王明周， 賴 婧， 陶沿竹， 龍立書， 敖芳芳， 白 明， 洪 猛， 陸安法

(貴州省銅仁市動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 銅仁 554300)

重大動物疫病的發(fā)生不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，還會嚴重威脅公共衛(wèi)生安全?？茖W制定重大動物疫病免疫程序并切實開展免疫接種，是防控重大動物疫病最有效的措施之一。及時對接種動物進行免疫抗體監(jiān)測，了解免疫抗體水平，評估免疫效果，為當?shù)卣峁┛茖W防疫決策具有重要意義[1，2]?？谔阋呤怯煽谔阋卟《?FMDV)引起偶蹄動物的急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床特征為口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰，易感動物主要有牛、豬、駱駝、羊、鹿等，我國列為一類動物疫病[3]。根據(jù)《2021年銅仁市動物疫病強制免疫方案》的規(guī)定，我市口蹄疫等重大動物疫病的群體免疫密度應(yīng)常年保持在100%，免疫抗體合格率常年保持在70%以上。銅仁市秋季動物疫病強制集中免疫在每年的9月初開始，至11月中旬結(jié)束，主要對高致病性禽流感、口蹄疫、小反芻獸疫、豬瘟、狂犬病進行1次強制免疫。為了評估2021年秋季銅仁市口蹄疫強制集中免疫的效果，特進行此次檢測，為科學防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集采用《獸醫(yī)流行病學調(diào)查與監(jiān)測抽樣技術(shù)手冊》[4]方法，預(yù)設(shè)95%置信水平、試驗敏感性100%、預(yù)定流行率10%，根據(jù)不同畜群分類采樣。2021年秋季防疫結(jié)束后，于11月中旬在銅仁市10個縣(區(qū))進行采樣，每個縣(區(qū))以規(guī)模養(yǎng)殖場為抽檢對象，隨機分類采樣豬、牛、羊養(yǎng)殖場各 1個，由各縣(區(qū))動物疫病預(yù)防控制中心完成本轄區(qū)內(nèi)樣品采集和送樣工作，市級動物疫病預(yù)防控制中心工作人員負責采樣工作的監(jiān)督指導(dǎo)。本次監(jiān)測共采集10個縣(區(qū))31個養(yǎng)殖場的血清樣品920份，其中豬血清330份、牛血清260份、羊血清330份。

1.2 主要儀器與試劑口蹄疫抗體檢測試劑盒(武漢科前生物股份有限公司，批號：20211207)、酶標儀(美國佰騰儀器有限公司，型號：800TS)、恒溫箱(上海喬躍電子有限公司，型號：DHP-90328)。

1.3 檢測方法按照《口蹄疫診斷技術(shù)》(GB/T 18935—2018)，采用固相競爭ELISA方法進行O型口蹄疫抗體檢測。檢測方法嚴格按照說明書進行：取抗原包被板(根據(jù)樣品多少可拆開分次使用)，加入稀釋好的洗滌液300 μL，無需靜置，甩掉孔中洗滌液，重復(fù)洗板2次，最后1次在吸水材料上拍干。將稀釋好的待檢血清、陰性對照、陽性對照各取50 μL加入到抗原包被板孔中，待檢血清設(shè)1孔，陽性對照和陰性對照各設(shè)2孔，然后加入酶標記物50 μL至各反應(yīng)孔中，置37 ℃溫育30 min。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液300 μL，無需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復(fù)洗板5次，最后1次在吸水材料上拍干。每孔加入底物顯色液100 μL，置室溫(20～25 ℃)避光顯色15 min。每孔加入終止液50 μL，10 min內(nèi)在酶標儀上測定各孔的D450 nm值。

1.4 結(jié)果判定及統(tǒng)計分析試驗成立條件：陰性對照D450 nm平均值與陽性對照D450 nm平均值之差≥0.5。 判定標準：S為樣品孔D450 nm值，N為陰性對照D450 nm平均值，計算樣品S/N值。如果S/N≤0.5，樣品判為陽性；如果S/N>0.5，樣品判為陰性。檢測數(shù)據(jù)運用軟件SPSS 25.0進行統(tǒng)計分析，卡方檢驗差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 家禽O型口蹄疫免疫抗體檢測結(jié)果由表1可見：2021年秋季銅仁市家畜O型口蹄疫免疫抗體樣品平均合格率為89.35%，其中豬為75.76%，牛為93.08%，羊為100%。不同畜種之間的免疫抗體水平存在顯著差異(P<0.05)，羊的抗體合格率顯著高于牛和豬，牛的抗體合格率顯著高于豬。場群平均合格率為90.32%，其中豬場81.82%、牛場88.89%、羊場100%。

表1 2021年秋季銅仁市家畜O型口蹄疫免疫抗體檢測統(tǒng)計

2.2 各縣(區(qū))O型口蹄疫免疫抗體比較由表2可見：碧江區(qū)、萬山區(qū)、印江自治縣、德江縣、沿河自治縣、思南縣的O型口蹄疫免疫抗體合格率均顯著高于石阡縣、江口縣、松桃自治縣、玉屏自治縣(P<0.05)；石阡縣的免疫抗體合格率最低(65.56%)，未達到國家規(guī)定≥70%的免疫標準。豬O型口蹄疫樣品檢測中，江口縣抗體合格率為45%，石阡縣為0%，均低于標準要求。全市羊O型口蹄疫免疫抗體合格率最高，均為100%。

表2 不同縣(區(qū))家畜O型口蹄疫免疫抗體統(tǒng)計

3 結(jié)論

2021年秋季銅仁市家畜O型口蹄疫的平均免疫抗體合格率達到國家規(guī)定≥70%的標準要求，其中豬為75.76%，牛為93.08%，羊為100%，基本達到預(yù)期的免疫效果。但江口縣和石阡縣的豬、松桃自治縣的牛免疫抗體合格率未達到規(guī)定要求，需及時進行排查補免。

4 討論

4.1科學免疫接種是防控重大動物疫病、保護易感動物最重要的措施之一，而評價免疫效果最常用的方法是進行免疫抗體監(jiān)測。國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定重大動物疫病防控“以集中免疫為原則，實時免疫為補充，實行預(yù)防為主，預(yù)防與控制、凈化、消滅相結(jié)合的方針”。在春、秋兩季集中免疫工作中，我市主管部門組織開展大規(guī)模疫苗接種活動，力求應(yīng)免盡免，以期總體達到群體免疫的基礎(chǔ)水平。本次監(jiān)測結(jié)果顯示銅仁市家畜口蹄疫免疫效果總體較好，基本達到了預(yù)期的目標。一是動物疫病防控主管部門和基層動物防疫員均高度重視飼養(yǎng)動物的免疫防控，深入穩(wěn)步推進“先打后補”免疫工作，調(diào)動了養(yǎng)殖主體的免疫積極性；二是每年定期開展《動物防疫法》等相關(guān)法律法規(guī)的學習培訓活動，從上到下強化各級動物防疫機構(gòu)的防疫監(jiān)督意識及養(yǎng)殖場(戶)的防疫主體意識；三是我市每年春、秋兩季均要定期組織人員深入養(yǎng)殖地進行動物疫病防控督查，對督查中存在問題的相關(guān)養(yǎng)殖場及縣、鄉(xiāng)(鎮(zhèn))動物防疫機構(gòu)進行通報，督促及時整改；四是近年來受全國非洲豬瘟疫情的沖擊，我市廣大養(yǎng)殖場(戶)明顯提高了動物疫病的防控意識，積極主動配合動物防疫部門進行免疫接種。

4.2本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)局部區(qū)域還存在一些問題，如：江口縣豬O型口蹄疫抗體合格率為45%，石阡縣甚至為0%，松桃自治縣牛O型口蹄疫抗體合格率為60%，均低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標準要求。分析原因：一是相關(guān)強制免疫監(jiān)督人員未監(jiān)督到位，有的養(yǎng)殖場沒有接種疫苗；二是疫苗在運輸保存過程中未按規(guī)定保存導(dǎo)致失效；三是在疫苗接種過程中接種劑量過小或接種部位不當。另外，從總體上看豬O型口蹄疫免疫抗體水平顯著低于牛和羊，且石阡縣、江口縣、松桃自治縣、玉屏自治縣的家畜免疫水平較低，提示各地區(qū)對O型口蹄疫的防控力度參差不齊，應(yīng)加強排查，對免疫抗體不合格的場及時進行補免。本次監(jiān)測由于人力、物力等資源有限，抽樣場數(shù)、樣品量較少，只能在一定程度上反映銅仁市家畜口蹄疫的免疫水平，在后期防控工作中應(yīng)實行口蹄疫免疫和排查常態(tài)化，結(jié)合實時抗體監(jiān)測，應(yīng)免盡免，不足補免，做到有效防控。