寧 煒

（山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山西太原 030000）

近年來(lái)，隨著社會(huì)快速發(fā)展，廣大人民群眾的生活水平有了很大的提高，對(duì)許多中成藥和保健品的需求量越來(lái)越大[1-4]。保健食品是適宜于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能，不以治療疾病為目的的食品[5-6]。某些不法商家受利益驅(qū)使，在保健食品中添加化學(xué)藥物，消費(fèi)者在不知情的情況下服用，會(huì)對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害[7-8]。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件2009030 詳細(xì)規(guī)定了抗疲勞、增強(qiáng)免疫力類保健食品中非法添加紅地那非等11 種化學(xué)藥物的檢測(cè)方法[9-10]。試驗(yàn)以此為依據(jù)，以綠源程海螺旋藻片為樣品進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠源程海螺旋藻片，麗江格林斯通食品有限公司提供（批號(hào)：20130102）；乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純），DikmaPure 提供；三乙胺，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所提供；磷酸（分析純），北京化工廠提供；實(shí)驗(yàn)室用水為超純水；其他化學(xué)試劑均為分析純，廣州化學(xué)試劑廠提供。

11 種非法添加物：伐地那非鹽酸鹽（純度99.2%）、偽伐地那非（純度99.5%）、豪莫西地那非（純度99.2%）、氨基他達(dá)拉非（純度99.9%）、那莫西地那非（純度99.9%）、西地那非鹽酸鹽（純度100%）、他達(dá)拉非（純度99.7%）、那紅地那非（純度99.8%）、紅地那非（純度99.7%）、羥基豪莫西地那非（純度99.8%）、硫代艾地那非（純度99.5%），均由TLC Pharmachem.Inc 提供。

1.2 儀器與設(shè)備

儀器：Waterse 2695 高效液相色譜儀HPLCBSP-01；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，波長(zhǎng)230 nm；色譜柱：C18色譜柱250 mm×4.6 mm，5 μm；流動(dòng)相：A：磷酸三乙胺溶液；B：甲醇-乙腈=1∶7；C：磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈=8∶46∶46；流速1.0 mL/min ；柱溫35 ℃。

儀器條件見(jiàn)表1。

表1 儀器條件

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

（1）伐地那非鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確稱取0.011 67 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（2）偽伐地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.013 52 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（3）豪莫西地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.014 73 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（4）氨基他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.017 43 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（5）那莫西地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.013 45 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（6）西地那非鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.014 85 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（7）他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.014 48 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（8）那紅地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.014 45 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（9）紅地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.014 25 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（10）羥基豪莫西地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.014 21 g，置于25 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

（11）硫代艾地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。稱取0.012 24 g，置于25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別吸取上述溶液各1 mL置于25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。

分別準(zhǔn)確吸取不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，將其稀釋成質(zhì)量濃度分別為0.2，0.5，1.0，2.0，10.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在上述色譜條件下，取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

在1.2 和1.3.1 條件下，依次進(jìn)樣10 μL 進(jìn)行分析，在1.0～50.0 ng/mL 線性范圍內(nèi)，以目標(biāo)化合物的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以質(zhì)量濃度（X，ng/mL）為橫坐標(biāo)，通過(guò)Multiquant 軟件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

11 種非法添加違禁藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表2。

表2 11 種非法添加違禁藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

由表2 可知，在1.0～50.0 ng/mL 線性范圍內(nèi)，各物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 精密度試驗(yàn)

對(duì)經(jīng)檢測(cè)不含非法添加化學(xué)藥物的空白樣品（紅牛維生素功能飲料）進(jìn)行精密度試驗(yàn)，取適量樣品，置于50 mL 量瓶中，加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。

精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表3 可知，該方法精密度良好。

2.2.2 重復(fù)性試驗(yàn)

取適量樣品研細(xì)，稱取2 g 樣品6 份，分別置于50 mL 量瓶中，加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。精密量取上述溶液各10 μL 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)及檢出限和定量限的測(cè)定

取適量樣品研細(xì)，稱取2 g 樣品9 份，分別置于50 mL 量瓶中，加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。

加標(biāo)回收率試驗(yàn)及檢出限和定量限的測(cè)定見(jiàn)表5。

表5 加標(biāo)回收率試驗(yàn)及檢出限和定量限的測(cè)定

結(jié)果表明11 種非法添加化學(xué)藥物的回收率介于87.16%～116.91%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.02%～2.10%（n=6），滿足日常檢測(cè)的要求。

2.3 樣品檢測(cè)

取適量樣品研細(xì)，稱取2 g，樣品3 份，分別置于50 mL 量瓶中，加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。按照1.3 所示試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)樣品中有試驗(yàn)所選的11 種非法添加物存在。

3 結(jié)論

對(duì)選取的保健食品樣品進(jìn)行了包括線性、精密度、重復(fù)性、回收率、檢出限、定量限在內(nèi)的方法學(xué)驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果均符合要求，證明該方法適用于抗疲勞、增強(qiáng)免疫力類保健食品中非法紅地那非等11 種化學(xué)藥品的篩查和定量檢測(cè)，樣品中未檢出非法添加物成分。雖然試驗(yàn)所選樣品中未檢出非法添加物，但不能保證市售其他中成藥及保健食品中不存在化學(xué)藥物的非法添加情況，廣大患者需謹(jǐn)慎使用保健產(chǎn)品，建議購(gòu)買正規(guī)知名廠家產(chǎn)品，對(duì)于服后立即見(jiàn)效的產(chǎn)品需警惕化學(xué)藥物的加入，同時(shí)相關(guān)執(zhí)法部門需加大、加重對(duì)非法添加行為的打擊力度，凈化市場(chǎng)環(huán)境，促進(jìn)中藥類等保健品行業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展，保證老百姓安全。