠使用，也稱膠體金。AuNPs是具有穩(wěn)定性高、毒性低、生物相容性良好及與生物分子選擇性結(jié)合的能力[40]。SINGH等[41]研究表明，AuNPs在提高疫苗效力方面具有巨大潛力，包括誘導(dǎo)巨噬細胞激活、刺激淋巴細胞反應(yīng)及針對某些抗原產(chǎn)生抗體，已經(jīng)成為增強免疫應(yīng)答的良好載體。STAROVEROV等[42]使用球形AuNPs作為豬傳染性胃腸炎病毒(swine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)抗原的載體。AuNPs偶聯(lián)TGEV抗原的納米疫苗對動物進行免疫接種，能夠激活A(yù)PC，還能增加脾淋巴細胞的增殖活性。免疫后動物體內(nèi)的IFN-γ、IL-1β和IL-6的含量高于免疫前或直接免疫接種抗原的動物；AuNPs-TGEV免疫動物后巨噬細胞和B細胞的活性都有了明顯的提升，并且提高了體內(nèi)細胞免疫的效果。此外，AuNPs-TGEV可以顯著改善動物免疫器官的結(jié)構(gòu)，并恢復(fù)這些器官的形態(tài)功能狀態(tài)。

2.2.3 聚酸酐納米顆粒 聚酸酐(polyanhydrides)新型合成生物可降解的高分子材料，由1,8-雙(對羧基苯氧基)-3,6-二氧辛烷(CPTEG)和1,6-雙(對羧基苯氧基)己烷(CPH)組成的共聚物納米顆粒，已被證明可以增強流感病毒抗原的穩(wěn)定性和持續(xù)釋放[43]。DHAKAL等[44]開發(fā)了聚酸酐納米顆粒為基礎(chǔ)的豬流感疫苗，共包埋滅活可溶性抗原(KAg)和Toll樣受體(TLR-9)激動劑(CpG-ODN)，并將該納米疫苗與含5倍以上抗原的KAg疫苗在異源病毒攻毒后的免疫原性和保護效果進行了比較；結(jié)果表明，與鼻內(nèi)遞送可溶性KAg疫苗相比，該納米疫苗顯著降低了流感引起的發(fā)熱現(xiàn)象，并且提供了更好的保護效果，鼻病毒脫落量減少93.75%，肺部病毒滴度降低98.75%。聚酸酐納米疫苗可誘導(dǎo)豬產(chǎn)生較高的黏膜抗體和細胞免疫應(yīng)答，提供更好免疫保護效力。

2.2.4 殼聚糖 殼聚糖(chitosan, CS)是自然界中唯一存在的堿性多糖[45]，為氨基葡萄糖與N-乙酰葡萄胺的共聚物。在酸性條件下，殼聚糖被質(zhì)子化后可溶于水并且?guī)д姾伞ж撾姾傻目乖c帶正電荷的CS可通過表面靜電作用發(fā)生生物黏附，進而形成NVs并有效進入細胞。CS分子中的羥基、氨基可與黏膜中帶負電荷的糖蛋白結(jié)合而產(chǎn)生黏膜吸附作用，當抗原進入消化道內(nèi)避免被快速清除，延長其與黏膜接觸時間，提高免疫應(yīng)答。RENU等[46]制備了以殼聚糖為載體包埋甲型豬流感病毒抗原(KAg)的納米疫苗。為了將候選疫苗有效靶向于表達甘露糖受體的樹突狀細胞和巨噬細胞，該研究將甘露糖與殼聚糖偶聯(lián)，并制備了甘露糖化殼聚糖(mCS)納米粒包裹KAg納米疫苗(mCS NPs-KAg)。以母源抗體(maternal antibody，MDA)陽性豬為試驗對象，mCS NPs-KAg納米疫苗的接種后提高了呼吸道中同源、異源和異亞型病毒特異性黏膜的sIgA和IgG與全身的IgG的表達，增加了氣管支氣管淋巴結(jié)特異性Recall細胞增殖和細胞因子基因表達，從而減少/清除了異源攻擊病毒感染。因此，mCS NPs-KAg納米疫苗可以有效替代商品化流感疫苗。

2.3 納米疫苗防控ASF免疫學(xué)優(yōu)勢

2.3.1 提高抗原遞送效率 納米粒(nanoparticles，NPs)是由高分子材料形成的載體顆粒，用于包載藥物、基因以及抗原等，可以遞送抗原、增強抗原免疫原性并防止抗原提前降解。小尺寸的納米顆粒在體內(nèi)具有更好的滲透性，更容易通過體內(nèi)生物屏障，將抗原更加有效地遞送至靶標部位[47]。從免疫學(xué)角度分析，NPs粒徑分布較為集中，當進入機體時，巨噬細胞和樹突狀細胞優(yōu)先識別、吞噬被納米系統(tǒng)遞送的抗原，為誘導(dǎo)機體產(chǎn)生有效的免疫效率提供保障。REDDY等[48]研究表明，小分子聚合物NPs可有效富集在淋巴結(jié)處并且至少停留120 h。此外，小尺寸NPs能夠充當免疫佐劑的作用，將抗原有效遞送至APC，以提高ASF抗原的免疫應(yīng)答[49]。該類小尺寸NPs主要通過吞噬作用進行攝取，并經(jīng)MHC-Ⅱ類途徑和MHC-Ⅰ類途徑同時提呈[50]，共同誘導(dǎo)體內(nèi)T細胞和B細胞的成熟，協(xié)同增強免疫效率。這類納米載體粒徑小且均一，通常在200 nm以下，因此作為ASF抗原的遞送系統(tǒng)更容易通過淋巴管引流至淋巴結(jié)中，從而進一步促進ASF抗原在體內(nèi)的吸收，增強ASF抗原在淋巴結(jié)的聚集，有利于淋巴結(jié)中APC的攝取和成熟[51]。

2.3.2 靶向增加抗原攝取 為了提高體內(nèi)抗原攝取量，可在NPs表面進行靶標分子修飾，以確保高效遞送抗原至樹突狀細胞(dendritic cells, DC)及其他相關(guān)免疫細胞，并誘導(dǎo)細胞免疫和體液免疫，提高原有疫苗的免疫原性[52]。利用靶向配體與機體某些組織或是細胞之間進行特異性結(jié)合，促使NPs在特定部位聚集從而實現(xiàn)高效免疫[53]。因此，在NPs表面修飾與DC表面受體結(jié)合的配體，如甘露糖 (mannose，MR)、透明質(zhì)酸 (hyaluronic acid，HA)等，可以對DC進行精準靶向，提高DC對ASF抗原的攝取效率。CHAUBEY等[54]研究表明，通過MR修飾的NPs能夠主動靶向體內(nèi)的APC，從而增強免疫反應(yīng)。當DC與包載抗原的脂質(zhì)體共孵育時，脂質(zhì)體能夠提高CD80、CD86等細胞共刺激因子的表達水平。CD44受體在DC表面高度表達，CD44和HA的結(jié)合可以觸發(fā)CD44胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子結(jié)合。因此，HA常用于修飾NPs，實現(xiàn)抗原的靶向遞送。LIANG等[55]研究表明，利用HA修飾的NPs包載模式抗原-卵清蛋白(ovalbumin，OVA)，不僅實現(xiàn)了OVA到DC的靶向遞送，且具有靶向作用的NPs的細胞攝取量是游離OVA的10倍。因此，利用特定的抗體或配體對納米顆粒進行表面修飾能夠增加其在體內(nèi)分布和組織攝取效率和免疫治療水平[56]。這類納米載體通過對納米載體表面進行靶標修飾，使包封ASF抗原的納米載體高度聚集在特定APC部位，從而實現(xiàn)ASF抗原的精準靶向遞送，增強免疫效應(yīng)。

2.3.3 表面電荷增強免疫反應(yīng) 體外研究表明，NPs表面電荷對APC的吞噬作用有重要影響[38]。細胞對ASF抗原攝取速率以及攝取量均與NPs表面電荷呈正相關(guān)。由于細胞膜帶負電，因此陽離子NPs更容易被APC吸引，從而促使NPs呈遞到淋巴結(jié)中[57]，比中性或是負電荷NPs更容易被吞噬。FROMEN等[58]研究表明，具有高表面電荷的NPs更容易被巨噬細胞吞噬。帶正電荷的NPs被細胞內(nèi)化后能在核周定位，經(jīng)給藥后能引起較強的體液免疫和黏膜免疫，提高抗原包封率，增強免疫效果，而帶負電荷的NPs沒有此免疫反應(yīng)[59]。因此，不同電荷的納米載體對細胞內(nèi)化效率不同，利用正電荷的納米載體包封ASF抗原能夠顯著提升細胞的內(nèi)化效率，提高抗原免疫效應(yīng)。

2.3.4 增強T細胞免疫效率 傳統(tǒng)的ASF疫苗不能有效誘導(dǎo)機體產(chǎn)生細胞毒性T細胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL),無法刺激機體產(chǎn)生有效的細胞免疫。MESHULAM等[60]研究表明，在去除弱毒免疫豬體內(nèi)的CD8+T淋巴細胞后，免疫豬不能抵御ASFV強毒的攻擊。細胞免疫尤其是CD8+T淋巴細胞在抗ASFV感染中起到了至關(guān)重要的作用[61]。因此，激活機體的細胞免疫的能力，尤其是激活CD8+T淋巴細胞在ASFV感染的免疫保護應(yīng)答中的作用[62-63]，是研發(fā)安全有效的ASF疫苗的關(guān)鍵[64]。劉曉璇[65]研究表明，外源性蛋白/多肽在一些陽離子材料如聚乙烯亞胺(polyethylenimine, PEI)、羥基氯喹(hydroxychloroquine, HCQ)的輔助下，易從溶酶體逃逸至細胞質(zhì)中實現(xiàn)抗原的交叉呈遞，使外源性抗原能與APC表面的MHC-Ⅰ類分子相結(jié)合，APC加工提呈給T淋巴細胞并激活初始CD8+T淋巴細胞，促進CD8+T淋巴細胞轉(zhuǎn)化為CTL，實現(xiàn)高效、特異性多重激活細胞免疫和體液免疫，最終通過殺滅被ASFV感染細胞實現(xiàn)阻斷ASFV的胞內(nèi)復(fù)制[66]。

2.3.5 降低全身毒副作用 傳統(tǒng)疫苗ASF疫苗的副作用較大，將大大影響該疫苗的有效研發(fā)，利用納米生物材料能夠參與免疫過程的免疫佐劑的轉(zhuǎn)運，可以將免疫抗原與佐劑安全有效富集在特定的細胞或是組織上，包括TLRs激動劑和細胞因子等，從而有利于協(xié)同ASF抗原發(fā)揮免疫效率[67]。該類抗原通過納米載體的轉(zhuǎn)運，最大程度地減少抗原或佐劑的全身傳播和分布，降低毒副作用[68]。

3 展望

ASF是由ASFV引起的急性動物傳染病，是危害全世界養(yǎng)豬業(yè)的頭號殺手，給全世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了沉重的打擊[69]。從長遠角度來看，高效、安全的疫苗已經(jīng)成為防御ASF的重要方式。在病毒感染的預(yù)防中，疫苗是防控傳染性疾病發(fā)生的重要措施，生產(chǎn)和使用安全有效的疫苗至關(guān)重要。目前，ASF疫苗存在誘導(dǎo)抗體水平低、安全性差等問題，達不到有效預(yù)防ASF的目的，導(dǎo)致有效的商業(yè)化疫苗還未出現(xiàn)。因此，尋求新的疫苗策略增強機體免疫反應(yīng)十分迫切。納米疫苗以其提高抗原生物利用度、靶向遞送抗原至APC、抗原交叉呈遞以及增強T細胞免疫反應(yīng)等特點被廣泛運用到疫苗領(lǐng)域。納米載體通過與多種ASF抗原的結(jié)合，能夠準確遞送至相對應(yīng)的細胞部位并引起體內(nèi)強烈的免疫效應(yīng)，從而平衡疫苗安全性和免疫原性之間的沖突。納米載體作為新型生物疫苗技術(shù)必將在預(yù)防傳染性疾病中發(fā)揮重要的作用，并為防控ASF提供了新的手段。將納米疫苗應(yīng)用在防控ASF上，不僅能豐富ASF疫苗的種類，還能加快ASF疫苗的研究進度，進而促進中國乃至世界養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。