李 慧 張金良

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0007～0010)

肝癌是一種發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤，早期無典型癥狀，待患者出現(xiàn)發(fā)熱、肝區(qū)疼痛、乏力等明顯癥狀時(shí)多已進(jìn)入中晚期，甚至發(fā)生多處轉(zhuǎn)移，直接威脅患者生命[1-2]。肝癌的治療原則在于早確診、早治療，以阻止腫瘤持續(xù)增殖或侵襲，延長患者生存時(shí)間。手術(shù)為主的綜合治療是治療肝癌的重要方案，能夠提高患者生存率，但臨床長期隨訪發(fā)現(xiàn)，仍有部分患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，臨床迫切需要尋找到新的分子靶點(diǎn)，以便于早期預(yù)測肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移，更好地改善患者預(yù)后[3-4]。細(xì)胞緊密連接蛋白1(CLDN1)為細(xì)胞緊密連接的骨架，能夠反映細(xì)胞緊密連接的強(qiáng)度及選擇性，且其表達(dá)存在較高組織特異性，在不同組織內(nèi)含量存在一定差異。相關(guān)研究顯示[5]，細(xì)胞緊密連接蛋白在腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移方面存在重要作用。Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)則為Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶家族新成員，能夠參與腫瘤基底細(xì)胞膜、細(xì)胞外基質(zhì)降解，與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移可能存在一定關(guān)系[6]。鑒于此，本研究分析CLDN1與TMPRSS4在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義，旨在為臨床提供參考。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至2022年3月我院收治的79例肝癌患者作為研究對象，研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。男性42例，女性37例；年齡42～71歲，平均年齡(56.89±5.14)歲；體質(zhì)量指數(shù)18.9～28.3 kg/m2，平均體質(zhì)量指數(shù)(24.19±1.75)kg/m2；Child-Pugh分級：45例A級，34例B級。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)病理確診為肝癌；采集標(biāo)本前未接受放化療；精神狀態(tài)正常；患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性肝癌；肝腎功能衰竭；合并其他惡性腫瘤；存在急慢性感染；存有凝血系統(tǒng)缺陷。

1.2 方法

所有肝癌患者均行手術(shù)為主的綜合治療，術(shù)中采集肝癌病理標(biāo)本，并相應(yīng)采集癌旁正常肝組織標(biāo)本作為參考。所有標(biāo)本均開展免疫組化法檢測：CLDN1：組織切片后于干燥箱內(nèi)烤片30 min，溫度設(shè)置為60 ℃，經(jīng)脫蠟及水化后，以PBS沖洗3 min，單次5 min，之后將玻片泡入抗原修復(fù)液內(nèi)，修復(fù)后PBS再次沖洗3次，單次5 min；以3%過氧化氫去離子水孵育10 min，PBS沖洗及時(shí)間同上；加入一抗，室溫下在濕盒內(nèi)孵育2 h，再次PBS沖洗；加入二抗，室溫下在濕盒內(nèi)孵育30 min，再次PBS沖洗；DAB染色，顯微鏡下觀察；自來水沖洗，經(jīng)蘇木精復(fù)染、脫水等處理后封片。TMPRSS4：切片經(jīng)檸檬酸鹽緩沖液微波抗原修復(fù)后，按TMPRSS4抗體工作濃度1∶100進(jìn)行一抗滴加，并于室溫下孵育60 min，經(jīng)PBS沖洗3次，單次5 min，再行二抗溫室孵育30 min，再次PBS沖洗后，DAB顯色，蘇木精對比染色后顯微鏡下觀察。結(jié)果判斷：每張切片隨機(jī)選擇10個高倍鏡視野，由高年資的病理科醫(yī)師進(jìn)行判斷；定量評分標(biāo)準(zhǔn)為：著色細(xì)胞比例<1/3為1分，著色細(xì)胞比例1/3～2/3為2分，著色細(xì)胞比例>2/3為3分；無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分；依據(jù)兩者評分之和進(jìn)行判定表達(dá)情況，陰性為0～3分，陽性為4分級以上。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)CLDN1與TMPRSS4表達(dá)情況：比較CLDN1與TMPRSS4在肝癌組織及癌旁組織內(nèi)表達(dá)情況。(2)CLDN1表達(dá)與臨床病理特征間關(guān)系：分析CLDN1表達(dá)與肝癌患者年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤大小、腫瘤分化、T分期、N分期、M分期、甲胎蛋白(AFP)水平間的關(guān)系。AFP于術(shù)前采集2組3 mL空腹靜脈血檢測。(3)TMPRSS4表達(dá)與臨床病理特征間關(guān)系：分析TMPRSS4表達(dá)與肝癌患者年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤大小、腫瘤分化、T分期、N分期、M分期、AFP水平間的關(guān)系。(4)CLDN1表達(dá)、TMPRSS4表達(dá)與預(yù)后關(guān)系：比較不同CLDN1表達(dá)、TMPRSS4表達(dá)肝癌患者3年生存率差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CLDN1與TMPRSS4表達(dá)情況

肝癌組織內(nèi)CLDN1陽性表達(dá)率、TMPRSS4陽性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組CLDN1與TMPRSS4表達(dá)情況對比(例，%)

2.2 CLDN1表達(dá)與臨床病理特征間關(guān)系

不同CLDN1表達(dá)肝癌患者腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 CLDN1表達(dá)與臨床病理特征間關(guān)系(例，%)

2.3 TMPRSS4表達(dá)與臨床病理特征間關(guān)系

不同TMPRSS4表達(dá)肝癌患者腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 TMPRSS4表達(dá)與臨床病理特征間關(guān)系(例，%)

2.4 CLDN1表達(dá)、TMPRSS4表達(dá)與預(yù)后關(guān)系

CLDN1陽性表達(dá)患者3年存活率為64.41%(38/59)，低于LDN1陰性表達(dá)患者的90.00%(18/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.741，P=0.030)；TMPRSS4陽性表達(dá)患者3年存活率為64.52%(40/62)，低于TMPRSS4陰性表達(dá)患者的94.12%(16/17)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.321，P=0.038)。

3 討論

肝癌病因復(fù)雜，與臨床遺傳、病毒性肝炎、重度飲酒等多種因素長期相互作用相關(guān)。肝臟為人體代謝重要器官，且血運(yùn)極為豐富，一旦發(fā)生病變不僅對機(jī)體正常代謝造成嚴(yán)重影響，腫瘤細(xì)胞也易發(fā)生轉(zhuǎn)移，造成受累器官功能障礙，降低整體生存率[7-8]。臨床對于肝癌多采取以手術(shù)為主的綜合方案進(jìn)行治療，先切除腫瘤組織，再輔以相應(yīng)抗癌手段，能夠最大限度清除體內(nèi)腫瘤細(xì)胞，避免術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移[9-10]。但長期隨訪發(fā)現(xiàn)，仍有部分患者預(yù)后偏差，還需尋找能夠良好預(yù)測預(yù)后的相關(guān)標(biāo)志物，為腫瘤治療提供指導(dǎo)。

CLDN家族與腫瘤存在密切關(guān)系，其主要作用為構(gòu)成緊密連接蛋白，從而隔離細(xì)胞內(nèi)部及環(huán)境，以維持結(jié)構(gòu)及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。CLDN1則為CLDN家族重要成員，臨床認(rèn)為當(dāng)CLDN1處于異常表達(dá)狀態(tài)時(shí)，可破壞細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)，使得細(xì)胞疏松，或引起細(xì)胞極性喪失，促使腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[11-12]。TMPRSS4則是一種較新的Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白，在小腸、腎、膀胱、食管等多種組織中均存在異常表達(dá)，且在乳腺癌、胰腺癌及甲狀腺癌等多種腫瘤組織內(nèi)存在高表達(dá)情況，提示TMPRSS4與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移可能存在一定關(guān)系[13-14]。隨著臨床深入研究發(fā)現(xiàn)，TMPRSS4處于高表達(dá)狀態(tài)時(shí)，可降低E-鈣黏蛋白表達(dá)，促使E-鈣黏蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間黏連喪失，從而加速上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，使得上皮細(xì)胞極性消失、標(biāo)志物表達(dá)丟失，從而增強(qiáng)遷移活動能力[15]。但臨床關(guān)于CLDN1、TMPRSS4在肝癌組織中的表達(dá)及意義尚未能夠明確。本研究結(jié)果顯示，肝癌組織內(nèi)CLDN1陽性表達(dá)率、TMPRSS4陽性表達(dá)率高于癌旁組織，不同CLDN1表達(dá)及不同TMPRSS4表達(dá)肝癌患者腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CLDN1陽性表達(dá)患者3年存活率低于CLDN1陰性表達(dá)患者，TMPRSS4陽性表達(dá)患者3年存活率低于TMPRSS4陰性表達(dá)患者。提示CLDN1、TMPRSS4在肝癌組織中呈高表達(dá)，且與腫瘤分期、腫瘤大小、分化程度存在密切關(guān)系，臨床或可以此為靶點(diǎn)進(jìn)行治療，以改善患者預(yù)后。其原因?yàn)镃LDN1、TMPRSS4高表達(dá)提示腫瘤生長、侵襲及轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，而腫瘤較大、腫瘤分期高、低分化程度則為腫瘤生長、侵襲及轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)的表現(xiàn)，故肝癌患者體內(nèi)CLDN1、TMPRSS4呈高表達(dá)。同時(shí)，一旦CLDN1、TMPRSS4呈高表達(dá)則提示腫瘤惡性程度高，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高，故預(yù)后普遍較差。

綜上所述，肝癌組織內(nèi)CLDN1、TMPRSS4呈高表達(dá)，其中腫瘤較大、腫瘤分期高群體陽性表達(dá)率更高，且CLDN1、TMPRSS4高表達(dá)患者預(yù)后較差，臨床需采取針對性干預(yù)措施，以提高整體生存率。