李明源 ，王繼蓮 ，姚拓 ，王振龍 ，張惠榮 ，柴加麗 ，劉曉婷 ，李青璞

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室，中‐美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州 730070；2.喀什大學(xué)生命與地理科學(xué)學(xué)院，新疆帕米爾高原生物資源與生態(tài)自治區(qū)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 喀什 844006）

1‐氨基環(huán)丙烷‐1‐羧酸（1‐aminocyclopropane‐1‐car‐boxylic acid，ACC）是高等植物內(nèi)源激素乙烯合成的直接前體，當(dāng)植物遭受生物（如病原體感染）或非生物（如高溫、鹽漬、重金屬等）脅迫時(shí)，往往會(huì)引起體內(nèi)乙烯的大量合成［1-3］。但高濃度的乙烯會(huì)嚴(yán)重抑制植物生長(zhǎng)，對(duì)農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)極為不利。有研究表明，一些土壤有益菌可分泌ACC脫氨酶，能將ACC水解成a-酮丁酸鹽和氨，從而降低逆境中植物體內(nèi)的乙烯水平［1，4-5］。現(xiàn)已證實(shí)，通過微生物來源的 ACC 脫氨酶降低植物內(nèi)源乙烯水平是植物與土壤微生物共同進(jìn)化過程中應(yīng)對(duì)逆境脅迫的一項(xiàng)關(guān)鍵策略［6-8］。微生物通過水解其直接前體ACC降低植物乙烯濃度，增強(qiáng)植物抗逆性。作為回報(bào)，ACC可被這些微生物用作營(yíng)養(yǎng)來源。植物和微生物之間的這種互惠關(guān)系有望被用于緩解植物在逆境環(huán)境中的生長(zhǎng)壓力。

植物促生菌（Plant Growth-Promoting Bacteria，PGPB）是一類能對(duì)植物產(chǎn)生直接或間接促生作用的土壤有益菌［9］。產(chǎn)ACC脫氨酶是PGPB促進(jìn)植物生長(zhǎng)和增強(qiáng)抗逆性的重要機(jī)制之一［2］。植物遭受逆境時(shí)，體內(nèi)會(huì)積累大量的ACC，其中部分ACC通過ACC氧化酶轉(zhuǎn)化為乙烯；同時(shí)，大量的ACC以根系分泌物的形式釋放到根際土壤中，吸引能以ACC為營(yíng)養(yǎng)的微生物在根際集聚［10］。這些微生物通過分解ACC，在實(shí)現(xiàn)自身營(yíng)養(yǎng)繁殖的同時(shí)降低了根際的ACC濃度，致使植物根系內(nèi)外形成ACC濃度差，促使體內(nèi)ACC順濃度梯度釋放到土壤中，最終減少植物體內(nèi)的乙烯積累并產(chǎn)生促進(jìn)作用［10-11］。

祁連山是我國(guó)西北地區(qū)重要的生態(tài)安全屏障。為獲得適用于該地區(qū)農(nóng)牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展所需生物肥料的優(yōu)良菌種，本研究以前期從祁連山高寒草地優(yōu)勢(shì)牧草根際或根內(nèi)分離的具有固氮、溶磷功能的PGPB為材料，篩選產(chǎn)ACC脫氨酶菌株，并通過盆栽接種實(shí)驗(yàn)評(píng)估其對(duì)低溫脅迫下植物生長(zhǎng)的影響。研究結(jié)果將對(duì)深入理解PGPB作用機(jī)制以及研制適用于高寒草地的生物菌肥提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 菌種來源

供試菌株為實(shí)驗(yàn)室前期從甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)天祝高山草原生態(tài)系統(tǒng)試驗(yàn)站（代號(hào)TZ），地理位置為N 37°11′、E 102°48′，海拔 2 884 m、中國(guó)科學(xué)院海北高寒草甸生態(tài)系統(tǒng)定位研究站（代號(hào)MY），地理位置N 37°37'、E 109°11'，3 240 m 的高寒草地優(yōu)勢(shì)牧草根際或根內(nèi)分離保存的PGPB，共821株（表1）。所有菌株經(jīng)LB培養(yǎng)基活化后備用。

表1 供試菌株來源Table 1 Information of tested strains

1.2 培養(yǎng)基

采用DF和ADF培養(yǎng)基［12］篩選有ACC脫氨酶活性的菌株，ADF培養(yǎng)基即用ACC（3.0 mmol/L，過濾滅菌）代替DF培養(yǎng)基中的（NH4）2SO4。Hogland's營(yíng)養(yǎng)液參照文獻(xiàn)［1］配制。

1.3 主要試劑與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)所用試劑和設(shè)備為：ACC和α‐丁酮酸（分析純）購(gòu)自Sigma公司；MDA、SOD、POD和CAT檢測(cè)試劑盒購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（OMEGA，USA）；紫外可見分光光度計(jì)（TU‐1901，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），光照培養(yǎng)箱（SPX‐GB‐300F，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）。

1.4 產(chǎn)ACC脫氨酶菌株的篩選

參照Penrose等［12］方法，以點(diǎn)種法將供試菌株分別接種至DF和ADF培養(yǎng)基上，15 ℃培養(yǎng)3~5 d，每天觀察菌落生長(zhǎng)情況。在連續(xù)3次傳代培養(yǎng)過程中，若ADF培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)情況明顯好于DF培養(yǎng)基，則說明該菌株能夠以ACC為唯一氮源生長(zhǎng)，即能合成ACC脫氨酶。

定量分析：將陽性菌株接入5 mL液體LB培養(yǎng)基 ，15 ℃ 、180 r/min 培 養(yǎng) 36 h，8 000×g、4 ℃ 離 心10 min棄上清。沉淀經(jīng)不含（NH4）2SO4的DF液體洗滌2次后重懸于7.5 mL的ADF液體中，15 ℃、180 r/min培養(yǎng) 36 h，8 000×g、4 ℃離心 10 min棄上清液。沉淀再經(jīng)0.1 mol/L Tris‐HCl（pH值7.6）洗滌2次，加入600 μL的0.1 mol/L Tris‐HCl（pH值8.5）重懸菌體沉淀，加入30 μL甲苯后渦旋振蕩30 s以裂解菌體。取100 μL甲苯化的菌液通過Bradford法測(cè)定菌體蛋白量表征其生物量。剩余的甲苯化菌液參照Glick等［12］方法測(cè)定ACC脫氨酶活性。分別以牛血清白蛋白和α‐丁酮酸為標(biāo)準(zhǔn)物繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算菌株ACC脫氨酶活性。酶活性是指單位時(shí)間內(nèi)，菌體蛋白催化ACC脫氨分解為a‐丁酮酸的微摩爾數(shù)，單位：μmol/（mg?h）。

1.5 產(chǎn)ACC脫氨酶菌株16S rRNA基因擴(kuò)增與系統(tǒng)發(fā)育分析

通過細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取陽性菌株DNA，以通用引物27F和1 492R［13］擴(kuò)增 16S rRNA基因，PCR產(chǎn)物送由楊凌天潤(rùn)奧科生物科技有限公司完成測(cè)序。測(cè)序結(jié)果提交http：//ezbiocloud.net/數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析，利用MEGA 7.0軟件以鄰近法（Neighbor-Joining）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，Bootstrap 值為 1000。

1.6 植物促生實(shí)驗(yàn)

選用祁連山高寒草地人工補(bǔ)播主要牧草品種—垂穗披堿草（Elymus nutans）為供試植物，栽培方式為沙培。種子經(jīng)1%的NaClO溶液表面消毒5 min，無菌水沖洗3遍后均勻播種于塑料杯中（口徑9.5 cm×底徑6.0cm×杯高13 cm，每杯裝約500 g滅菌河沙），置于光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)（25 ℃，光照14 h、黑暗10 h，濕度為60%~70%，光強(qiáng)度為4 000 lx）。實(shí)驗(yàn)分接種處理（接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株）和對(duì)照（接種無菌LB液體）。待幼苗生長(zhǎng)至14 d后進(jìn)行接種和低溫脅迫。供試菌株先經(jīng)LB液體培養(yǎng)基于15 ℃、180 r/min培養(yǎng)36~48 h，調(diào)整培養(yǎng)液D600nm值為0.8（細(xì)胞濃度約1×1010CFU/mL）。細(xì)菌接種量為3 mL/杯，每種菌接種5杯。設(shè)置 25、18、12、8、4 ℃共 5個(gè)溫度梯度，不同溫度下脅迫處理48 h后，取樣通過試劑盒測(cè)定植株地上部莖、葉中主要抗氧化酶（SOD、CAT和POD）活性及MDA含量，以無水乙醇浸提取法測(cè)定葉綠素含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收獲幼苗，每個(gè)塑料杯中隨機(jī)選取5株，采用卷尺測(cè)定株高；利用游標(biāo)卡尺測(cè)量莖粗；采用根系掃描儀（LA2400 Scanner，Epson Expression 10000XL）掃描根系，得到總根長(zhǎng)、根表面積、平均根直徑和根尖數(shù)等數(shù)據(jù)；分別將植株地上和地下部分裝入紙袋，于烘箱105 ℃殺青30 min后調(diào)至70 ℃烘干至恒重，用分析天平測(cè)定地上和地下部干重。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 25.0和Origin 2021軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和繪圖；通過One Way ANOVA和Dun‐can法進(jìn)行方差分析和多重比較（α=0.05）。圖表數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)ACC脫氨酶菌株的篩選

根據(jù)ADF與DF培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)情況，從821株供試菌株中初篩得到19株產(chǎn)ACC脫氨酶菌株（圖1）。通過定量分析菌株ACC脫氨酶活性，并按照Pen‐rose和Glick的建議，以ACC脫氨酶活性不低于20 nmol/（mg·h）作為活性菌株篩選標(biāo)準(zhǔn)，最終得到11株酶活性較高的菌株（表2）。其中TZnG2菌株的酶活性最高，達(dá) 3.42±0.12 μmol/（mg·h），但酶活性大于1 μmol/（mg·h）的菌株僅有 4株。

圖1 ACC脫氨酶活性菌株定性篩選Fig.1 Qualitative screening of ACC deaminaseproducing strains

2.2 產(chǎn)ACC脫氨酶菌株系統(tǒng)發(fā)育分析

經(jīng)16S rRNA基因測(cè)序和系統(tǒng)發(fā)育分析，11株產(chǎn)ACC脫氨酶菌株分別屬于歐文氏菌屬（Erwinia）、假單 胞 菌 屬（Pseudomonas）、黃 桿 菌 屬（Flavobacte?rium）、不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter）和貪噬菌屬（Var?iovorax）5個(gè)不同細(xì)菌屬（表2，圖2），其中以歐文氏菌屬（4株）占比最多，占總菌數(shù)的36.36%；假單胞菌屬3株，占27.27%；黃桿菌屬2株，占18.18%；不動(dòng)桿菌屬和貪噬菌屬各1株，分別占9.09%。

圖2 產(chǎn)ACC脫氨酶菌株系統(tǒng)發(fā)育分析Fig.2 Phylogenetic analysis of ACC deaminase-producing strains

表2 11株產(chǎn)ACC脫氨酶菌株的酶活性與分類地位Table 2 Enzyme activity and classification status of 11 ACC deaminase-producing strains

2.3 接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株對(duì)低溫脅迫下垂穗披堿草生長(zhǎng)的影響

選取 ACC 脫氨酶活性大于 1 μmol/（mg?h）的 4株菌（TZnG2、MYnI4、MYnD11和TZnFn7）接種垂穗披堿草幼苗，結(jié)果表明，它們對(duì)垂穗披堿草生長(zhǎng)和生物量積累均有積極影響（表3）。相比對(duì)照組，接菌處理顯著促進(jìn)了株高、莖粗、地上干重和地下干重的增長(zhǎng)。其中以MYnI4對(duì)株高促生作用最大，相比對(duì)照增加了22.96%。對(duì)莖粗、地上和地下干重促進(jìn)作用最突出的均為菌株TZnG2，分別增長(zhǎng)了29.09%、126.38%和186.67%。除接種菌株TZnFn7外，其他菌株均對(duì)根系發(fā)育有明顯促進(jìn)作用，尤以MYnI4作用最明顯（表4）。但接種菌株TZnFn7減少了根尖數(shù)量，具體原因尚不明確。

表3 低溫脅迫下接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株垂穗披堿草的生長(zhǎng)狀況Table 3 Growth states of E.nutans inoculated with ACC deaminase-producing strains under low temperature stress

表4 低溫脅迫下接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株垂穗披堿草的根系發(fā)育狀況Table 4 Root growth states of E.nutans inoculated with ACC deaminase-producing strains under low temperature stress

2.4 接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株對(duì)低溫脅迫下垂穗披堿草植株葉綠素含量的影響

隨溫度降低，對(duì)照組植株葉片葉綠素a含量逐漸減少（圖3‐A），相比25 ℃處理，4 ℃時(shí)下降了30.27%。但接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株后，葉綠素a呈現(xiàn)出隨溫度下降呈先降低后升高的趨勢(shì)，且變化幅度變小。比較之下，接種TZnFn7效果最顯著，相比25 ℃，葉綠素a含量在4 ℃僅下降了2.08%。

與葉綠素a含量變化趨勢(shì)相似，伴隨溫度降低，對(duì)照組葉綠素b含量顯著減少（圖3‐B）。葉綠素b含量在4℃時(shí)相比25 ℃下降了47.82%。但接種TZnFn7后葉綠素b含量表現(xiàn)出先降低后升高趨勢(shì)，其中在12℃時(shí)含量最低，僅為25 ℃時(shí)的84.55%，隨后逐漸升高，4 ℃時(shí)的葉綠素b含量達(dá)到25 ℃時(shí)的93.79%。其它接種處理呈現(xiàn)出與對(duì)照相似的規(guī)律，葉綠素b含量隨溫度降低而下降，但總體下降趨勢(shì)減緩。

隨溫度降低，對(duì)照組類胡蘿卜素含量呈逐漸下降趨勢(shì)，相比25 ℃，在4 ℃時(shí)下降了18.65%。但接種菌株TZnFn7和MYnI4后表現(xiàn)出先下降后升高趨勢(shì)，在4 ℃時(shí)，類胡蘿卜素含量分別為25 ℃時(shí)的96.64%和105.01%（圖3‐C）。接種 TZnG2和MYnD11后植株類胡蘿卜素含量變化規(guī)律與對(duì)照相似，但相比對(duì)照下降趨勢(shì)平緩。

圖3 低溫脅迫下接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株垂穗披堿的草葉綠素含量Figure 3 Chlorophyll content of E.nutans inoculated with ACC deaminase-producing strains under low temperature stress

2.5 接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株對(duì)低溫脅迫下垂穗披堿草抗氧化酶活性的影響

2.5.1 對(duì)低溫脅迫下植株SOD的影響 SOD是植物體內(nèi)極為重要的抗氧化酶，隨著溫度降低，各處理植株莖葉中SOD酶活性均呈現(xiàn)出逐漸升高趨勢(shì)（圖4‐A）。但接種菌株處理后，SOD酶活性表現(xiàn)出一定規(guī)律的波動(dòng)變化。接種TZnG2和TZnFn7后在25 ℃到12 ℃時(shí)SOD酶活性逐步升高，但在8 ℃時(shí)降低，4 ℃時(shí)又再次升高。而接種MYnD11和MYnI4在18 ℃時(shí)酶活性最低，后隨溫度降低而逐步升高。

2.5.2 對(duì)低溫脅迫下植株P(guān)OD的影響 隨著溫度降低，無論對(duì)照還是接種處理，POD活性總體呈現(xiàn)出先升高后降低再上升的趨勢(shì)（圖4‐B）。接種TZnG2后在8 ℃時(shí)POD活性達(dá)到最高值，相比25 ℃時(shí)提高了42.98%。接 種 TZnFn7、MYnD11和 MYnI4后在25 ℃到12℃時(shí)POD活性逐漸升高，8 ℃時(shí)下降，而在4 ℃時(shí)又升高且達(dá)到最高值，相比25 ℃分別提高了9.48%、74.27%和42.55%。相比之下，對(duì)照組變化幅度更大，POD活性在12 ℃時(shí)最低，相比25 ℃時(shí)下降了21.97%，8 ℃時(shí)最高，相比25 ℃時(shí)提高了35.93%。

2.5.3 對(duì)低溫脅迫下植株內(nèi)CAT的影響 隨溫度降低，接種菌株與對(duì)照植株莖葉中CAT活性均呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢(shì)，且波動(dòng)幅度均不大（圖4‐C）。除接種菌株MYnI4在8 ℃時(shí)酶活力變化較大外，其余菌株與對(duì)照在各溫度下均無顯著差異。

2.5.4 對(duì)低溫脅迫下植株內(nèi)MDA含量的影響MDA是植物細(xì)胞膜脂過氧化的分解產(chǎn)物，其含量變化可反映植物遭受逆境損傷的程度。隨著溫度降低，接種菌株和對(duì)照植株莖葉中MDA含量均呈上升趨勢(shì)（圖4‐D）。相比而言，對(duì)照植株內(nèi)MDA積累更快，除12 ℃外，其他溫度下接種菌株與對(duì)照之間無顯著差異。

圖4 低溫脅迫下接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株垂穗披堿草植株的抗氧化酶活性Fig.4 Antioxidant enzyme activity of Elymus nutans inoculated with ACC deaminase-producing strains under low temperature stress

3 討論

乙烯是一種重要的植物內(nèi)源激素，能作為信息分子在植物細(xì)胞之間傳遞進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)節(jié)。當(dāng)植物遭受高溫、冷害、鹽堿等逆境脅迫時(shí)會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)ACC合成酶活性，導(dǎo)致產(chǎn)生大量乙烯進(jìn)而對(duì)植物生長(zhǎng)不利。產(chǎn)ACC脫氨酶的PGPB能降解植物乙烯合成的直接前體ACC而賦予植物對(duì)鹽堿脅迫［1，2，11］、冷脅迫［14］及干旱脅迫［15］等多種逆境的耐受性，被認(rèn)為是提高植物抗逆性的有效途徑。

Li等［16］將陰溝腸桿菌Enterobacter cloacaeUW4中的ACC脫氨酶基因（acdS）導(dǎo)入大腸桿菌（Esch?erichia coli）、巴西固氮螺菌（Azospirillumbrasilense）及惡臭假單胞菌（Pseudomonas putida）等細(xì)菌中，發(fā)現(xiàn)陽性轉(zhuǎn)化菌株都能促進(jìn)油菜幼苗根的生長(zhǎng)。而失去ACC脫氨酶基因的負(fù)突變株也同時(shí)失去促生能力，說明產(chǎn)ACC脫氨酶是PGPB促進(jìn)植物生長(zhǎng)的關(guān)鍵機(jī)制之一。Onofre-Lemus等［17］研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)ACC脫氨酶是伯克霍爾德菌屬（Burkholderia）的普遍特征，能調(diào)節(jié)番茄乙烯水平并促進(jìn)其生長(zhǎng)。本研究將產(chǎn)ACC脫氨酶菌株接種低溫脅迫下的垂穗披堿草幼苗獲得了相似結(jié)果，進(jìn)一步驗(yàn)證產(chǎn)ACC脫氨酶菌株能有效減緩低溫對(duì)垂穗披堿草幼苗的損害，增強(qiáng)其抵御低溫脅迫能力，發(fā)揮促生作用。

優(yōu)良菌種是研制功能性生物菌肥的基礎(chǔ)。目前，篩選產(chǎn)ACC脫氨酶菌株的方法主要有定向富集法［12］，即以ACC為唯一氮源配制培養(yǎng)基進(jìn)行篩選與培養(yǎng)；或針對(duì)編碼ACC脫氨酶基因的acdS基因設(shè)計(jì)特異性引物，借助PCR手段進(jìn)行篩選。相比之下，傳統(tǒng)的定向富集法耗時(shí)較長(zhǎng)，工作量巨大而效率低；PCR法快捷、靈敏、高效，但依賴于特異性高的引物設(shè)計(jì)和PCR反應(yīng)條件。因此，兩種方法各有利弊，需根據(jù)實(shí)際操作選擇應(yīng)用。

低溫是影響植物生長(zhǎng)和限制其地理分布的重要脅迫因素，它能通過破壞植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)和引起生理生化代謝紊亂而對(duì)植物產(chǎn)生傷害［18］。冷脅迫下，植物細(xì)胞葉綠素合成受阻，細(xì)胞膜脂過氧化產(chǎn)物丙二醛大量積累，活性氧增多而使細(xì)胞膜系統(tǒng)功能喪失和結(jié)構(gòu)改變，為消除活性氧，細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶（如SOD、POD、CAT等）活性迅速升高［19］。因此，MDA含量變化及抗氧化防御酶活性是低溫脅迫下植物應(yīng)激反應(yīng)的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)。研究表明，分泌ACC脫氨酶的PGPB能通過誘導(dǎo)植物細(xì)胞抗氧化酶活性進(jìn)而提升抗逆能力［20］。Singh將 ACC 脫氨酶菌株Stenotrophomonas maltophiliaSBP‐9接種小麥，發(fā)現(xiàn)其能提高小麥應(yīng)對(duì)非生物脅迫的能力，促進(jìn)其在逆境下的生長(zhǎng)［21］。Habib等［22］將 產(chǎn) ACC 脫 氨 酶 菌 株Enterobactersp.UPMR18接種秋葵，可以提高幼苗在高鹽脅迫下的發(fā)芽率、生長(zhǎng)參數(shù)和葉綠素含量，而且秋葵植株內(nèi)抗氧化酶（SOD、APX和CAT）活性也有效提高。

何敏等［23］從青藏高原北部退化草原的土壤中分離到的短桿菌屬Brevibacteriumsp.TS22和蕈狀芽孢桿菌Bacillus mycoidesTS27具有較高ACC脫氨酶活性，在10 ℃環(huán)境下接種早熟禾和老芒麥實(shí)驗(yàn)表明，它們能有效促進(jìn)株高、根長(zhǎng)、地上和地下部干重的增長(zhǎng)，但促生效果因植物和菌種的不同而有所不同。Tara等［24］從蘆薈根際分離得到1株具有多種促生屬性的耐冷短桿菌Brevibacterium frigoritoleransSMA23，在10 ℃低溫下對(duì)小麥生長(zhǎng)有積極影響。李玫等［25］在低溫脅迫下對(duì)海欖雌幼苗進(jìn)行接種PGPB試驗(yàn)，結(jié)果表明接種PGPB能有效增強(qiáng)海欖雌幼苗抗寒能力并促進(jìn)其生長(zhǎng)，且PGPB的混合接種比單一接種效果更佳。劉維紅等［14］采用定向富集法從不同蔬菜根際篩選到多株ACC脫氨酶活性菌株，選取活性最高的LA1、XG32和YC1接種番茄幼苗，發(fā)現(xiàn)3株菌能明顯緩解低溫脅迫對(duì)番茄初生苗的傷害，促進(jìn)其生長(zhǎng)，且澆菌液接菌促生效果優(yōu)于浸種接菌。因此，土壤中產(chǎn)ACC脫氨酶菌株的開發(fā)應(yīng)用是提升植物抗逆性的有效策略，對(duì)鹽堿地的高效應(yīng)用以及增強(qiáng)植物應(yīng)對(duì)生物或非生物脅迫有重要意義。

4 結(jié)論

從祁連山高寒草地的821株細(xì)菌中篩選得到11株有ACC脫氨酶活性的菌株，被區(qū)分為5個(gè)不同菌屬，其中有 4株酶活性大于 1 μmol/（mg·h），具有進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。接種產(chǎn)ACC脫氨酶菌株能有效減緩低溫脅迫下垂穗披堿草葉綠素含量下降，提高SOD、POD和CAT等抗氧化酶活性，促進(jìn)植物生長(zhǎng)。