郭文靜，王德朝，林章興，周煜新，郭青龍

（中國藥科大學(xué)，江蘇省腫瘤發(fā)生與干預(yù)重點實驗室；天然藥物活性組分與藥效國家重點實驗室，江蘇 南京210001）

0 引言

前列腺癌(PCa)是男性中最常見的癌癥，統(tǒng)計結(jié)果表明早期局限性前列腺癌的發(fā)病率保持穩(wěn)定，但轉(zhuǎn)移性前列腺癌的發(fā)病率每年增加[1]。大約50%的PCa患者被診斷為轉(zhuǎn)移性前列腺癌，且原發(fā)性前列腺癌患者會較快進展到晚期。早期PCa的治療策略包括手術(shù)切除和雄激素剝奪療法(ADT)，但患者治療后1-2年便會產(chǎn)生耐藥并發(fā)生轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移性CRPC (mCRPC)目前沒有良好的治療方案，針對mCRPC藥物的開發(fā)依舊是前列腺癌治療的研究重點。免疫檢查點阻斷劑、腫瘤靶向抗體和腫瘤疫苗的開發(fā)對實體瘤的治療產(chǎn)生了重大影響，也為前列腺癌治療提供了新的思路。

B7-H3是一種在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮共刺激/共抑制雙重作用的免疫調(diào)節(jié)蛋白，已在多種癌癥中進行了廣泛研究。B7-H3的表達與腫瘤患者預(yù)后差、生存率低及治療后復(fù)發(fā)相關(guān)[2]。迄今為止，許多靶向B7-H3的免疫治療方案已在臨床前模型中展現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性和安全性[3]。B7-H3表達增加與PCa患者侵襲性癌癥、轉(zhuǎn)移和不良臨床結(jié)果的臨床病理學(xué)指標(biāo)相關(guān)[4,5]，且B7-H3的表達往往與雄激素信號傳導(dǎo)和免疫再激活有關(guān)[6]，能夠作為PCa診斷、預(yù)后評估和靶向治療標(biāo)志物[7]。本文綜述了B7-H3的結(jié)構(gòu)、分布及免疫和非免疫功能，總結(jié)了B7-H3在前列腺癌中的作用并將其作為治療前列腺癌的一種有效策略。此外，本文還總結(jié)了靶向B7-H3治療的研究成果，以期為前列腺癌治療提供新的理論依據(jù)。

1 B7-H3的結(jié)構(gòu)、分布及生物學(xué)功能

1.1 B7-H3的結(jié)構(gòu)

B7家族是控制免疫反應(yīng)的二級信號傳導(dǎo)機制之一，對于維持免疫激活和抑制之間的平衡至關(guān)重要。目前B7家族共有11個成員，包括B7-1（CD80）、B7-2（CD86）、B7-H1（PD-L1）、B7-DC（PD-L2）, B7-H2 (B7RP1,ICOS-L, CD275), B7-H3 (CD276), B7-H4 (B7x, B7S1,Vtcn1)等[8]。除調(diào)控T細(xì)胞活性外，B7家族成員也參與腫瘤發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移和藥物敏感性的調(diào)節(jié)[9]。

B7-H3分子是一種在15號染色體上編碼的有B7-H3a和B7-H3b兩種剪切體跨膜蛋白，B7-H3a的胞外段為IgV-IgC（稱為2IgB7-H3），而B7-H3b則為IgV-IgC-IgV-IgC（4IgB7-H3）。鼠和人B7-H3都包括2IgB7-H3，人和其他靈長類動物證實還具有4IgB7-H3 的區(qū)域結(jié)構(gòu)[10]。除了定位于細(xì)胞內(nèi)，B7-H3還能夠通過蛋白酶從膜上裂解并以可溶性2Ig-B7-H3的形式存在，可溶性B7-H3能夠與 B7-H3受體結(jié)合并發(fā)揮功能[11]。

1.2 B7-H3的表達及臨床意義

B7-H3 mRNA在各種正常組織中廣泛表達，但由于嚴(yán)格調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄后控制機制的存在，其蛋白質(zhì)表達在正常組織細(xì)胞中受到限制并維持在低水平。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測證實超過60%的患者腫瘤組織顯示出異常的B7-H3表達，其中腎細(xì)胞癌和血液系統(tǒng)惡性腫瘤的B7-H3表達頻率最低，而前列腺癌表達頻率高于50%[12]。B7-H3在人類實體瘤中的普遍過度表達通常與患者的不良預(yù)后和不良臨床結(jié)果相關(guān)[13]。此外，研究發(fā)現(xiàn)黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌以及肝癌轉(zhuǎn)移灶中均存在B7-H3過表達[14,15]，說明B7-H3可能成為腫瘤轉(zhuǎn)移治療的潛在靶點。

除腫瘤細(xì)胞外，B7-H3也可以在免疫細(xì)胞上誘導(dǎo)表達。在粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或脂多糖（LPS）的刺激下，B細(xì)胞、T細(xì)胞、單核細(xì)胞或NK細(xì)胞中B7-H3被誘導(dǎo)表達。正常巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞一起培養(yǎng)時也可被誘導(dǎo)表達B7-H3，樹突細(xì)胞（DC）與調(diào)節(jié)性T (Treg) 細(xì)胞共培養(yǎng)可以上調(diào)DCs上B7-H3的表達[16]。B7-H3 也存在于成纖維細(xì)胞、成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞中，可能在調(diào)節(jié)組織的生長和分化中發(fā)揮多種作用[17]。B7-H3在腫瘤細(xì)胞和部分淋巴細(xì)胞中的過表達暗示其可能在腫瘤發(fā)展和免疫調(diào)節(jié)中起重要作用，是腫瘤免疫治療的一個有前景的重要靶點。

1.3 B7-H3的生物學(xué)功能

1.3.1 免疫抑制

在免疫應(yīng)答期間，初始T細(xì)胞與T細(xì)胞受體（TCR）結(jié)合提供T細(xì)胞激活的第一信號。第一信號往往不足以觸發(fā)完整的激活過程，此時需要通過共刺激分子的作用提供第二信號來完全活化T細(xì)胞。激活后，共抑制分子會起到抑制T細(xì)胞的作用。B7配體家族成員和CD28受體之間的相互作用提供T細(xì)胞的共刺激和共抑制。

B7-H3是一種共刺激/共抑制分子，Chapoval等最初研究B7-H3分子功能時發(fā)現(xiàn)B7-H3可共刺激CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，增加CTL的活性，還可以選擇性刺激IFN-γ、IL-8 及TNF-α的分泌[18]。然而隨著研究的深入，有實驗證明B7-H3可以抑制Treg細(xì)胞，從而使腫瘤逃逸免疫反應(yīng)，其機制可能與T細(xì)胞表面受體調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的三個主要信號通路，NFAT、NFkB和AP-1因子相關(guān)。目前大多數(shù)研究普遍表明B7-H3主要對人和鼠的T淋巴細(xì)胞具有負(fù)調(diào)節(jié)作用，能夠抑制T輔助細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的增殖并減少IL-2和IFNγ的產(chǎn)生。B7-H3作用的差異可能與存在于不同的免疫細(xì)胞上的不同受體有關(guān)。

1.3.2 促進腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移

B7-H3除了免疫逃逸途徑外，還通過多種途徑促進腫瘤進展。研究發(fā)現(xiàn)B7-H3 的表達與腫瘤細(xì)胞增殖呈正相關(guān)。在宮頸癌、食管癌、口腔癌和結(jié)直腸癌中，敲除B7-H3抑制了腫瘤細(xì)胞增殖，而恢復(fù)B7-H3的表達將促進細(xì)胞增殖[19-21]。B7-H3能夠激活PI3K/AKT，促進未成熟腫瘤細(xì)胞從G1期過渡到S期，導(dǎo)致細(xì)胞周期限制解除[22]。此外，B7-H3與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。B7-H3能夠通過Jak2/Stat3/Slug信號通路靶向上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)來刺激腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[23]，通過與轉(zhuǎn)移相關(guān)的CXCR4促進胃癌細(xì)胞遷移和侵襲[24]，通過Jak2-Stat3信號通路促進膀胱癌細(xì)胞、CRC和卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲[25,26]。B7-H3的沉默降低了黑色素瘤細(xì)胞的遷移潛力和基質(zhì)膠侵襲性[27]。

1.3.3 促進腫瘤耐藥

B7-H3與多種腫瘤的放射抗性和化學(xué)抗性有關(guān)。在結(jié)直腸癌細(xì)胞中，放療后B7-H3的表達明顯增加，B7-H3的表達增強促進細(xì)胞活性、集落形成，減少了腫瘤細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡[28]。此外，B7-H3還可通過PI3K-AKT通路和Stat3信號通路在增強CRC細(xì)胞對奧沙利鉑和五氟尿嘧啶的抗性[29]。在卵巢癌中，B7-H3表達誘導(dǎo)PI3K/AKT信號通路激活，上調(diào)BCL-2蛋白水平從而導(dǎo)致化療耐藥[30]。B7-H3的敲低則通過DUSP10介導(dǎo)的p38 MAPK失活的機制增加了黑色素瘤細(xì)胞對達卡巴嗪(DTIC)和順鉑的敏感性[31]。在乳腺癌中，B7-H3誘導(dǎo)與Jak2/Stat3通路相關(guān)的紫杉醇耐藥[32]。

1.3.4 促進血管生成

B7-H3在肝癌細(xì)胞中通過 PI3K/AKT/MMPs通路促進血管生成擬態(tài)(VM)形成[33]。VEGF家族及其受體在啟動和促進腫瘤血管生成方面發(fā)揮著復(fù)雜的作用，B7-H3通過激活NF-κB 通路上調(diào)VEGF表達和血管生成，敲低B7-H3的結(jié)直腸癌細(xì)胞顯著抑制血管形成，而B7-H3的過表達則具有相反的作用[34]。

1.3.5 調(diào)節(jié)腫瘤代謝

葡萄糖代謝失調(diào)在惡性腫瘤中普遍存在。在結(jié)直腸癌細(xì)胞中，B7-H3的過表達通過Stat3信號傳導(dǎo)促進己糖激酶2(HK2)表達，增加了葡萄糖消耗和乳酸生成，而敲除B7-H3則具有相反的效果[35]。在轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞中B7-H3可通過PI3K/AKT/mTOR通路調(diào)節(jié)HIF-1α及其下游靶點Glut1和PFKFB3，從而增強糖酵解并促進細(xì)胞增殖[36]。

除糖酵解外，B7-H3也與脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)有關(guān)。在肺癌中，B7-H3通過 SREBP-1/FASN信號通路介導(dǎo)脂質(zhì)代謝異常[37]。這一發(fā)現(xiàn)為B7-H3在腫瘤代謝中的作用和機制提供了新的見解。

2 B7-H3在前列腺癌中的作用

2.1 參與抑制性腫瘤微環(huán)境形成

近年來，免疫檢查點阻斷劑、腫瘤靶向抗體和癌癥疫苗的開發(fā)對實體瘤的治療產(chǎn)生了重大影響。2010年，針對前列腺酸性磷酸酶(PAP)的個性化癌癥疫苗Sipuleucel-T成為首個獲得FDA批準(zhǔn)的mCRPC免疫療法，并于幾項PCa臨床試驗中在改善總生存期和誘導(dǎo)免疫反應(yīng)方面顯示出臨床益處，強調(diào)了免疫療法在前列腺癌治療中的優(yōu)勢[38]。

免疫療法是一種新的個體化治療方法。免疫反應(yīng)的激活和抑制主要由B7家族與其受體CD28家族之間的相互作用產(chǎn)生，缺乏共刺激B7分子使腫瘤逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)管，而抑制性B7分子的增強表達可保護它們免受活化的T細(xì)胞殺傷。B7-H3是前列腺癌中表達最高的B7家族成員，并且與臨床結(jié)果最密切相關(guān)，與抗CTLA-4和抗PD-1治療相比，阻斷B7-H3可能具有降低免疫相關(guān)不良事件的優(yōu)勢[39]。越來越多的研究報道，PCa進展的主要原因是腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的缺陷和免疫功能的抑制[40]。B7-H3與PCa微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)存在關(guān)聯(lián)。TAM可驅(qū)動PCa耐藥并促進腫瘤逃逸、轉(zhuǎn)移、侵襲、組織重塑和上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，PCa微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞密度越高，預(yù)后越差。B7-H3在PCa中顯著上調(diào)，誘導(dǎo)抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素10 (IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)上調(diào)，抑制細(xì)胞群Tregs的浸潤增加，有助于抑制性微環(huán)境的形成和腫瘤細(xì)胞免疫逃逸[41]。開發(fā)B7-H3抗體改善前列腺癌抑制性微環(huán)境從而增強免疫治療效果是一個不錯的思路。

2.2 促進前列腺癌轉(zhuǎn)移

前列腺癌是全球男性人群中最常見的惡性腫瘤，也是癌癥相關(guān)死亡最常見的原因之一。使用組織微陣列切片進行免疫組織化學(xué)研究B7-H3在前列腺癌臨床樣本中的表達后發(fā)現(xiàn)B7-H3在93%的腫瘤樣本中存在過表達，前列腺癌中B7-H3的表達水平與侵襲性癌癥的病理指標(biāo)以及臨床結(jié)果相關(guān)，還與Gleason評分正相關(guān)[42]。在轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者中，高B7-H3表達也與高死亡率相關(guān)[43]。B7-H3的過表達與較少的CD8+T腫瘤浸潤顯著相關(guān)[44]。體外研究也證實B7-H3能夠促進前列腺癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移[45]。臨床研究還發(fā)現(xiàn)在前列腺癌中B7-H3表達與AR表達呈正相關(guān)，并且與腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)[46]。B7-H3 mRNA表達水平也與較高的Gleason評分、腫瘤分期和去勢抵抗性轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)[47]。以上研究證實B7-H3可作為前列腺癌中一個有前景的治療靶點。

3 靶向B7-H3的腫瘤治療方案

3.1 抗體

Enoblituzumab是一種一種抗B7-H3人源化單克隆抗體，通過針對有效抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)實現(xiàn)抗腫瘤功能。目前，I期研究正在包括前列腺癌在內(nèi)的高表達B7-H3的難治性腫瘤患者中進行，初步結(jié)果表明Enoblitzumab作為單一療法顯示出了較好的抗腫瘤活性[48]。

目前正在Ⅰ/Ⅱ期試驗中測試的MGC018是一種可有效載荷多卡霉素的人源化B7-H3mAb，通過特異性靶向高表達B7-H3的細(xì)胞將多卡霉素遞送至腫瘤部位[49]。

DS-7300a由B7-H3特異性mAb與四種拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑顆粒結(jié)合組成，目前正在 I/II 期試驗 (NCT04145622) 中進行測試[50]。

DS-5573a是一種非巖藻糖基化人源化抗B7H3 IgG1抗體，具有B7-H3依賴性ADCC和抗體依賴性的效力細(xì)胞吞噬（ADCP）活性，在具有低分化乳腺癌的腫瘤異種移植小鼠模型中顯示出顯著的抗腫瘤功效[51]。與放射性配體 (Zirconium-89) 綴合的DS-5573a 衍生物已被開發(fā)用作臨床研究中的分子成像探針，以測量不同腫瘤中B7-H3的表達[52]。

MAB 376.96 是另一種抗B7-H3單克隆抗體，可識別分化的卵巢癌細(xì)胞和化療耐藥腫瘤細(xì)胞上B7-H3的表達。體外研究表明，Mab 376.96與酪氨酸激酶抑制劑舒尼替尼聯(lián)用可顯著抑制腫瘤生長[53]。

雙特異性抗體 (BsAbs)利用與抗CD3mAbscFv連接的B7-H3 mAbscFv來募集和激活針對腫瘤細(xì)胞的T細(xì)胞代表了另一種B7-H3靶向方式。Orlotamab (MGD009)是一種靶向B7-H3和CD3的單抗。目前，正在對B7-H3過表達的轉(zhuǎn)移性腫瘤患者進行I期劑量遞增研究。帶有放射性標(biāo)記的Orlotamab，如131I-Omburtamab和124I-Omburtamab（NCT01502917）也 在 進 行 試驗。研究發(fā)現(xiàn)與活化的T細(xì)胞 (ATC) 結(jié)合的 B7-H3Bi-Ab 顯著增強了IFN-γ、TNF-α和IL-2的產(chǎn)生，對包括前列腺癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌在內(nèi)的多種人類腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。體內(nèi)實驗也證明B7-H3Bi-Ab 組裝的ATC顯著抑制腫瘤生長并延長生存期[54]。

3.2 B7-H3-嵌合抗原受體 (CAR) T 細(xì)胞療法

CAR-T 療法指將患者的T細(xì)胞經(jīng)過基因改造以特異性識別腫瘤相關(guān)抗原。嵌合抗原受體是一種融合蛋白，由靶向腫瘤抗原的單克隆抗體的表位結(jié)合位點與T細(xì)胞受體的共刺激和信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域相連。有研究構(gòu)建了靶向B7-H3的CAR-T細(xì)胞并發(fā)現(xiàn)B7-H3 CAR T細(xì)胞顯著抑制腫瘤生長，且無明顯毒副作用，B7-H3 CAR-T 療法的抗腫瘤免疫活性已在一系列血液瘤和實體瘤中得到證實[55-57]。B7-H3 CAR-T細(xì)胞的作用取決于腫瘤表面靶抗原的密度，而表達低水平抗原的細(xì)胞的活性則顯著降低。腫瘤組織中B7-H3表達水平的增加為 B7-H3 CAR-T 細(xì)胞作為腫瘤治療提供了潛力。

3.3 協(xié)同療法

隨著傳統(tǒng)免疫療法的成功，通過不同療法的組合來提高治療效果和患者生存率的聯(lián)合療法越來越受到關(guān)注。最近的研究表明，多種化療藥物與檢查點抑制劑的組合發(fā)揮了巨大的協(xié)同作用，增強了它們在標(biāo)準(zhǔn)臨床實踐中的充分利用前景。B7-H3阻斷與化療或靶向治療藥物之間也可能存在潛在的協(xié)同效應(yīng)。新開發(fā)的抗B7-H3/PD-1 雙特異性融合蛋白可以同時結(jié)合腫瘤相關(guān)標(biāo)志物B7-H3和免疫抑制配體PD-L1并增強ADCC以促進有效和高選擇性的腫瘤殺傷[58]。B7-H3基因沉默聯(lián)合藥物治療也可以提高腫瘤消除率，研究發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中B7-H3-shRNA顯著增強了腫瘤細(xì)胞的藥物敏感性[59]。

4 小結(jié)與展望

本文概述了B7-H3的結(jié)構(gòu)、功能以及與腫瘤進展的關(guān)系。B7-H3不僅可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，促進抑制性免疫微環(huán)境的產(chǎn)生，還能夠通過多種途徑調(diào)控細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及代謝。針對B7-H3開發(fā)的治療方案已在臨床前及臨床試驗中表現(xiàn)出較好的效果，除了傳統(tǒng)的治療性抗體之外，小分子抑制劑也開始引起免疫腫瘤學(xué)領(lǐng)域的興趣。小分子抑制劑具有制造成本低廉、易于遞送、半衰期短等優(yōu)點，可以單獨或協(xié)同提供替代治療方式，以解決低臨床反應(yīng)和耐藥性問題，未來的研究應(yīng)繼續(xù)集中于發(fā)現(xiàn)具有不同化學(xué)類型和更高效力的新型小分子。

B7-H3與前列腺癌轉(zhuǎn)移以及去勢耐藥相關(guān)，可用于前列腺癌患者的診斷和預(yù)后標(biāo)記，但對B7-H3在前列腺癌中的作用及機制的研究還較少，將B7-H3作為前列腺癌治療的潛在靶點進行藥物開發(fā)值得關(guān)注。