吳 濤 張瑞娜 劉倩男

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0042～0045)

流行病學(xué)調(diào)查顯示[1]，宮頸癌已經(jīng)成為育齡期婦女臨床死亡的重要的原因之一，我國的宮頸癌發(fā)病率在98/10萬，死亡率高達(dá)30.5/10萬。眾多研究顯示[2-3]，宮頸癌的發(fā)病與人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus,HPV)呈現(xiàn)顯著相關(guān)性，在病毒對機(jī)體的不斷侵染階段，HPV病毒的感染可能會造成機(jī)體免疫微環(huán)境以及炎性反應(yīng)的改變，間接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖以及進(jìn)展。在病毒對機(jī)體侵染的早期，機(jī)體可通過與病毒的免疫抑制性作用消除病毒，少數(shù)患者由于病毒的持續(xù)性增殖，可能會造成宮頸上皮細(xì)胞的癌變。而HPV高危亞型的持續(xù)性感染是造成患者癌前病變的重要原因[4]。通過對患者的HPV的早期篩查，對于患者的癌前病變的早期確認(rèn)具有重要意義。世界衛(wèi)生組織已經(jīng)明確，HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68的感染與癌前病變顯著相關(guān)，尤其以HPV16、18的感染為癌前病變的重要危險(xiǎn)因素[5]。本研究通過對女性HPV感染與宮頸癌前病變相關(guān)性研究，為臨床診斷提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采取前瞻性研究，以2019年1月至2020年12月進(jìn)行宮頸活檢的112例患者作為研究對象，年齡在25～49歲，平均年齡為(35.66±2.69)歲，體重指數(shù)平均為(24.55±5.69)kg/m2。對患者的宮頸組織細(xì)胞樣本進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)(1iquid based thin prepcytologytes，LCT)檢測，并對患者的HPV感染進(jìn)行分析。所有研究對象均簽署知情同意，同時通過我院倫理委員會論證。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集 使用棉簽于患者的宮頸口部位進(jìn)行逆時針刮取采樣，采樣取3次，停留時間為10 s，將樣本置于細(xì)胞保存液的收集瓶中進(jìn)行保存。

1.2.2 宮頸組織細(xì)胞樣本經(jīng)液基細(xì)胞學(xué)檢測 采用達(dá)城TCT檢測儀對以上樣本進(jìn)行檢測。將以上樣本進(jìn)行3500 r/min離心15 min后，使用樣本吸取機(jī)對樣本進(jìn)行混懸，隨后使用比重液對患者的以上混懸液繼續(xù)離心，使用樣本吸取機(jī)對富集于試管底部的細(xì)胞進(jìn)行收集，并在振蕩器的作用下，重新使細(xì)胞處于混懸狀態(tài)。將以上液體置于液基薄層細(xì)胞自動制片機(jī)中，隨后啟動染色系統(tǒng)，在液基薄層細(xì)胞自動制片機(jī)進(jìn)行巴氏染色，染色結(jié)束后，對以上玻片進(jìn)行二甲苯處理后，保證玻片的濕潤狀態(tài)，使用中性樹膠進(jìn)行封固。采用2001年的TBS細(xì)胞分類標(biāo)準(zhǔn)[6]，將患者分為無細(xì)胞學(xué)改變、炎性細(xì)胞反應(yīng)以及宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者。

1.2.3 HPV亞型診斷 采用PCR體外擴(kuò)增以及DNA芯片對以上樣本進(jìn)行HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亞型診斷。具體檢測方法為對以上樣本DNA進(jìn)行提取后，按說明書配置成20 μl反應(yīng)體系，95 ℃30 s進(jìn)行變性，37 ℃條件下行RT-PCR退火15 min，85 ℃的條件下維持15 s延伸后終止。在37 ℃條件下行RT-PCR 15 min，在85 ℃的條件下維持15 s后終止。使用DNA芯片對HPV亞型進(jìn)行診斷。

1.2.4 HPV DNA載量分析 采用實(shí)時定量PCR擴(kuò)增儀(廠家：上海透景宏石，型號SLAN-96s)實(shí)時熒光定量PCR方法對最大吸收波長為495 nm進(jìn)行HPV DNA載量的分析。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 不同HPV感染患者的宮頸病變情況 分別對無細(xì)胞學(xué)改變、炎性細(xì)胞反應(yīng)以及宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的HPV感染情況進(jìn)行比較。

1.3.2 不同宮頸病變患者的HPV感染亞型情況 分別對無細(xì)胞學(xué)改變、炎性細(xì)胞反應(yīng)以及宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的HPV亞型情況進(jìn)行比較。

1.3.3 不同宮頸病變患者的HPV感染亞型病毒載量 分別對無細(xì)胞學(xué)改變、炎性細(xì)胞反應(yīng)以及宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的HPV16、18、31、45的病毒載量之間的差異進(jìn)行比較。

1.3.4 宮頸CINⅠ～Ⅲ病變與HPV感染以及HPV16感染的相關(guān)性 采用spearman相關(guān)性分析，對宮頸CINⅠ～Ⅲ病變與HPV感染以及HPV16感染的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用[(n)%],表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸病變及HPV檢測結(jié)果

經(jīng)液基細(xì)胞學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，45例無細(xì)胞學(xué)改變，49例炎性細(xì)胞反應(yīng)，18例宮頸Ⅰ～Ⅲ病變。PCR檢測發(fā)現(xiàn)，22例HPV感染，其中15例HPV16感染、5例HPV18感染、2例其他。

2.2 不同HPV感染患者的宮頸病變分析

通過對不同HPV感染患者的宮頸病變分析，宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的HPV感染率顯著高于無細(xì)胞學(xué)改變、炎性細(xì)胞反應(yīng)患者(χ2=46.821，P=0.000)，見表1。

表1 不同HPV感染患者的宮頸病變分析(例，%)

2.3 不同宮頸病變患者的HPV感染亞型情況比較

通過對不同宮頸病變患者的HPV感染亞型情況比較，宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者主要以HPV16感染為主(χ2=46.821，P=0.000)，見表2。

表2 不同宮頸病變患者的HPV感染亞型情況比較(例，%)

2.4 不同宮頸病變患者的HPV感染亞型病毒載量分析

無細(xì)胞學(xué)改變與宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的HPV16的病毒載量之間的差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同宮頸病變患者的HPV感染亞型病毒載量分析

2.5 宮頸CINⅠ～Ⅲ病變與HPV感染以及HPV16感染的相關(guān)性

宮頸CINⅠ～Ⅲ病變與HPV感染以及HPV16感染呈現(xiàn)正相關(guān)，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 宮頸CINⅠ～Ⅲ病變與HPV感染以及HPV16感染的相關(guān)性

3 討論

宮頸癌是臨床婦科的一種常見腫瘤，發(fā)生于女性生殖系統(tǒng)，其發(fā)病率與病死率均較高[7]，據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)[8]，在發(fā)展中國家宮頸癌在女性惡性腫瘤的發(fā)病率中僅次于乳腺癌，死亡率僅次于乳腺癌與肺癌，我國每年新發(fā)病例約有10萬，占世界新發(fā)病例的1/5[9]。宮頸癌早期篩查可早期發(fā)現(xiàn)病例，積極治療，對于提高宮頸癌患者的生活質(zhì)量及生存率均具有重要意義[10]。在對患者的診斷過程中，人類乳頭狀病毒(HPV)的檢查是臨床早期鑒別宮頸病變患者的重要微生物之一，目前臨床發(fā)現(xiàn)的HPV病毒共計(jì)200多種亞型[11]，根據(jù)病毒的致病程度可將其分為低危型以及高危型，絕大多數(shù)HPV病毒均處于較低危狀態(tài)，其中至少有27種HPV病毒的感染存在潛在的致癌風(fēng)險(xiǎn)，可造成臨床惡性腫瘤的增生。臨床研究顯示，90%的宮頸癌均是由HPV病毒的持續(xù)性感染造成的[12]，而HPV16的感染率可高達(dá)40%～60%。HPV16是最為重要的HPV亞型，但是多數(shù)的研究顯示[13-14]，HPV病毒的感染呈現(xiàn)顯著的地域性，在我國的臨床分析中，HPV16感染與患者的宮頸鱗癌密切相關(guān)，HPV18的感染與宮頸腺癌相關(guān)。

本研究中，通過對患者的宮頸癌病變的HPV病毒感染情況分析，宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的HPV的感染率達(dá)到63.64%，與以往的研究一致[15]。宮頸組織細(xì)胞樣本經(jīng)液基細(xì)胞學(xué)檢測是臨床較為常見的檢測手段，主要用來對患者的宮頸上皮內(nèi)瘤變的篩查，對于宮頸癌患者的早期診斷具有重要的意義[16]。本研究中，通過對宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的分型比較，患者的HPV16的感染率達(dá)到了80%，而在病毒不同載量的研究中，由于樣本量較小，僅能看到患者的HPV16感染患者的無細(xì)胞學(xué)改變與宮頸CINⅠ～Ⅲ病變患者的差異不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。趙敏等[17]通過對患者的病毒載量與宮頸病變的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在對患者的LCT檢查中，HPV16、18、45、31的病毒載量與宮頸CINⅠ～Ⅲ病變的相關(guān)性不顯著。目前對于HPV病毒載量的研究尚未形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)[18]，該指標(biāo)的大小與樣本中宮頸脫落細(xì)胞的數(shù)量相關(guān)，但是在對樣本的采集過程中，即使采取相同的手法進(jìn)行采集，但受到病毒持續(xù)性或者反復(fù)性的感染，也會造成患者的宮頸CINⅠ～Ⅲ病變載量的不穩(wěn)定性。雖然HPV感染是造成患者的癌前病變的重要原因，但是宮頸癌變并不是造成疾病的唯一原因[19]，大多數(shù)育齡期婦女在感染HPV后均會自行消退，只有2%～3%的患者在感染HPV后會逐步發(fā)展為宮頸癌[20]。在宮頸癌的發(fā)展過程中，HPV感染與性功能紊亂、性生活過早、多孕多產(chǎn)以及不良生活方式有關(guān)，綜合作用進(jìn)而造成患者宮頸癌疾病進(jìn)展。在宮頸癌疾病的疾病進(jìn)展中，CINⅢ被認(rèn)為是癌前病變，同時也是宮頸浸潤癌，所以在疾病的早期，針對CINⅠ～Ⅲ的患者，及時進(jìn)行HPV診斷，通過對患者的早期診斷以及干預(yù)，對患者的治療以及預(yù)后具有重要的意義。

通過本研究的結(jié)果，提示在對患者進(jìn)行宮頸組織細(xì)胞樣本經(jīng)液基細(xì)胞學(xué)檢測的同時，針對較高風(fēng)險(xiǎn)的患者及時開展HPV感染監(jiān)測，可在一定程度上降低患者的HPV重復(fù)檢查次數(shù)，提升診斷效能。

綜上所述，女性HPV感染與宮頸癌前病變顯著相關(guān)，在對患者的細(xì)胞學(xué)形態(tài)檢查的基礎(chǔ)上，聯(lián)合HPV檢查，對于宮頸癌前病變診斷具有重要意義。