齊秋爽，劉立宏，仇岑，王娜，2，廖振宇，閆師杰，2*

（1.天津農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與生物工程學(xué)院，天津 300392；2.天津市農(nóng)副產(chǎn)品深加工技術(shù)工程中心，天津 300392；3.譜尼測試科技（天津）有限公司，天津 300384）

我國是農(nóng)業(yè)大國，蔬菜產(chǎn)量較高。現(xiàn)階段，蔬菜種植過程中農(nóng)藥使用量較多，導(dǎo)致我國非有機(jī)果蔬農(nóng)藥殘留率接近80%[1-2]。研究表明[3]，在一些認(rèn)證蔬菜樣品中單項(xiàng)農(nóng)藥殘留檢出率比常規(guī)蔬菜樣品高，接近70%有機(jī)樣品檢測出農(nóng)藥殘留。不論是對農(nóng)藥的過度依賴還是環(huán)境等外界因素，常出現(xiàn)農(nóng)藥過量使用的現(xiàn)象，然而農(nóng)藥殘留超標(biāo)對人體健康和環(huán)境均會造成一定危害[4]。

農(nóng)藥種類較多，通過調(diào)研了解果蔬種植中農(nóng)藥的使用情況，結(jié)合天津市本地農(nóng)田實(shí)際使用的農(nóng)藥種類，最終選擇使用頻率較高、用途較廣且研究較少的滅蠅胺、咪鮮胺進(jìn)行重點(diǎn)研究。滅蠅胺又名環(huán)丙氨嗪，是一種新型高效、低毒、含氮雜環(huán)類殺蟲劑，主要用于防治葉菜類、菜豆類、瓜果類和花卉上的美洲斑潛蠅等農(nóng)業(yè)害蟲[5-7]。GB 2763—2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留量》[8]限制了部分蔬菜、瓜果等使用滅蠅胺后的殘留量，美國環(huán)境保護(hù)署也將滅蠅胺列為C類致癌物。滅蠅胺在植物體內(nèi)和環(huán)境中光降解形成三聚氰胺[9]，是2B類致癌物。張杰群等[10]研究發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺會導(dǎo)致腎功能衰竭、生殖系統(tǒng)受損。咪鮮胺又名施?？恕涿轨`、施百克、滅丙菌，可有效防治農(nóng)作物的葉斑病、白粉病等[11-12]。咪鮮胺在環(huán)境中和植物體內(nèi)最終會代謝為 2，4，6-三氯苯酚。2，4，6-三氯苯酚毒性高，可引起人體呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的損害，同時具有不易降解特性，易造成嚴(yán)重的環(huán)境污染[13-14]。聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織食品法典委員會規(guī)定咪鮮胺在作物上的最高殘留限量為咪鮮胺及其含有2，4，6-三氯苯酚部分的代謝產(chǎn)物之和。因此，可以將樣品中咪鮮胺及其代謝物全部水解為2，4，6-三氯苯酚，通過測定2，4，6-三氯苯酚以實(shí)現(xiàn)咪鮮胺的檢測。

在日常生活中，自來水清洗是蔬菜烹制前最常用的處理方式。因此，評價清洗后蔬菜的農(nóng)藥殘留對其質(zhì)量安全具有重要意義。本研究選取天津市西青區(qū)蔬菜種植基地具有代表性的蔬菜（根類的旱蘿卜、葉類的結(jié)球甘藍(lán)、豆類的短豆角）進(jìn)行田間試驗(yàn)，經(jīng)自來水清洗加工，采用液相色譜法、氣相色譜法分別對滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物進(jìn)行檢測，并對其去除效果進(jìn)行比較，以期為消費(fèi)者提供食品安全參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

旱蘿卜、結(jié)球甘藍(lán)、短豆角、滅蠅胺、咪鮮胺：天津市弘昊農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司；乙腈、甲醇、正己烷（均為色譜純）：上海默克化工技術(shù)有限公司；氯化鈉：天津市匯杭化工科技有限公司；氨水：天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；丙酮：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；石油醚（60℃～90℃）：天津市基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司；鹽酸：天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；檸檬酸：天津市科威有限公司；吡啶鹽酸鹽（化學(xué)級）：天津市光復(fù)精細(xì)化工研究院；1-庚烷磺酸鈉（98%）：上海麥克林生化科技有限公司；滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)品（99.18%）、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品（99.4%）、2，4，6-三氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)品（99.6%）：德國Dr.Ehrenstorfer公司。除注明外，所用試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

均質(zhì)機(jī)（T25）：德國IKA GmbH公司；冷凍離心機(jī)（3K15）：德國西格瑪公司；氮吹儀（HGC-12A）：天津恒奧科技發(fā)展有限公司；超純水機(jī)（Millipore ZRQSVR-800）：上海君翼儀器設(shè)備有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-2000）：上海力辰儀器科技有限公司；恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DH-101）：天津中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐公司；恒溫沙浴鍋（GESY-1）：金壇市成輝儀器廠；1200型液相色譜儀、78908型氣相色譜儀、Agilent ZORBAX SB-Aq C18色譜柱、Agilent HP-5毛細(xì)管柱：美國安捷倫科技有限公司；MCX陽離子交換柱（SPE Column）：美國沃特世科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 田間試驗(yàn)與樣品采集

根據(jù)NY/T 1276—2007《農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則》[15]，將甘藍(lán)、短豆角、旱蘿卜每種蔬菜設(shè)置3個農(nóng)藥濃度組，分別為空白組、低濃度組、高濃度組。農(nóng)藥的噴施方式為手動噴霧法，3種蔬菜間及3個濃度組間均設(shè)有隔離帶，防止污染。低濃度組為2 g滅蠅胺與5 000 mL水，3.3 mL咪鮮胺與5 000 mL水噴施劑量為正常濃度，空白組不噴灑農(nóng)藥，高濃度組噴施與低濃度組噴施相差3倍濃度。每個處理勻速往復(fù)噴施3次，盡可能使農(nóng)藥散落均勻。滅蠅胺的安全間隔期為3 d，咪鮮胺的安全間隔期為15 d。安全間隔期后對蔬菜進(jìn)行采收，運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室立即加工。

1.3.2 樣品清洗

將采收回的蔬菜各取600 g，其中豆角去掉不可食用部分，旱蘿卜去除頭部和根莖部，甘藍(lán)取從外向內(nèi)的5層葉片。對角線分割，四分法取樣。于3 000 mL自來水中浸泡5 min，濾干水分，用菜刀切碎，于-20℃下保存?zhèn)溆?。每個處理均進(jìn)行3次重復(fù)。

1.3.3 滅蠅胺、三聚氰胺的提取及測定

參照NY/T 1725—2009《蔬菜中滅蠅胺殘留量的測定高效液相測定法》[16]中的方法測定3種蔬菜滅蠅胺、三聚氰胺殘留量的檢測。

1.3.3.1 樣品前處理

稱取25.00 g蔬菜樣品放入離心管中，加入60 mL甲醇-水混合液（體積比為9∶1），17 000 r/min勻漿2 min后過濾。取濾液于100 mL容量瓶中，加入8 mL 0.5 mol/L HCl溶液，用上述甲醇-水混合液定容至100 mL，搖勻，取10 mL提取液待過柱凈化。

依次用5 mL甲醇、5 mL超純水激活MCX陽離子交換柱（6 mL、200 mg），之后將 10 mL 提取液過柱，再依次用5 mL超純水、5 mL甲醇沖洗MCX陽離子交換柱，抽干。用8mL 5%氨水-甲醇（體積比為1∶50）洗脫，收集洗脫液，用氮吹儀在40℃下吹干，最后用5 mL流動相定容，過0.22 μm膜后上機(jī)待測。

1.3.3.2 液相色譜檢測條件

色譜柱：AgilentZORBAXSB－C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：A 乙腈-B 庚烷磺酸鈉緩沖鹽溶液（體積比為85∶15）；檢測器：紫外檢測器，波長240 nm；流速為 1 mL/min；柱溫為 35℃；進(jìn)樣量 10 μL。三聚氰胺的保留時間為4.1 min，滅蠅胺的保留時間為8.2 min。

1.3.4 2，4，6-三氯苯酚的提取及測定

參照NY/T 1456—2007《水果中咪鮮胺殘留量的測定氣相色譜法》[17]中的方法測定3種蔬菜中2，4，6-三氯苯酚的殘留量，略有改動，需將咪鮮胺全部水解，轉(zhuǎn)化成 2，4，6-三氯苯酚。

1.3.4.1 樣品前處理

稱取40.00 g蔬菜樣品，加入50.0 mL乙腈置于勻漿杯中，17 000 r/min勻漿2 min，過濾。向?yàn)V液中加入5.0 g氯化鈉，劇烈振蕩1 min，25℃下靜置30 min使充分分層。取上清液20 mL于25 mL比色管中，氮?dú)獯蹈?，加? g吡啶鹽酸鹽，恒溫沙浴鍋中水解1.5 h，沙浴鍋溫度為230℃，25℃下冷卻。用60 mL蒸餾水分次將比色管中得到的物質(zhì)沖洗轉(zhuǎn)移至250 mL分液漏斗中，每次使用50 mL石油醚萃取，直至將有機(jī)相完全萃取出，合并有機(jī)相，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，待凈化。

用25 mL丙酮-正己烷（體積比為9∶1）活化硅酸鎂萃取柱，10 mL正己烷溶液分次沖洗圓底燒瓶，振蕩，將沖洗后的溶液過萃取小柱。棄去濾液，再用25 mL丙酮-正己烷（體積比為9∶1）混合溶液洗脫收集，氮吹后，用5 mL正己烷溶解，過0.22 μm濾膜，上機(jī)待測。

1.3.4.2 氣相色譜檢測條件

色譜柱：Agilent HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測器溫度：280 ℃；載氣：高純氮?dú)?；流速?.0 mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；柱箱溫度：升溫程序見表1。

表1 柱箱程序升溫Table 1 Programmed temperature rise of column box

1.3.5 2種檢測方法的有效性評價

1.3.5.1 線性關(guān)系及檢測限、定量限

用甲醇-水混合溶液（體積比為9∶1）稀釋滅蠅胺和三聚氰胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用丙酮稀釋2，4，6-三氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，將質(zhì)量濃度稀釋至0.05 mg/L～1.00 mg/L，分別上機(jī)測定。采用外標(biāo)法定量，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。以3倍信噪比計(jì)算檢測限（limit of detection，LOD），10倍信噪比計(jì)算定量限（limit of detection，LOQ）

1.3.5.2 回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算

在短豆角、甘藍(lán)、旱蘿卜的空白組中分別添加滅蠅胺、三聚氰胺、2，4，6-三氯苯酚3個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中滅蠅胺、三聚氰胺的添加水平為0.02、0.06、0.20 μg/mL，2，4，6-三氯苯酚的添加水平為 0.01、0.03、0.10 μg/mL，分別按 1.3.3、1.3.4中的方法對樣品進(jìn)行處理，每組3個平行。計(jì)算短豆角、甘藍(lán)、旱蘿卜中2種農(nóng)藥及其代謝物的回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用平均回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差評價液相色譜法、氣相色譜法檢測滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的測定方法。采用加工因子（processing factor，PF）和農(nóng)藥去除率衡量清洗對農(nóng)藥的去除效果。

1.4.1 加工因子的計(jì)算

加工因子的計(jì)算公式如下[18]。

PF=B1/B2

式中：B1為加工后樣品農(nóng)藥殘留量，mg/L；B2為加工前樣品的農(nóng)藥殘留量，mg/L。

當(dāng)加工因子PF＜1時，說明在加工過程中農(nóng)藥殘留量降低，PF值越低，農(nóng)藥的殘留濃度越低；PF=1時，說明在加工過程中農(nóng)藥殘留量沒有變化；PF＞1時，說明在加工過程中農(nóng)藥殘留量反而升高。

1.4.2 農(nóng)藥去除率的計(jì)算

農(nóng)藥去除率的計(jì)算公式如下[19]。

去除率/%=[（C1-C2）/C1]×100

式中：C1為加工前樣品的農(nóng)藥殘留量，mg/L；C2為加工后樣品的農(nóng)藥殘留量，mg/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的線性關(guān)系

表2為滅蠅按、咪鮮胺及其代謝物的回歸方程、檢出限和定量限。

表2 滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的回歸方程、檢出限和定量限Table 2 Regression equations，detection and quantification limits of cyromazine，prochloraz and their metabolites

由表2可知，3個分析物在其線性范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積均有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999。滅蠅胺和三聚氰胺的LOD分別為0.02、0.01mg/kg，LOQ 分別為 3.00、2.00 mg/kg；2，4，6-三氯苯酚的 LOD為 0.01 mg/kg，LOQ 為 1.00 mg/kg。

2.2 滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物在3種蔬菜中各添加濃度的回收試驗(yàn)結(jié)果見表3～表5。

表3 滅蠅胺在3種蔬菜中的加標(biāo)回收率（n=3）Table 3 Standard addition recovery of cyromazine in three vegetables（n=3）

表4 三聚氰胺在3種蔬菜中的加標(biāo)回收率（n=3）Table 4 Standard addition recovery of melamine in three vegetables（n=3）

表5 2，4，6-三氯苯酚在3種蔬菜中的加標(biāo)回收率（n=3）Table 5 Standard addition recovery of 2，4，6-trichlorophenol in three vegetables（n=3）

由表3～表5可知，在3個添加濃度下，滅蠅胺在短豆角、甘藍(lán)、旱蘿卜中的平均回收率為78.2%～93.1%，RSD為2.12%～6.95%；三聚氰胺平均回收率為89.1%～110.2%，RSD 為 1.09%～4.11%；2，4，6-三氯苯酚的平均回收率為92.8%～105.1%，RSD為0.90%～4.21%。滅蠅胺、三聚氰胺、2，4，6-三氯苯酚在3種蔬菜中的平均回收率均大于70%，RSD均小于10%，結(jié)果滿足NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[20]中的規(guī)定，說明2種測定方法的精密度、準(zhǔn)確度較好，能夠滿足滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物殘留量的檢測。

2.3 滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物在3種蔬菜中的初始?xì)埩魴z測

在進(jìn)行清洗加工處理前，分別對短豆角、旱蘿卜、甘藍(lán)進(jìn)行上機(jī)檢測。3種蔬菜的空白組中均未檢測到滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物。說明田間試驗(yàn)所用的試驗(yàn)基地沒有受到滅蠅胺和咪鮮胺的污染。在噴灑低、高濃度組滅蠅胺的3種蔬菜中均檢測到滅蠅胺及其代謝物三聚氰胺；噴灑低、高濃度組咪鮮胺的3種蔬菜中均可檢測到 2，4，6-三氯苯酚。

2.4 清洗對短豆角中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的影響

清洗對短豆角中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物農(nóng)藥殘留的去除效果如圖1所示。

圖1 清洗后短豆角中不同農(nóng)藥的去除效果Fig.1 Removal rate of different pesticides in short beans after cleaning

由圖1A可知，清洗后短豆角對不同濃度的滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的加工因子均小于1.0，說明在清洗加工過程中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的殘留量降低，清洗對去除農(nóng)藥有一定效果。由圖1B可知，滅蠅胺低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了57.70%、61.99%；三聚氰胺低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了 38.27%、45.15%；2，4，6-三氯苯酚低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了30.93%、20.69%。由此可見，清洗可降低短豆角滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的殘留量，其中滅蠅胺的低濃度組和高濃度組PF值和去除率較好，可能是滅蠅胺在短豆角中發(fā)生的微生物降解、化學(xué)降解及本身的理化性質(zhì)等因素導(dǎo)致消解速率較快，農(nóng)藥原始?xì)埩袅拷档停唧w的降解機(jī)理還需進(jìn)一步研究[21-22]。

2.5 清洗對甘藍(lán)中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的影響

清洗對甘藍(lán)中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物農(nóng)藥殘留的去除效果見圖2。

圖2 清洗對甘藍(lán)中不同農(nóng)藥的去除效果Fig.2 Removal rate of different pesticides in cabbageafter cleaning

由圖2A可知，清洗后甘藍(lán)的滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物在低濃度組和高濃度組的加工因子各不相同，但所有加工因子均小于1.0，說明清洗可降低甘藍(lán)中滅蠅胺和咪鮮胺及其代謝物的殘留水平。由圖2B可知，滅蠅胺低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了25.61%、62.88%；三聚氰胺低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了14.69%和87.45%；2，4，6-三氯苯酚低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了32.60%、50.73%。由此可見，甘藍(lán)中滅蠅胺、三聚氰胺、2，4，6-三氯苯酚高濃度組的PF值和去除率較好，原因可能是滅蠅胺和咪鮮胺是內(nèi)吸性殺菌劑，在甘藍(lán)葉和球內(nèi)起作用，高濃度組農(nóng)藥內(nèi)吸性更強(qiáng)，導(dǎo)致高濃度組的農(nóng)藥原始?xì)埩袅肯鄬^高。然而甘藍(lán)的葉表面積大，內(nèi)部容易清洗，從而可去除農(nóng)藥殘留[23]。

2.6 清洗對旱蘿卜中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的影響

清洗對旱蘿卜中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物農(nóng)藥殘留的去除效果見圖3。

圖3 清洗對旱蘿卜中不同農(nóng)藥的去除效果Fig.3 Removal rate of different pesticides in dry radish after cleaning

由圖3A可知，清洗后的旱蘿卜中滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物加工因子均小于1.0，說明清洗對旱蘿卜中的滅蠅胺、三聚氰胺、2，4，6-三氯苯酚均有去除效果。由圖3B可知，滅蠅胺低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了45.02%、66.00%；三聚氰胺低濃度組、高濃度組的去除率分別達(dá)到了 73.10%、89.74%；2，4，6-三氯苯酚在低濃度組、高濃度組中去除率分別達(dá)到了39.48%、35.54%。由此可見，清洗對滅蠅胺、三聚氰胺的去除效果較好，可能是滅蠅胺在旱蘿卜內(nèi)更易通過脫烷基代謝產(chǎn)生三聚氰胺；也可能是農(nóng)藥直接噴施到葉片上，而蘿卜根生長于土壤中未能與噴施的農(nóng)藥直接接觸，其原始農(nóng)藥沉積量少。此外，咪鮮胺的去除率較低的可能原因是滅蠅胺的安全間隔期為3 d，咪鮮胺的安全間隔期為15 d，隨著農(nóng)藥噴施時間的延長，滲透到蔬菜中的農(nóng)藥量會增多，蔬菜表面的農(nóng)藥殘留量減少；還可能是塊根類蔬菜初生結(jié)構(gòu)中存在韌皮部和纖維，會產(chǎn)生保護(hù)組織，導(dǎo)致清洗對安全間隔期長的農(nóng)藥去除效果差[24-25]。

對比圖1、圖2和圖3的試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，清洗對滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物的去除效果與蔬菜種類有關(guān)，例如，清洗能減少三聚氰胺在旱蘿卜中的殘留（低濃度組去除率為73.10%），但對甘藍(lán)中三聚氰胺殘留的去除效果較弱（低濃度組去除率僅為14.69%）。其次，農(nóng)藥在蔬菜上的殘留量還取決于農(nóng)藥施藥量濃度，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，噴施高濃度滅蠅胺的3種蔬菜的去除率高于低濃度處理組，表明高濃度農(nóng)藥的原始?xì)埩袅扛哂诘蜐舛冉M，且殘留量與施藥濃度呈正相關(guān)。此外，農(nóng)藥在蔬菜上的殘留量還可能與農(nóng)藥的理化性質(zhì)和手工清洗強(qiáng)度有關(guān)。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)研究清洗對短豆角、甘藍(lán)、旱蘿卜中常用農(nóng)藥滅蠅胺、咪鮮胺及其代謝物殘留的去除效果，結(jié)果表明，3種蔬菜中滅蠅胺的去除率在25.61%～66.00%；三聚氰胺的去除率在 14.69%～89.74%；2，4，6-三氯苯酚的去除率在20.69%～50.73%。綜上，清洗對滅蠅胺的去除效果比咪鮮胺更好。雖然清洗浸泡的方式對于農(nóng)藥及其代謝物有去除效果，但做不到完全去除，即去除率達(dá)不到100%。因此，建議在食用皮可食蔬菜前先進(jìn)行充分的清洗，去皮后再烹制更優(yōu)。