楊元鳳 ，熊高才，黎豫川，羅玉玲，張敬杰

(1貴州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550003；2貴州省第三人民醫(yī)院，貴州 貴陽 550000；3貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽 550025)

據現有資料顯示，腎病的種類較多，如慢性腎功能衰竭證、原發(fā)性腎病綜合癥、繼發(fā)性腎病及糖尿病腎病等[1]，其中慢性腎功能衰竭是由多種因素引起的進行性、不可逆的功能性損害，據統計，慢性腎功能衰竭預后較差，不僅危及患者生命，而且給全球衛(wèi)生保健帶來沉重的負擔[2]，因此尋找新的治療策略尤為重要。近年來中藥因其副作用小、療效好在治療慢性腎功能衰竭上被廣泛應用[3-4]。鹿苓安腎顆粒為貴州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院的協定處方，是根據慢性腎功能衰竭證屬氣陰虧虛型的證候擬方，主要由鹿血晶、茯苓、石斛、白術等藥物組成。且已有相關研究證實鹿血晶、茯苓、石斛、白術等在治療腎損傷或腎陰虧虛中均具有顯著的療效[5-10]。根據《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》[11]，在鹿苓安腎顆粒藥效研究的基礎上，對鹿苓安腎顆粒進行急性毒性實驗，觀察動物在接受過量鹿苓安腎顆粒所產生的的急性中毒反應，為鹿苓安腎顆粒的后續(xù)毒性實驗或臨床使用劑量提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF清潔級的Wistar大鼠20只，7～9周齡，雌雄各一半，體重為170～200 g，購買于北京維通利華實驗動物技術有限公司(生產許可證號為：SCXK(京)2021-0011)。大鼠生長環(huán)境為：12 h/12 h明暗交替，室溫為21～24℃，濕度為：40%～65%，分籠飼養(yǎng)，每籠1只大鼠。

1.2 實驗方法

1.2.1 鹿苓安腎顆粒的制備

茯苓、石斛、白術三味藥材，裝入2層滅菌過濾袋，加8倍量的水(第一次加水10.5倍)，浸泡1小時，煎煮2次，每次45 min，合并煎液，濾過。濾液常壓濃縮至相對密度為1.25～1.28(70℃)的浸膏，浸膏加入鹿血晶混勻后，與適量可溶性淀粉混合均勻，20目篩制粒，濕顆粒60 ℃干燥3 h，14目篩整粒，制成1000 g顆粒，即得。

1.2.2 急性毒性預實驗

按照半數急性毒性實驗要求先進行毒性實驗預實驗預測本品的致死量(LD50)。Wistar大鼠20只，標記，稱重，按體質量隨機分為鹿苓安腎顆粒組和空白對照組，每組雌、雄各半，禁食不禁水12 h后，給藥組以本品可供灌胃的最大濃度(0.5 g/mL)，大鼠灌胃可承受的最大體積(20 mL/kg)，給藥后自由進食和飲水，對照組給予等容積的蒸餾水，連續(xù)觀察14 d。實驗結束后根據每組動物死亡數量，查詢霍恩氏表(Horn氏)求得大鼠的半數致死量(LD50)及其95%可信區(qū)間。

在實驗過程中若大鼠未出現任何中毒癥狀或中毒癥狀不明顯，因該劑量遠大于中藥無毒劑量標準(LD50>50 g/kg)，則初步說明鹿苓安腎顆粒無毒副作用或毒副作用不明顯，此時可使用該劑量直接進行正式實驗。若大鼠出現中毒癥狀則需根據具體結果，重新設定給藥梯度。

1.2.3 急性毒性正式實驗

Wistar 大鼠20 只適應性飼養(yǎng)7 d后，隨機分為正常組與用藥組，每組10只，雌雄各半。用藥組每日間隔6 h分2次給予10 g/kg 鹿苓安腎顆粒灌胃，正常組給予等體積水灌胃，連續(xù)觀察14 d。

1.2.4 觀察指標

每天都對兩組大鼠稱重并記錄，包括進食量以及飲水量。

大鼠14 d觀察期結束后，摘除眼球取血，使用血常規(guī)分析儀對各組大鼠分別進行血常規(guī)白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細胞(LYM)的檢測。

1.2.5 統計方法

采用SPSS 22.3統計軟件進行數據處理，計量資料以均數±標準差(x±s)表示，組間數據比較采用單因素方差分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 急性毒性預實驗結果

大鼠灌胃給予鹿苓安腎顆粒后，觀察到用藥組和對照組大鼠活動均減少，30 min 內兩組大鼠均迅速恢復正常，飲食飲水正常，觀察期內無動物死亡，連續(xù)7 d 觀察中均未見不良反應，其背毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見異常；未見任何中毒癥狀，無動物死亡，提示本品的安全范圍較大。

2.2 鹿苓安腎顆粒對大鼠體質量的影響

如表1所示，雌性用藥組與雌性對照組比較、雄性用藥組與雄性對照組比較，不同時間的大鼠體質量差異均無統計學意義(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠體質量無影響。

2.3 鹿苓安腎顆粒對大鼠進食量的影響

由表2可見，用藥組與對照組比較，不同時間點雌、雄性大鼠體進食量均無明顯差異(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠進食量無影響。

2.4 鹿苓安腎顆粒對大鼠飲水量的影響

用藥組與對照組比較，各時間點雌、雄性大鼠體飲水量差異無統計學意義(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠飲水量無影響，見表3。

表1 鹿苓安腎顆粒急毒實驗對大鼠體質量的影響(x±s，g)Tab.1 Effect of Luling Anshen granule on body weight of rats

表2 鹿苓安腎顆粒急毒實驗對大鼠進食量的影響(x±s，m/g)Tab.2 Effect of Luling Anshen granule on food intake of rats

表3 鹿苓安腎顆粒急毒實驗對大鼠飲水量的影響(x±s，V/mL)Tab.3 Effect of Luling Anshen granule on water intake of rats

2.5 鹿苓安腎顆粒對大鼠血常規(guī)指標的影響

用藥組與對照組比較，雌、雄性大鼠體白細胞數(WBC)、紅細胞數(RBC)、血紅蛋白數(HGB)、血小板(PLT)以及淋巴細胞絕對值(LYM)差異無統計學意義(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠的血常規(guī)指標無影響，詳見表4。

表4 鹿苓安腎顆粒對大鼠血常規(guī)指標量的影響Tab.4 Effect of Luling Anshen granule on blood routine indexes of rats

3 討論

鹿苓安腎顆粒主要由鹿血晶、茯苓、白術、石斛等中藥組成，石斛又名仙斛蘭韻、不死草、還魂草，其中流蘇石斛是石斛的主要來源之一[8-9]，具益胃生津，滋陰清熱之功。石斛得鹿血晶則津液精血生化有源，鹿血晶得石斛則咸熱之性大減，養(yǎng)陰之力更強，為佐藥。白術有運脾燥濕、燥濕利水、化濁之效[12-13]，得茯苓則健脾功效更著，茯苓得白術又增利水滲濕之效，亦為佐藥，綜觀全方，彼此兼顧，互為輔助，相得益彰，共奏養(yǎng)陰生津、健脾益氣之功。鹿血晶、茯苓、白術、石斛等中藥具有廣泛的藥理作用，臨床應用前景廣闊，因此通過動物實驗開展鹿苓安腎顆粒的體內急性毒性研究，有利于產品的開發(fā)，以期為臨床鹿苓安腎顆粒的研究應用提供新的理論依據。

在本研究預實驗中，灌胃給予大鼠最大濃度的鹿苓安腎顆粒，發(fā)現在觀察期內各組大鼠均無死亡，且各組大鼠背毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見明顯異常，各組均未見不良反應和中毒癥狀，這提示鹿苓安腎顆粒的安全范圍較大。接著在急性毒性正式實驗中，我們連續(xù)兩周每天對各組大鼠體質量、進食量、飲水量以及血常規(guī)相關指標進行檢測，結果發(fā)現，用藥組與對照組比較，雌、雄性大鼠的體質量、進食量、飲水量以及白細胞數(WBC)、紅細胞數(RBC)、血紅蛋白數(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細胞絕對值(LYM)均無明顯差異，提示鹿苓安腎顆粒不影響大鼠體質量、進食量、飲水量以及血常規(guī)相關指標水平，表明鹿苓安腎顆粒無明顯的急性毒性反應，臨床使用的安全范圍較大。