張建軍

（烏蘭察布市動物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 烏蘭察布 012000）

牛結(jié)核桿菌病在世界各地均有發(fā)生，具有上千年的歷史，曾經(jīng)造成人和動物大批死亡，1882年發(fā)現(xiàn)其致病原是結(jié)核分枝桿菌。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）報道，全球每年新增有800～1 000萬的結(jié)核病人，導(dǎo)致死亡的約300萬人，因此，被OIE列為B類動物疫病。目前，世界上發(fā)生結(jié)核病最多的國家是印度，而我國活動性肺結(jié)核病人也有500多萬，屬于高負擔(dān)國家之一，排名世界第二。

20世紀50年代，我國曾發(fā)生過牛結(jié)核病的大流行，當(dāng)時抽樣檢測其陽性率高達36.4%，報道一出，立即受到極大關(guān)注，各部門積極采取有效措施，經(jīng)過長期努力，使結(jié)核病陽性率大大降低。在隨后的兩次全國對奶牛進行流調(diào)，結(jié)果顯示牛結(jié)核病的陽性率均在5%～6%。目前，我國的養(yǎng)牛大省發(fā)生牛結(jié)核病的概率正呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，目前均已高達9%，有些地區(qū)比例更高。因此，做好牛結(jié)核病的宣傳與了解至關(guān)重要。本文重點介紹了牛結(jié)核病的臨床癥狀、剖檢變化、診斷方法與防控措施，以期為廣大養(yǎng)殖戶提供理論支持。

1 病 原

結(jié)核分枝桿菌分三個型：牛型、人型和禽型。牛結(jié)核病主要由牛型結(jié)核分枝桿菌引起，也可由人型結(jié)核分枝桿菌引起。牛型結(jié)核分枝桿菌可感染人，也能使其他家畜致病。禽型結(jié)核分枝桿菌可感染牛、豬和人。人型結(jié)核分枝桿菌屬于細長桿菌，有直的，有微彎的，有些有分枝，一般單獨或者多個平行排列；牛型結(jié)核分枝桿菌相比會短而粗，不均勻著色；禽型結(jié)核分枝桿菌相比會小而短，且形態(tài)不一，多變。

結(jié)核分枝桿菌最適生長溫度為37～38℃，牛型結(jié)核分枝桿菌最適生長pH為5.9～6.9；人型結(jié)核分枝桿菌最適生長pH較高，一般為7.4～8.0；禽型結(jié)核分枝桿菌最適生長pH為7.2。結(jié)核分枝桿菌常用齊-尼二氏抗酸染色，染色后較難脫色，會被染成紅色。結(jié)核分枝桿菌非?！皯卸琛?，生長非常緩慢，需要經(jīng)半個月才能長出菌落，長出典型的菌落，呈現(xiàn)出粗糙型，此種菌群毒力強，也有變異菌株菌落，變異菌株菌落則呈光滑型，相比較毒力較粗糙型要弱。

結(jié)核分枝桿菌對自然界的抵抗力很強，尤其是對干燥、濕冷的抵抗力很強。據(jù)報道，在干燥的痰液中結(jié)核分枝桿菌能存活10個月，在土壤中7個月后仍然存活，在糞便中5個月后依然存活，在奶中90 d后依然存活，在冷藏奶油中可存活10個月，在干酪中可存活8個月。在-198℃可長期存活。但面對濕熱和陽光直射，其抵抗力大大降低，特別是陽光直射的情況下，幾分鐘至幾小時可使之死亡。濕熱情況下，如沸水中立即死亡。常用的消毒藥如10%漂白粉、75%乙醇、氯胺、4%甲醛溶液、石碳酸等均可將其殺死。

牛分枝桿菌在細胞內(nèi)生長發(fā)育可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，無內(nèi)毒素產(chǎn)生，同時也無外毒素產(chǎn)生，其毒力主要和脂質(zhì)有關(guān)，含量越高，毒力越強。

2 流行病學(xué)

開放型患畜是牛結(jié)核病主要傳染源，病畜通過痰液、糞尿、乳汁和生殖器官的分泌物排出，健康動物通過被污染的空氣、飼料、飲水經(jīng)呼吸道、消化道等途徑感染。如飼養(yǎng)環(huán)境較差，如圈舍擁擠、通風(fēng)不良、飼養(yǎng)管理較差、營養(yǎng)不良等情況，會增加其患病率。此外，還可以通過直接接觸、飲用牛奶等途徑而傳染給人，威脅人體健康。此病全年各季節(jié)均可發(fā)病。

據(jù)報道，哺乳動物中約有50多種、禽類中約有20多種可患結(jié)核病[1]，其中包括牛、豬、鹿、猴、馬、綿羊、山羊、家禽等。

3 臨床癥狀

牛結(jié)核病的潛伏期長短不一，有時達數(shù)月以上甚至數(shù)年之久。通常病初無明顯癥狀，很難發(fā)現(xiàn)，當(dāng)病程逐漸延長，病癥才逐漸顯露。主要臨床癥狀為咳嗽、消瘦、呼吸困難，體溫?zé)o變化。人型分枝桿菌和禽型分枝桿菌對牛毒力較弱，多為“無病灶反應(yīng)?！保朔N牛極少有傳染性。

結(jié)核分枝桿菌侵入機體后，由于其毒力和動物機體抵抗力情況不同，以及發(fā)病部位不同，癥狀也不同。牛結(jié)核病多侵害肺臟、乳房、腸道、生殖器、腦和淋巴結(jié)等。

肺結(jié)核：病牛病初無明顯癥狀，但是易疲勞，常發(fā)生短促干咳，漸變?yōu)闈裥钥人?，?dāng)患病牛吸入冷空氣或者含有較多灰塵的空氣時，更容易發(fā)生咳嗽。聽診肺部區(qū)域會有啰音，如若胸膜發(fā)生結(jié)核病變，可聽到摩擦音，又稱之為“珍珠病”。隨著病情進一步加重，咳嗽頻次增加，并表現(xiàn)出明顯的痛苦癥狀，呼吸次數(shù)逐漸增加，嚴重時會出現(xiàn)氣喘現(xiàn)象。隨著病情的發(fā)展，病牛會日漸消瘦且伴有貧血。

淋巴結(jié)核：對于淋巴結(jié)核，均會發(fā)生在發(fā)病部位臨近淋巴結(jié)。常發(fā)部位有肩前、腹前、腹股溝、頜下、咽及頸部等，淋巴結(jié)腫大，但無熱感，觸之無痛。如果縱隔淋巴結(jié)受到侵害，則會引起慢性瘤胃臌氣。如果病情無法控制，極易發(fā)生粟粒性結(jié)核，即為全身性淋巴結(jié)結(jié)核。

乳房結(jié)核：乳房淋巴結(jié)腫大，觸之無熱痛。初期乳汁無明顯變化，隨病情發(fā)展乳汁日漸稀薄，泌乳量逐漸減少甚至無乳，若發(fā)生混合感染乳汁中會有膿塊。

腸結(jié)核：犢牛多發(fā)，常表現(xiàn)消化不良、食欲不振、便秘與下痢交替出現(xiàn)，動物快速消瘦。

生殖器結(jié)核：生殖器結(jié)核多引起性機能紊亂，母牛發(fā)情頻繁，性欲增強。對于妊娠母畜，常引發(fā)流產(chǎn)。對于公牛，常導(dǎo)致附睪腫大，陰莖前部發(fā)生結(jié)節(jié)、糜爛等。

腦結(jié)核：表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如癲癇、運動障礙等。

4 病理變化

牛發(fā)生結(jié)核病，在發(fā)病部位多形成突起、散在白色或灰白色的、粟粒大至豌豆大、半透明且堅硬的結(jié)核結(jié)節(jié)。切面干酪化壞死、鈣化，切開有沙礫感。乳房結(jié)核多見大小不等的病灶，內(nèi)有干酪樣物質(zhì)。胸腹膜發(fā)生結(jié)核，會形成密集結(jié)節(jié)，像極了散落的珍珠，故又被稱為“珍珠病”。腸道黏膜會形成潰瘍以及大小不等的結(jié)核結(jié)節(jié)。子宮黏膜下組織或肌層組織內(nèi)也會發(fā)生結(jié)節(jié)、潰瘍，且子宮腔含有油樣膿液，卵巢腫大，輸卵管變硬[1]。

5 診斷

因本病無特異癥狀，僅憑借臨床檢查很難確診。若動物出現(xiàn)進行性消瘦、咳嗽、慢性乳房炎、淋巴結(jié)慢性腫大、頑固性腹瀉等癥狀時，結(jié)合以上臨床癥狀，根據(jù)流行病學(xué)、病理剖檢變化可做出初步診斷，確診則需要通過實驗室檢測完成。目前國內(nèi)外實驗室大多采用細菌學(xué)方法、分子生物學(xué)方法以及免疫學(xué)方法確診。

5.1 細菌學(xué)檢查法

在臨床上，對于開放性結(jié)核病，最有診斷意義的方法要數(shù)細菌學(xué)檢查法，此法雖為傳統(tǒng)方法，但是臨床意義重大。但由于工序繁多、耗時較長、檢測率較低，已被取代。采集病料，例如病變部位、痰液、糞便、乳汁及其他分泌物，不同的病料需要采用不同的處理方法，如采取病牛痰液，首先加入2倍安替佛尼液，然后置于溫箱1～2 h，離心取沉淀，再用3%醋酸溶液中和沉淀物，用純化水反復(fù)洗滌；對于病牛糞便，稱取30 g，加入15 mL安替佛尼液和55 mL純化水，靜置2～3 h，離心沉淀30 min[2]。取沉淀用棉拭子蘸取，涂片、鏡檢，可見外形呈棍狀，沒有芽孢和莢膜。將病原體分離培養(yǎng)并接種于實驗動物進行感染試驗[3]。

5.2 分子生物學(xué)方法

分子生物學(xué)診斷方法具有快速、簡單、分辨率高等特點，不但可以鑒別診斷，還可以按照分枝桿菌種系進化的關(guān)系確定精確的種系?，F(xiàn)行的特異性分子生物學(xué)診斷方法有聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）、基因芯片、DNA探針檢測等。目前，應(yīng)用比較多的有NDA探針、PCR檢測。

5.2.1 DNA探針檢測

DNA探針法屬于快速檢測法，不但可以檢測病原，還可以檢測其菌株。檢測操作簡單，樣品不需特殊處理，只需將樣品DNA與已知的標(biāo)記好的DNA片段探針進行分子雜交，檢測樣品DNA中已經(jīng)標(biāo)記好的基因序列即可[3]。

5.2.2 PCR檢測

PCR檢測法是最近幾年應(yīng)用比較多的方法，此法需要根據(jù)基因設(shè)計特定引物，擴增目的片段，對擴增片段進行檢測，與結(jié)核病原菌基因組對比從而確診。PCR檢測快速，正確率高，不足之處是對試驗儀器精密度要求高，影響因素較多，檢測結(jié)果的可靠性受外界影響大[3]。

5.3 免疫學(xué)方法

5.3.1 結(jié)核菌素試驗

結(jié)核菌素試驗法是最具現(xiàn)實意義的方法，也是OIE推薦的檢測方法。結(jié)核菌素試驗包括兩種診斷法，分別是提純結(jié)核菌素（PPD）和老結(jié)核菌素（OT）。大多數(shù)檢測方法用的是PPD試驗[4-5]。

OT：根據(jù)我國現(xiàn)行《奶牛結(jié)核病檢疫規(guī)程》規(guī)定，在臨床上需要采用結(jié)核菌素皮內(nèi)注射法和點眼法兩種方法同時進行，如若兩種方法中的任意一種顯示陽性，即判定該牛為結(jié)核菌素陽性[4-5]。

PPD：診斷過程中，用純化水將牛分枝桿菌提純菌素稀釋成10萬IU·mL-1，在牛頸部中上1/3處，皮內(nèi)注射0.1 mL[4-5]。

5.3.2 間接酶聯(lián)免疫吸附法

間接酶聯(lián)免疫吸附試驗利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)，使其能夠快速診斷，整個試驗用時少，特異性強，操作簡便，目前應(yīng)用較廣。但是由于此法對抗原性較弱的病原菌在共同的抗原決定簇作用下，檢出效果較差，限制了其應(yīng)用[3]。

6 防控與治療

對于防控牛結(jié)核病，主要采取綜合防控。首先，防止病畜傳入。其次，如群體中有患病動物，則需凈化牛群。第三，培育健康牛群。無結(jié)核病動物群稱為健康牛群，對于此類牛群，平時應(yīng)加強飼養(yǎng)管理，特別是平時的防疫、檢疫和消毒措施，防止牛結(jié)核病的傳入。健康牛群每年的春、秋兩季定期進行結(jié)核菌素檢疫，并結(jié)合臨床檢查進行分析[2-4]。

一旦檢測到陽性，需要立即采取措施，對整個牛群按污染牛群對待。對于結(jié)核菌素反應(yīng)陽性牛群，應(yīng)按照規(guī)定定期檢查，一旦發(fā)現(xiàn)病牛立即淘汰，從而消滅傳染源。對于病牛所產(chǎn)犢牛，出生后3～5 d可以飼喂初乳，3～5 d后，立即由無病的母牛，即代養(yǎng)母牛供養(yǎng)或人工喂養(yǎng)。犢牛在出生后需要做3次檢疫，分別是1月齡、3～4月齡、6月齡三個階段，一旦檢測結(jié)果呈陽性，必須進行及時淘汰[2,4]。如果3次檢疫結(jié)果均呈陰性，且無任何可疑臨床癥狀，可定為假定健康牛。假定健康向健康過渡的牛，應(yīng)每隔3個月檢疫一次，檢測一年，直到無陽性結(jié)果為止。然后在接下來的半年內(nèi)連續(xù)進行3次檢疫[2-4]。如果3次檢測結(jié)果均為陰性則可稱為健康牛群[2,4]。

對于患有牛結(jié)核病動物的治療，目前應(yīng)用較多的是鏈霉素、異煙胼和對氨水楊酸鈉，但治療起來療程較長，醫(yī)療費用大，且很難根治，只能有所改善，故目前國內(nèi)外均采取加強檢疫、隔離、及時淘汰、防止疾病傳入的方式[6]。

7 結(jié)語

牛的結(jié)核病有著重要的公共衛(wèi)生價值，對牛結(jié)核病的臨床癥狀、剖檢變化和臨床診斷及防治方法的研究對養(yǎng)殖業(yè)有重大影響，各專業(yè)學(xué)者需要積極研究，給養(yǎng)殖業(yè)提供一個更好的養(yǎng)殖環(huán)境，從而促進經(jīng)濟的發(fā)展。