管 鑫 索德成 肖志明 王 石 馮玉超 梁 英 樊 霞*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，北京100081；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，大慶163000)

氯苯那敏(chlorphenamine)，俗稱撲爾敏，化學(xué)名為3-(4-氯苯基)-N,N-二甲基-3-吡啶-2-基丙-1-胺；溴苯那敏(brompheniramine)，化學(xué)名為3-(4-溴苯基)-N,N-二甲基-3-吡啶-2-基丙-1-胺，是氯苯那敏的溴代同系物。溴苯那敏與氯苯那敏具有相似結(jié)構(gòu)，二者同為第一代的H1組胺受體拮抗劑[1]，功能性質(zhì)也類似。近50年來，該類藥物被用于治療多種過敏反應(yīng)，如花粉熱、慢性鼻竇炎/鼻炎以及上呼吸道咳嗽綜合征[2-3]等。其中，氯苯那敏因與常規(guī)局麻藥具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，同樣對(duì)心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有相似的毒性，故也可用作局麻藥[4]。在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中，氯苯那敏具有緩解高致病性豬藍(lán)耳病臨床癥狀[5]，穩(wěn)定低致病性禽流感患雞血液中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板數(shù)量和紅細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)[6]，以及治療狂犬病免疫過程中免疫犬過敏癥狀[7]等功效，此外一些研究也發(fā)現(xiàn)二者還具有提高雞等家禽采食量、日增重以及促進(jìn)動(dòng)物生長等作用[8-9]。而同時(shí)，有大量研究顯示，氯苯那敏和溴苯那敏具有一定的潛在毒副作用，服用該類藥物可引起嗜睡、呼吸頻率降低等癥狀[10]，嚴(yán)重者還可導(dǎo)致急性中毒，甚至死亡[11-12]。動(dòng)物采食添加了含氯苯那敏和溴苯那敏的飼料后，可使其蓄積在組織中，而人類食用具有氯苯那敏和溴苯那敏殘留的動(dòng)物組織則會(huì)產(chǎn)生上述不良反應(yīng)。因此，迄今為止，氯苯那敏和溴苯那敏尚未被列入飼料中允許使用的藥物范圍。但在利益驅(qū)使下，一些養(yǎng)殖者將其添加在飼料中飼喂動(dòng)物，以提高動(dòng)物采食量、增加體重及促進(jìn)生長[13]，給飼料和畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全帶來了一定程度的潛在隱患。

目前，檢測氯苯那敏或溴苯那敏的方法主要是液-質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法[13-17]、高效液相色譜(HPLC)法[18-24]等。Bachute等[18]建立了反相高效液相色譜法同時(shí)測定片劑中4種活性藥物含量的方法，其中氯苯那敏加標(biāo)回收率為98.61%～101.30%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.17%；劉凱雙等[20]研究復(fù)方金剛烷胺氨基比林片中氯苯那敏的測定方法，其回收率為99.42%～101.70%，RSD為0.84%，該方法可用于檢測低含量氯苯那敏；郭倩倩等[24]使用高效液相色譜法測定復(fù)方鋅布顆粒劑中氯苯那敏的含量，其中氯苯那敏的平均回收率為100.1%，RSD為0.49%，該方法定量限為11.80 μg/kg。

現(xiàn)有檢測方法涉及的對(duì)象以原料藥、血液、動(dòng)物組織為主[25-31]，而對(duì)于飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的定量分析方法鮮有報(bào)道，缺少相關(guān)的檢測方法。由于飼料的復(fù)雜基質(zhì)干擾是影響方法靈敏度和穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素，所以對(duì)其進(jìn)行凈化處理是精確測定被測物質(zhì)含量必不可少的一步。固相萃取(SPE)技術(shù)利用固體吸附劑將液體樣品中的被測物質(zhì)吸附，讓被測物質(zhì)與干擾物質(zhì)分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離和富集被測物質(zhì)的目的[32]?；诖耍驹囼?yàn)系統(tǒng)研究了飼料中氯苯那敏和溴苯那敏提取和凈化技術(shù)，建立了利用混合型陽離子固相萃取柱(MCX)結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)測定飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的高效、靈敏定量分析方法，為監(jiān)測飼料中非法添加氯苯那敏和溴苯那敏的行為提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AB SCIEX QTRAP?6500+型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國SCIEX公司)：配備電噴霧電離源(ESI源)。氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)品(純度>98%)購自德國Dr. Ehrenstorfer公司；甲酸(色譜純，德國Sigma公司)；乙腈和甲醇(色譜純，美國Fisher ChenAlert Guide公司)；其他試劑均為分析純?cè)噭?，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。試驗(yàn)用水為經(jīng)Milli-Q純化制備的一級(jí)水(>18.2 MΩ)。0.22 μm尼龍濾膜(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；Oasis HLB固相萃取柱、Oasis MCX固相萃取柱、Oasis MAX固相萃取柱(美國Waters公司)；C18固相萃取柱(天津博納艾杰爾科技有限公司)。不同基質(zhì)飼料樣品由國家飼料質(zhì)量檢驗(yàn)檢測中心(北京)提供，并按試驗(yàn)設(shè)計(jì)制備，具有充分的代表性。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1)混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)品各5 mg(精確至0.01 mg)，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，制備氯苯那敏和溴苯那敏含量為500 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

2)混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取2.0 mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，配制成10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液逐級(jí)稀釋，配制成濃度為1.0～100.0 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，該標(biāo)準(zhǔn)系列溶液需臨用現(xiàn)配。

1.2.2 樣品前處理

精確稱取飼料樣品5 g，加入20 mL 1%甲酸乙腈溶液，渦旋振蕩提取30 min，于10 000 r/min條件下離心5 min，取上清液備用。MCX固相萃取柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化，然后準(zhǔn)確移取上清液5 mL過柱，之后依次加入3 mL水和3 mL甲醇淋洗，抽干，最后用5%氨水甲醇溶液3 mL洗脫，收集洗脫液，于40 ℃下氮?dú)獯蹈?。?zhǔn)確加入1 mL 0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液溶解殘余物，混勻后過0.22 μm濾膜，上液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。

1.3 色譜和質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters BEH C18柱(100 mm×3.0 mm, 1.7 μm)；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相流速：0.4 mL/min，流動(dòng)相組成及洗脫梯度見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

質(zhì)譜采用電噴霧電離源(ESI+)，多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式；噴霧電壓為3.2 kV；離子源溫度為350 ℃；氣簾氣為空氣、碰撞氣為氮?dú)?，使用前調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，分段采集，溴苯那敏和氯苯那敏質(zhì)譜條件見表2。

表2 溴苯那敏和氯苯那敏質(zhì)譜條件

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

配制100 ng/mL氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)溶液，以微流量泵直接進(jìn)質(zhì)譜，進(jìn)行質(zhì)譜條件的優(yōu)化。由于正離子比負(fù)離子響應(yīng)強(qiáng)度高，所以采用ESI+模式的測定。通過一級(jí)全掃描質(zhì)譜得到氯苯那敏和溴苯那敏的母離子[M+H]+為質(zhì)荷比(m/z)275.2、m/z 319.1；通過子離子掃描得到二級(jí)質(zhì)譜，分別選擇m/z較大、強(qiáng)度較穩(wěn)定的2組m/z 167.2、m/z 230.2(氯苯那敏)和m/z 274、m/z 167.1(溴苯那敏)共4個(gè)碎片作為子離子；其中子碎片275.2/167.2(氯苯那敏)、319.1/274.0(溴苯那敏)的響應(yīng)強(qiáng)度最強(qiáng)且背景干擾小，所以選為定量離子對(duì)，另2個(gè)子碎片275.2/230.2(氯苯那敏)、319.1/167.1(溴苯那敏)組成定性離子對(duì)。在MRM模式下，進(jìn)一步優(yōu)化了上述2對(duì)離子對(duì)的去簇電壓(DP)和碰撞電壓(CE)，結(jié)果見表2。

2.2 色譜條件優(yōu)化

本研究通過對(duì)出峰時(shí)間、分離效果、峰形和靈敏度等因素分別考察了水(A)-乙腈(B)、0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)、5 mmol/L甲酸銨(A)-乙腈(B)以及5 mmol/L甲酸銨-0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)作為流動(dòng)相時(shí)的梯度洗脫效果。結(jié)果顯示：在相同的梯度洗脫條件下，0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)作為流動(dòng)相時(shí)，采用0.4 mL/min的流速，洗脫效果更好，具體流動(dòng)相組成及洗脫梯度見表1。在上述條件下，氯苯那敏和溴苯那敏在該色譜柱上的保留時(shí)間分別為2.10、2.25 min，氯苯那敏和溴苯那敏MRM色譜圖如圖1所示。

2.3 提取試劑選擇

試驗(yàn)以配合飼料為對(duì)象，研究了1%甲酸乙腈溶液、甲醇∶乙腈∶水(10∶80∶10，v/v/v)溶液、1%鹽酸溶液、乙腈、甲醇等5種提取溶劑對(duì)氯苯那敏和溴苯那敏的提取效果，稱取10份5 g飼料樣品，分別加入5種提取劑20 mL，按1.2.2的步驟操作，結(jié)果見圖2。

從圖2可以看出，選取1%甲酸乙腈溶液和乙腈作為提取溶劑對(duì)飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏具有很好的提取效果，兩者的提取效率在90%～95%。而甲醇∶乙腈∶水(10∶80∶10，v/v/v)溶液、1%鹽酸溶液、甲醇的提取效率較低，通過對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，回收率均在60%以下，說明飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏提取不完全。

2.4 固相萃取柱的優(yōu)化

2.4.1 固相萃取柱的選擇

試驗(yàn)比較了4種市售的HLB、MCX、MAX、C18固相萃取柱對(duì)飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的凈化效果。先對(duì)4種固相萃取柱進(jìn)行活化處理：加入3 mL甲醇，待甲醇流出后，再加入3 mL水。然后將提取離心后的上清液加入固相萃取柱中，每個(gè)小柱10 mL，待樣液全部流出后，依次加入3 mL水和甲醇淋洗固相萃取柱，最后MCX用3 mL 5%氨水甲醇溶液洗脫，MAX用3 mL 1%甲酸甲醇溶液洗脫，C18、HLB固相萃取柱用3 mL甲醇洗脫，各收集洗脫液氮吹至近干，用0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液溶解定容至1 mL，上機(jī)檢測，結(jié)果見圖3。

圖1 氯苯那敏和溴苯那MRM色譜圖

誤差線為3次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差。下圖同。

從圖3可以看出，經(jīng)過MCX固相萃取柱凈化后，飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏具有很好的回收率，在100%左右。而HLB、MAX、C18固相萃取柱的回收率較低，回收率都在50%以下，證明其對(duì)氯苯那敏和溴苯那敏并未完全吸附。

2.4.2 洗脫試劑的優(yōu)化

根據(jù)前人研究，氨水甲醇是MCX固相萃取柱的最佳洗脫試劑[33]。所以本試驗(yàn)研究了不同比例的氨水甲醇對(duì)氯苯那敏和溴苯那敏的洗脫效果，按照上述操作，洗脫時(shí)用不同比例的氨水甲醇進(jìn)行洗脫，最終上機(jī)檢測，結(jié)果見圖4。

從圖4可以看出，5%氨水甲醇洗脫效果最好，飼料中的氯苯那敏和溴苯那敏具有很好的回收率，在100%左右。甲醇幾乎沒有洗脫效果，其他比例的氨水甲醇，雖然也有不錯(cuò)的回收率，但效果不如5%氨水甲醇顯著。

圖3 不同固相萃取柱對(duì)凈化效果

圖4 不同洗脫試劑的洗脫效果

2.4.3 洗脫溶液用量的優(yōu)化

作為洗脫溶劑，用量的選擇是一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，因此，試驗(yàn)評(píng)估了1.0～5.0 mL 5%氨水甲醇溶液對(duì)飼料中氯苯那敏和溴苯那敏的洗脫效果。結(jié)果見圖5。

從圖5可以看出，使用1 mL洗脫液就能較好地將氯苯那敏和溴苯那敏淋洗下來，回收率達(dá)到82%；2 mL幾乎可以將全部氯苯那敏和溴苯那敏淋洗下來，回收率達(dá)到96%；3 mL可以將MCX固相萃取柱上的氯苯那敏和溴苯那敏完全洗脫下來。因此，本研究最終選擇3 mL為MCX固相萃取柱的洗脫液用量。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)

由于不同飼料樣品的組成十分復(fù)雜，LC-MS/MS檢測氯苯那敏和溴苯那敏時(shí)基質(zhì)干擾非常明顯，所以基質(zhì)效應(yīng)的校正必不可少。取不同飼料樣品進(jìn)行前處理(1.2.2)，以此基質(zhì)提取液作稀釋液配制1、5、10、20、50、100 ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，與直接用0.1%甲酸∶乙腈(90∶10，v/v)溶液配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)比，大部分氯苯那敏和溴苯那敏表現(xiàn)為基質(zhì)抑制。為消除基質(zhì)效應(yīng)，本試驗(yàn)繪制氯苯那敏和溴苯那敏基質(zhì)效應(yīng)圖進(jìn)行校正，結(jié)果見圖6。

圖5 不同洗脫體積的洗脫效果

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程、方法檢出限和定量限

在上述優(yōu)化條件下，取空白基質(zhì)溶液將氯苯那敏和溴苯那敏配制成包含定量限在內(nèi)的由低到高6個(gè)濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，其質(zhì)量濃度分別為1、5、10、20、50、100 ng/mL，經(jīng)LC-MS/MS測定分析，以定量離子色譜峰面積與基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)定量離子色譜峰的信噪比(S/N)=3為檢出限(LOD)，S/N=10為定量限(LOQ)，得出LOD和LOQ，結(jié)果見表3?；|(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液在1.0～100.0 ng/mL的線性關(guān)系良好；方法檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1 μg/kg，能夠滿足飼料中氯苯那敏和溴苯那敏含量的分析需要。

2.7 回收率試驗(yàn)和精密度考察

精密稱取配合飼料、預(yù)混合飼料與濃縮飼料樣品各5 g，然后添加不同含量的氯苯那敏和溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成1、10、100 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)的樣品，按上述方法進(jìn)行檢測，每個(gè)樣品6個(gè)重復(fù)，連續(xù)重復(fù)3 d，計(jì)算平均回收率、批內(nèi)及批間變異系數(shù)。由表4可知，在1、10、100 μg/kg添加濃度下，平均回收率為85.8%～108.4%，RSD小于15%。

2.8 實(shí)際樣品測定

通過建立的上述方法對(duì)市場上采集的30份不同類型的飼料樣品進(jìn)行檢測，在30份飼料樣品中有2份樣品檢出氯苯那敏，分別為預(yù)混合飼料(2.37×104μg/kg)和配合飼料(12.58 μg/kg)，其余飼料樣品均未檢出氯苯那敏和溴苯那敏。

圖6 氯苯那敏和溴苯那敏基質(zhì)效應(yīng)圖

表3 基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)

表4 不同飼料中添加氯苯那敏、溴苯那敏的回收率及精密度

3 討 論

3.1 流動(dòng)相的選擇

以氯苯那敏和溴苯那敏的分離為主要指標(biāo)，同時(shí)兼顧分析檢測時(shí)間和色譜圖基線平穩(wěn)情況，選用了乙腈、甲醇[28-31]作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲醇作為有機(jī)相出峰時(shí)間較晚且峰形拖尾嚴(yán)重，因此選擇了乙腈作為流動(dòng)相；也對(duì)不同水相(水、5 mmol/L甲酸銨溶液、5 mmol/L甲酸銨-0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸溶液)進(jìn)行考察，通過不斷摸索優(yōu)化，最終確定本試驗(yàn)的水相為0.1%甲酸溶液。雖然氯苯那敏和溴苯那敏色譜圖部分沒有完全分離，但由于二者的定量離子對(duì)完全不同，因此并不影響對(duì)飼料中氯苯那敏和溴苯那敏精確定量分析。

3.2 提取

文獻(xiàn)介紹，使用甲醇、乙腈對(duì)人血和中成藥樣品中氯苯那敏和溴苯那敏進(jìn)行提取具有較高的提取效率[15,27]，但對(duì)于飼料樣品，根據(jù)圖2結(jié)果可知，甲醇對(duì)其提取效率較低，回收率在30%以下，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是飼料基質(zhì)復(fù)雜，甲醇將飼料中的其他干擾物質(zhì)也過多溶出，使提取液中干擾物質(zhì)增多，從而影響了氯苯那敏和溴苯那敏的定量檢測；同理甲醇∶乙腈∶水(10∶80∶10，v/v/v)溶液可能也使干擾物質(zhì)增多，最終影響了檢測結(jié)果；1%鹽酸溶液由于其酸性過強(qiáng)，在飼料提取過程中，可對(duì)飼料中一些物質(zhì)的結(jié)構(gòu)造成破環(huán)，從而造成干擾物質(zhì)劇增，嚴(yán)重影響回收率；1%甲酸乙腈溶液和乙腈在對(duì)氯苯那敏和溴苯那敏的提取過程中，表現(xiàn)出良好的提取效果，提取效率達(dá)90%以上，為最佳提取液。綜合分析發(fā)現(xiàn)，氯苯那敏和溴苯那敏在弱酸性條件下保留效果較好，且上機(jī)檢測過程中還可以增強(qiáng)電離信號(hào)，故最終選擇1%甲酸乙腈溶液作為提取溶劑。

前人研究表明，通過加入緩沖鹽來提高分析物的回收率[34-35]。本研究加入不同種類緩沖鹽(醋酸鈉、無水硫酸鈉、硼砂-碳酸鈉、磷酸二氫鉀)與1%甲酸乙腈溶液共同提取氯苯那敏和溴苯那敏，觀察其對(duì)回收率的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和未加入緩沖鹽的試驗(yàn)比較，回收率幾乎沒有明顯影響，為了降低對(duì)儀器的不利影響，因此沒有加入緩沖鹽。

3.3 凈化

飼料樣品成分多種多樣，富含大量礦物質(zhì)、維生素、蛋白質(zhì)等，選擇合適的凈化方式是精確定量分析氯苯那敏和溴苯那敏至關(guān)重要的一步[36]。SPE是目前較為熱門的凈化方法，與傳統(tǒng)的基質(zhì)分散固相萃取方法相比，SPE具有凈化效果好、回收率高、溶劑消耗量小、操作簡單、省時(shí)省力等優(yōu)點(diǎn)[37]。本試驗(yàn)選擇了市售的4種固相萃取柱，對(duì)氯苯那敏和溴苯那敏進(jìn)行凈化處理，結(jié)果見圖3，只有MCX對(duì)其展現(xiàn)出良好的凈化效果。造成HLB、C18、MAX回收率低的原因可能是其對(duì)酸性物質(zhì)有較好的選擇性，而氯苯那敏和溴苯那敏呈現(xiàn)弱堿性；MCX是將磺酸基鍵合在高度交聯(lián)的PS/DVB表面得到的混合型強(qiáng)陽離子交換吸附劑，有反相和強(qiáng)陽離子交換雙重保留性能，對(duì)堿性物質(zhì)氯苯那敏和溴苯那敏有良好的選擇性和靈敏度，所以MCX比HLB、C18和MAX表現(xiàn)出了更加優(yōu)越的分離富集性能，顯著降低了基質(zhì)干擾，因此，本試驗(yàn)選擇了對(duì)目標(biāo)氯苯那敏和溴苯那敏具有高效吸附作用的MCX。

為了得到更好的回收率，本試驗(yàn)對(duì)洗脫試劑同樣進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膬?yōu)化處理，結(jié)果見圖4。甲醇在MCX凈化過程中對(duì)氯苯那敏和溴苯那敏幾乎沒有洗脫效果，而加入氨水之后，回收率顯著提升，究其原因，MCX作為具有反相和強(qiáng)陽離子交換作用的凈化柱，氨水提供了強(qiáng)效的陽離子供應(yīng)，為氯苯那敏和溴苯那敏的洗脫提供了充足的動(dòng)力。但是過高或者過低濃度的氨水會(huì)使其回收率降低，分析原因，過低濃度的氨水不能提供足夠的陽離子，導(dǎo)致洗脫不完全；而過高濃度的氨水則是由于其高濃度會(huì)影響氯苯那敏和溴苯那敏的穩(wěn)定性，導(dǎo)致回收率降低。

3.4 方法性能

目前關(guān)于飼料中氯苯那敏和溴苯那敏同步檢測的研究尚未見報(bào)道，由于飼料成分復(fù)雜，形式多樣，因此，常規(guī)的提取凈化方法會(huì)造成基體干擾，需要進(jìn)一步優(yōu)化提取、凈化的方法；此外，在檢測技術(shù)方面，現(xiàn)有的檢測技術(shù)雖穩(wěn)定、可靠，但在分析復(fù)雜樣品時(shí)，其靈敏度和選擇性還有諸多不足，如郭倩倩等[24]使用HPLC測定氯苯那敏的定量限僅為11.8 μg/kg；谷亦平等[38]使用HPLC測定氯苯那敏的定量限更是達(dá)到58.09 μg/kg；甚至如果僅僅依靠LC可能會(huì)出現(xiàn)靈敏度低、容易出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。LC-MS/MS選擇性和特異性好，檢出限低，近年來是研究抗組胺藥物的熱門方向，因此本試驗(yàn)采用LC-MS/MS進(jìn)行檢測，其方法檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，更為靈敏；且加標(biāo)飼料樣品中不同添加濃度(1、10、100 μg/kg)氯苯那敏和溴苯那敏的平均回收率為85.8%～108.4%，RSD<15%，這說明本試驗(yàn)所建LC-MS/MS方法與相關(guān)報(bào)道方法的回收率沒有顯著差別，在一定水平上滿足飼料中非法添加物質(zhì)檢測的回收率要求，表明了新建立的方法具有較高的準(zhǔn)確性和精密度。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)通過對(duì)提取溶劑、凈化等前處理?xiàng)l件及LC-MS/MS分析條件的優(yōu)化，建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同步檢測飼料中氯苯那敏和溴苯那敏含量的方法。氯苯那敏和溴苯那敏含量在1.0～100.0 ng/mL線性關(guān)系良好，方法檢出限為0.3 μg/kg，定量限為1.0 μg/kg，回收率為85.8%～108.4%，RSD小于15%。該方法前處理操作簡單，試劑材料消耗量小，靈敏度高，結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確，在實(shí)際應(yīng)用中更具有優(yōu)勢。