朱春華，陳翠騰，陳 珍，施少華，劉斌瓊，傅光華，黃 瑜

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，福建 福州 350013)

高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza，HPAI)是由H5亞型或其重組毒株(包括H5N2、H5N5、H5N6和H5N8)流感病毒引起的一種禽類的烈性傳染病，引起家禽和野生鳥類數(shù)千次禽流感暴發(fā)并造成大量死亡，對(duì)世界養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前H5N1 Gs/GD譜系HPAI病毒已進(jìn)化為10個(gè)基因不同的病毒進(jìn)化支(Clade 0～Clade 9)和多個(gè)亞進(jìn)化支[1]，其中Clade 2譜系為主要分支，自2008年以來，在中國的家禽中，尤其是家鴨和活禽市場(chǎng)的家禽中發(fā)現(xiàn)了具有Gs/GD譜系H5進(jìn)化分支Clade 2.3.4遺傳骨架的HPAI亞型H5N2、H5N5和 H5N8，這些亞型隨后進(jìn)化成不同的子分支，其中最為醒目的是Clade 2.3.4.4亞分支[2-3]。HPAIV Clade 2.3.4.4與 H5N1亞型病毒的其他進(jìn)化支及本地LPAIV亞型進(jìn)行了基因重組[4]，不同Clade 2.3.4.4(a、b、c和e)的病毒在抗原性上往往不同。多種禽類，包括野生和家養(yǎng)水禽、甚至動(dòng)物園的鳥類，似乎都可以感染和/或傳播HPAIV進(jìn)化支Clade 2.3.4.4。與以前的H5N1 HPAIV相比，這些重組病毒在鳥類中表現(xiàn)出致病性的改變。Clade 2.3.4.4進(jìn)化分支病毒的致病性不僅在宿主之間不同，而且在同一種宿主內(nèi)也不同[5]。

不同流感病毒之間的重組被認(rèn)為是新病毒出現(xiàn)的主要機(jī)制，野生鳥類、家鴨體內(nèi)幾種H5Nx流感病毒的共同傳播促成了中國南方禽流感病毒的抗原多樣性和遺傳多樣性[6]。中國南方是家養(yǎng)水禽的主要養(yǎng)殖區(qū)之一，家禽常與野生水鳥共享水域。2010年，中國東部種鴨中發(fā)現(xiàn)了H5N8和H5N5的重組病毒[7-8]，警示病毒的基因重組可能導(dǎo)致新的流感病毒亞型的產(chǎn)生。2014年浙江、湖北和廣東養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)了H5N6禽流感，2015年湖南和江蘇也出現(xiàn)同一亞型的病例[9]。近3年來H5N8流感和相關(guān)病毒在野鳥感染和家禽中頻繁暴發(fā)，HPAIV常見的H5基因片段易與其他流感病毒重組[10-11]。因此，H5Nx是新的致病變異毒株的持續(xù)來源。禽流感Clade 2.3.4.4分支HA基因在家禽體內(nèi)循環(huán)數(shù)周或數(shù)年后，基因發(fā)生特定突變，具有明顯的雜交性，從而產(chǎn)生了具有多種神經(jīng)氨酸酶亞型的重組體。

該研究旨在對(duì)福建省病死家禽及養(yǎng)禽場(chǎng)采集的組織樣品和/或棉拭子樣品、活禽市場(chǎng)及其排污溝采集的棉拭子樣品分離的H5Nx流感毒株、以及東南地區(qū)主要流行毒株、遷徙鳥類、國內(nèi)代表性毒株等的血凝素基因序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，探討Clade 2.3.4.4分支病毒在遺傳演化過程中亞型的轉(zhuǎn)變，進(jìn)一步豐富我國福建地區(qū)禽流感病毒的分子流行病學(xué)，為福建省禽流感的預(yù)警預(yù)報(bào)及其防控決策提供科學(xué)依據(jù)，為保障福建省乃至我國養(yǎng)禽業(yè)持續(xù)健康發(fā)展、禽產(chǎn)品有效供給及公共安全、社會(huì)穩(wěn)定發(fā)揮重要的作用。

1 材料與方法

1.1 毒株和來源試驗(yàn)所涉及的福建及周邊省份禽流感H5Nx毒株或樣品如下： A/chicken/China/FJ-XZ-18-87/2015(H5N8)(簡稱FJ1519)、A/chicken/Chian/FJ-XZ-18-27/2016(H5N6)(簡稱FJ1682)、A/Pigeon/Fujian/1.17_FZHX0104-O/2017(H5N6)、A/Goose/Fujian/3.15_FZHX0008-C/2018(H5N6)、A/Muscovy duck/China/H5N6/2020(H5N6)、A/goose/Fujian/11.3_FZHX1102-C/2016(H5N6)、A/goose/Fujian/10.26_FZHX0014-O/2017(H5N6)、A/goose/Fujian/3.15_FZHX00-07-C/2018(H5N6)、A/duck/Jiangxi/2.28NCNP-23K3-OC/2018(H5N6)，其中FJ1519、FJ1682來源于福建活禽市場(chǎng)棉拭子樣品。GenBank下載國內(nèi)不同時(shí)期的代表株，以及2011—2021年中國東南地區(qū)以及周邊日本、韓國等H5Nx毒株(H5N1、H5N2、H5N5、H5N6和H5N8亞型)，對(duì)位于同一進(jìn)化分支的相同年份的毒株進(jìn)行刪除。

1.2 HA基因RT-PCR擴(kuò)增將病料勻漿液8 000 r/min離心5 min，取250 μL上清與750 μL TRIzol混合，再加入200 μL預(yù)冷的氯仿，充分混勻后冰浴5 min，隨后12 000 r/min離心15 min，取上清加入等體積的異丙醇，混勻，-20℃沉淀1 h。12 000 r/min離心15 min，棄上清，用DEPC處理過的水重懸，-20℃ 保存。用流感的反轉(zhuǎn)錄引物Uni-12，按照AMV反轉(zhuǎn)酶說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PCR擴(kuò)增以cDNA為模板，反應(yīng)體系為50 μL，反應(yīng)體系為：10×buffer 5 μL，dNTP mixture (2.5 nmol/L)4.0 μL，Ex-Taq DNA polymerase 0.5 μL，引物(20 μmol/L)各1.0 μL，模板cDNA 1 μL，ddH2O 37.5 μL。反應(yīng)條件如下：94℃預(yù)變性5 min;94℃ 30 s，55℃ 35 s，72℃ 2 min，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min。取5 μL 產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果。

1.3 HA基因遺傳進(jìn)化分析PCR擴(kuò)增得到的HA基因PCR產(chǎn)物經(jīng)切膠回收試劑盒純化后與pMD-18T載體連接，連接反應(yīng)體系如下：PCR純化產(chǎn)物 50 ng，pMD-18T載體 1 μL，ddH2O補(bǔ)充到5 μL轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，PCR法鑒定重組質(zhì)粒，陽性質(zhì)粒送大連寶生物公司測(cè)序。應(yīng)用Lasergene軟件包Seqman軟件進(jìn)行序列拼接。NCBI網(wǎng)站上批量下載帶FASTA格式的HA基因序列及其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，應(yīng)用MEGA-X軟件中ClustalW對(duì)48株病毒HA序列進(jìn)行同源序列比對(duì)，鄰近歸并法構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(Bootstrap = 1 000)[12]。Lasergene軟件包中 MegAlign進(jìn)行氨基酸同源性比較。

1.4 同源建模和進(jìn)化保守性分析基于同源序列比對(duì)結(jié)果，選取其中1個(gè)毒株FJ1519進(jìn)行同源建模。將FASTA格式的FJ1519 HA序列上傳到SWISS-MODEL在線軟件進(jìn)行同源建模[13]，選擇鴨源毒株A/mallard/Vietnam/3/2003(H5N1)(PDB ID：6PCX)為模型(FJ1519與其同源性為92.66%，符合同源建模的條件)，建模得到的FJ1519毒株HA蛋白結(jié)構(gòu)通過PyMOL和Photoshop軟件作圖。通過Consurf在線軟件進(jìn)行同源進(jìn)化分析，選擇國際通用的1968年大流感的代表毒株A/Aichi/2/1968(H3N2)對(duì)HA序列排序[14]，選擇比對(duì)的序列為500條，選擇的蛋白數(shù)據(jù)庫為UNIREF-90，計(jì)算方法選擇貝葉斯(Bayesian)算法，同源多序列比對(duì)選擇的方法為ClustalW。

2 結(jié)果

2.1 HA基因同源進(jìn)化分析通過BLAST在線分析，F(xiàn)J1519毒株HA基因序列與A/goose/Eastern China/CZ/2013(H5N8)HA基因序列同源性最高，為99.00%；FJ1682與A/duck/China/FJ1602/2016(H5N6)同源性最高，為99.65%。通過HA核苷酸序列遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)J1519和FJ1682分別屬于2個(gè)不同的大分支，其中FJ1519與A/mallard/Shanghai/SH-9/2013、A/Von Schrenck's bittern/Jiangxi/Y9/2014處于同一進(jìn)化分支，F(xiàn)J1682與A/whooper swan/Hokkaido/X12/2017處于同一進(jìn)化分支。FJ1519、FJ1682與福建省近5年分離得到的H5Nx毒株親緣關(guān)系比較近，同源性分別為93.10%～96.10%，94.50%～99.30%；與福建省2011年從野鴨上分離的毒株A/wild duck/Fujian/1/2011(H5N1)親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)，同源性分別為91.90%，91.30%；與國內(nèi)的H5亞型代表株A/Goose/Guangdong/1/96(Clade 0)親源關(guān)系比較遠(yuǎn)，同源性分別為92.40%，91.30%。A/Muscovy duck/China/H5N6/2020(H5N6)毒株與FJ1519株、FJ1682株同源性分別為93.10%，94.50%；與A/Goose/Fujian/3.15_FZHX0008-C/2018(H5N6)、A/goose/Fujian/3.15_FZHX0007-C/2018(H5N6)毒株同源性最高，均為97.90%；與天鵝源的毒株A/Whooper swan/Mongolia/25/2020(H5N6)、A/Whooper Swan/Khuvsgul/#1/2020(H5N6)同源性均為97.00%，并處于同一小進(jìn)化分支上，與天鵝源的日本毒株A/whooper swan/Miyagi/0402B001/2021(H5N8)同源性最低，為91.20%。從圖1可知，近10年來在我國東南地區(qū)流行的H5Nx毒株主要有H5N6和H5N8亞型，且這2種亞型位于不同的大聚類分支上(圖1)。本研究發(fā)現(xiàn)福建省分離的FJ1519毒株HA蛋白與從野鴨上分離得到的A/mallard/Shanghai/SH-9/2013(H5N8)同源性最高，為99.50%，說明這2個(gè)毒株來源于共同的祖先；江西省麻鴨上分離的A/Von Schrenck's bittern/Jiangxi/Y9/2014(H5N8)與A/mallard/Shanghai/SH-9/2013(H5N8)同源性高達(dá)99.60%，這3株病毒處于同一小進(jìn)化亞分支上。A/mallard/Shanghai/SH-9/2013(H5N8)分離地上海位于跨越中國、朝鮮、日本和韓國的東亞候鳥遷徙路線上，是監(jiān)測(cè)中國流感病毒的理想地點(diǎn)，從野鴨身上分離的新型重組H5N8 禽流感病毒通過候鳥在東亞飛行路線中傳播，韓國暴發(fā)的H5N8疫情支持了這種候鳥遷徙觀點(diǎn)的可能性[15]。此外，通過遺傳進(jìn)化分析，本研究也發(fā)現(xiàn)2020年廣東省鵝源A/goose/China/21FU-008/2020(H5N8)以及2021年山東省疣鼻天鵝分離得到的A/Mute Swan/China/Shandong1/2021(H5N8)與來自日本的A/whooper swan/Fukushima/0701B002/2021(H5N8)、A/whooper swan/Miyagi/0402B001/2021(H5N8)這2個(gè)毒株處于同一進(jìn)化亞分支上，說明這幾株病毒HA基因來源于共同的祖先，表明東南地區(qū)鳥類的遷徙可能引起不同流感病毒之間的重組，并在病毒傳播過程中發(fā)揮重要的作用[10,16]。

·.本研究所涉及的福建分離株

2.2 HA氨基酸序列分析本研究所涉及的中國東南地區(qū)Clade 2.3.3.4分離株HA序列氨基酸裂解位點(diǎn)主要有RERRRKR↓G、REKRRKR↓G 2種形式，較為特別的是A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)裂解位點(diǎn)為RERRRKKR↓G、A/Goose/Eastern China/1112/2011(H5N2)裂解位點(diǎn)為RGKRRKR↓G，所有Clade 2.3.3.4分支HA蛋白裂解位點(diǎn)均為連續(xù)的堿性氨基酸。A/wild duck/Fujian/1/2011裂解位點(diǎn)為IEKRRKR↓G，F(xiàn)J1519裂解位點(diǎn)為REKRRKR↓G，其他裂解位點(diǎn)為RERRRKR↓G，上述這些毒株HA蛋白裂解位點(diǎn)均符合HPA1特征(表1)。

表1 H5Nx流感毒株HA蛋白序列關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)

以FJ1519毒株為例，HA核苷酸序列長度為1 704 bp，編碼568個(gè)氨基酸，通過在線軟件SignalP和TMHMM預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，HA序列全長N端含有信號(hào)肽(16個(gè)氨基酸)，C端含有1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(23個(gè)氨基酸)，其中17～531位氨基酸為胞外可溶性區(qū)段。進(jìn)一步通過氨基酸進(jìn)化保守性分析，結(jié)論發(fā)現(xiàn)多數(shù)氨基酸位點(diǎn)在遺傳進(jìn)化上是保守的(絳紫色)，但有一些位點(diǎn)較為靈活(海藍(lán)色)，表明不同的H5Nx毒株之間存在抗原差異(圖2)。通過Bioedit同源序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)研究中所涉及中國福建地區(qū)分離株HA氨基酸序列均含有6個(gè)糖基化位點(diǎn)，氨基酸基序分別為NSTE(或NSTK)、NVTV、NNTN、NPTT(或NPDT)、NSSM、NGTY和NGSL，其中第209位氨基酸由于其后1位氨基酸為Pro，在天冬酰胺之后的脯氨酸在多數(shù)情況下會(huì)使天冬酰胺無法接近來阻止N-連接的糖基化。因此，NPTT(或NPDT)這個(gè)位點(diǎn)需要進(jìn)一步證實(shí)。

圖2 HA蛋白氨基酸進(jìn)化保守性分析

2.3 病毒分子特征流感病毒受體結(jié)合特點(diǎn)與宿主嗜好密切相關(guān)，對(duì)唾液酸受體的結(jié)合偏好性研究是了解受體結(jié)合位點(diǎn)突變的重要領(lǐng)域，人流感病毒HA偏好識(shí)別α-2,6-唾液酸(人源受體)，而禽流感病毒HA優(yōu)先識(shí)別α-2,3-唾液酸(禽源受體)[17-18]。通過HA同源序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)比對(duì)，研究發(fā)現(xiàn)H5Nx亞型Clade 2.3.4.4受體主要結(jié)合位點(diǎn)由Y98、W153和H183這3個(gè)氨基酸殘基組成(以H3排序)，側(cè)壁由130-loop(A138)、190-螺旋(E190、L194、Y195)和220-loop(G225和G228)這3個(gè)二級(jí)結(jié)構(gòu)組成[17,19]，結(jié)合以往研究報(bào)道與受體結(jié)合相關(guān)的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)Y98、W153、H183、A138、E190、L194、Y195、G225、Q226和G228分別對(duì)應(yīng)于FJ1519毒株上Y106、A150、W165、H195、E202、L206、Y207、G237、G240，這幾個(gè)氨基酸位點(diǎn)在遺傳進(jìn)化上高度保守(圖2，3)。從表1可知，第193和227位氨基酸在遺傳進(jìn)化過程中易發(fā)生變異，從福建省分離得到的毒株上可知第193位氨基酸為R、D、N、K，227位點(diǎn)主要為S、Q、R，福建省分離得到的H5Nx禽流感病毒Clade 2.3.3.4 HA序列具有典型的禽類受體結(jié)合特征，尤其是，第226氨基酸均為谷氨酰胺(Q)，可賦予其結(jié)合到禽類受體的特性，優(yōu)先識(shí)別禽源α-2,3唾液酸[15,17]。禽源H5Nx Clade 2.3.3.4 HA序列第226位均為Q，人源代表株 A/Aichi/2/1968(H3N2)該位點(diǎn)為L，當(dāng)禽流感毒株HA序列中該位點(diǎn)從Q突變成L時(shí)，即可發(fā)生受體結(jié)合特性的轉(zhuǎn)變，從偏好結(jié)合禽源受體變成人源受體[17]。此外，HA上L226V和V226I突變，也會(huì)影響到病毒受體的結(jié)合能力發(fā)生變化。

虛線框代表的是受體結(jié)合區(qū)域；棍狀形式表示受體結(jié)合區(qū)氨基酸位點(diǎn)

3 討論

近年來，來自Gs/GD譜系重組的H5Nx HPA-IV相繼在許多國家暴發(fā)，通過遷徙水鳥的傳播在家養(yǎng)和野生鳥類中引起了多次洲際疫情，并對(duì)野生鳥類和家禽造成了重大影響，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)和人類健康構(gòu)成巨大的威脅[20-21]。自2014年以來，HPAI進(jìn)化支Clade 2.3.4.4病毒通過野生鳥類在全球范圍內(nèi)迅速傳播，并通過與當(dāng)?shù)亓餍械腖PAIV重新組合而進(jìn)化。多種水禽，包括野生和家養(yǎng)水禽，甚至動(dòng)物園鳥類，似乎都可以感染和/或傳播Clade 2.3.4.4進(jìn)化支的病毒。盡管一些研究指出，與親本Gs/GD(H5N1)相比，這些H5Nx重組株的毒力降低，但一般來說Clade 2.3.4.4感染的水禽仍表現(xiàn)出典型的HPAI病毒感染的臨床疾病、死亡率和病理特征[22-23]。研究前期分子流行病學(xué)研究表明H5N6、H5N8亞型是目前主要流行的H5Nx病毒亞型[2]，遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)這2種亞型在中國東南地區(qū)、中國臺(tái)灣地區(qū)、日本、朝鮮之間流行。不同流感病毒之間的重組被認(rèn)為是新病毒出現(xiàn)的主要機(jī)制，H5Nx型Clade 2.3.4.4亞分支流感病毒在野鳥、家禽的共循環(huán)導(dǎo)致了我國南方地區(qū)流感病毒的抗原性和基因多樣性。

這項(xiàng)研究中H5Nx毒株具有典型的禽類受體結(jié)合特征，而前期流行病學(xué)調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)福建省禽類群體中不斷出現(xiàn)新的重組和變異流感毒株，多數(shù) H9亞型(H9N2、H9N6)禽流感病毒以及H7N9和H6N2毒株傾向于結(jié)合人源受體，這增加了人感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)[2]。本研究中所涉及的毒株受體結(jié)合特征為禽源受體，第160位氨基酸均為丙氨酸(A)，以往研究發(fā)現(xiàn)H5Nx亞型病毒Clade 2.3.4.4分支HA蛋白上該位點(diǎn)具有雙受體結(jié)合特征，GAO等[24]發(fā)現(xiàn)H5N6亞型毒株中T160A突變體導(dǎo)致該毒株158位糖基化位點(diǎn)缺失，并影響到毒株致病性，從而引起宿主免疫應(yīng)答的改變。H5Nx毒株HA蛋白T160A取代或158位點(diǎn)去糖基化使得毒株獲得雙重受體結(jié)合特性，這可能是Clade 2.3.4 H5N1進(jìn)化到Clade 2.3.4.4 H5Nx 的重要分子標(biāo)記，可作為評(píng)價(jià)分離株大流行的關(guān)鍵指標(biāo)。與野生型毒株相比，S221P突變的H5N1毒株顯示出有限的雙重受體特異性；S221P與結(jié)合位點(diǎn)的K216E突變協(xié)同作用導(dǎo)致毒株與人源受體α-2,6-唾液酸的結(jié)合親和力增加[25]?？傊P(guān)鍵氨基酸受體結(jié)合位點(diǎn)突變導(dǎo)致受體親和力改變，并對(duì)病毒生物學(xué)功能比如感染和傳播效率產(chǎn)生影響，因此必須加強(qiáng)流感病毒HA蛋白上這些關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的監(jiān)測(cè)。

HA蛋白是A型流感病毒主要表面抗原和保護(hù)性抗原，是流感病毒重要的毒力因子，近年來研究專注于病毒上關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)改變對(duì)病毒毒力和致病性的影響。WU等[26]將A/duck/Zhejiang/W24/2013(H5N8)毒株連續(xù)在小鼠的肺-肺傳代，發(fā)現(xiàn)HA (A149V) 和 PB2 (E627K) 蛋白的突變導(dǎo)致感染小鼠后毒力增強(qiáng)，且病毒表現(xiàn)出組織嗜性范圍變廣，提示這2個(gè)突變體是H5N6在哺乳動(dòng)物宿主體內(nèi)適應(yīng)和增強(qiáng)致病性的關(guān)鍵因素。YU等[27]發(fā)現(xiàn)水禽源H5N5亞型Clade 2.3.4.4進(jìn)化支病毒在小鼠體內(nèi)連續(xù)傳代后可改變小鼠毒力，小鼠適應(yīng)變異毒株HA分子莖區(qū)F430L(H3排序)替代的病毒的MLD50(mouse lethal dose)降低了3.16倍，表明HA-F430L突變體對(duì)于H5N5水禽流感病毒對(duì)哺乳動(dòng)物的適應(yīng)性很重要。這項(xiàng)研究涉及的H5Nx亞型毒株Clade 2.3.4.4第430位氨基酸均為L，這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了持續(xù)監(jiān)測(cè)家禽是否含有這些氨基酸取代位點(diǎn)的H5Nx亞型AIV顯得尤為重要，表明傳代獲得的氨基酸變異的信息可以為宿主提供特異性變化的候選位點(diǎn)，為評(píng)估新出現(xiàn)毒株的風(fēng)險(xiǎn)提供參考。

通過氨基酸同源序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)不同毒株之間存在抗原差異，但前期實(shí)驗(yàn)室分離毒株免疫血清與Re-8標(biāo)準(zhǔn)抗原有較高血凝抑制價(jià)，Re-8標(biāo)準(zhǔn)血清與分離毒株有較高血凝抑制價(jià)，表明分離毒株與Re-8疫苗抗原性差異不明顯(另文發(fā)表)，商品化的流感疫苗目前仍適用，但實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)商用流感疫苗和目前流行的病毒之間存在氨基酸、抗原差異仍然是流感監(jiān)測(cè)環(huán)節(jié)的關(guān)鍵[28]。疫苗接種與未接種的國家之間，H5Nx病毒的進(jìn)化動(dòng)態(tài)存在差異，與從未使用過疫苗接種的國家中傳播的病毒相比，H5N1禽流感疫苗接種的國家中傳播的病毒種群的進(jìn)化率和陽性選擇位點(diǎn)的數(shù)量都更高[29]，表明疫苗接種不足對(duì)病毒進(jìn)化具有潛在影響。此外， H5Nx亞型病毒Clade 2.3.4.4進(jìn)化分支的廣泛宿主范圍(雞、鴨、鵝、鴿、鵪鶉、天鵝、秋鳽等)可能導(dǎo)致無法識(shí)別的病毒傳播，這也很好解釋了該譜系最近成功的全球化。最近在歐洲和北美家禽養(yǎng)殖場(chǎng)引起嚴(yán)重疫情的 H5N8 病毒已經(jīng)證實(shí)來自于在北極繁殖地相遇的遷徙鴨、天鵝和鵝[11]。本研究也發(fā)現(xiàn)病毒重組與傳播與洲際野生鳥類遷徙密切相關(guān)，新型重組病毒的出現(xiàn)及其在鳥類種群中的傳播備受關(guān)注。近年來中國水鳥數(shù)量顯著增加，中國被認(rèn)為是全球水鳥攜帶流感病毒的最大宿主棲息地[6]。這些新型H5N6、H5N8病毒的共同傳播對(duì)家禽業(yè)、對(duì)人類健康均造成了巨大的威脅[22,30]，因此，將來應(yīng)加強(qiáng)對(duì)福建省濕地遷徙鳥類的流感監(jiān)測(cè)。

禽流感是由禽類宿主生態(tài)、病毒特征和環(huán)境變量之間錯(cuò)綜復(fù)雜的相互作用形成[31]，它在人類宿主中有效感染和傳播的潛能是一個(gè)重大的全球公共健康問題[15]。野生鳥類的遷徙在病毒傳播過程中發(fā)揮重要的作用，因此，對(duì)中國東南重要的野生鳥類聚集區(qū)和家禽進(jìn)行長期和系統(tǒng)的流感監(jiān)測(cè)，并提供有價(jià)值的流行病學(xué)信息，有助于對(duì)家禽乃至人類健康的威脅提供早期預(yù)警，能夠?qū)π鲁霈F(xiàn)的H5Nx病毒的威脅起到良好的警示作用。此外，應(yīng)根據(jù)抗原差異優(yōu)化疫苗配方和疫苗運(yùn)載系統(tǒng)以提高疫苗效力，這將為預(yù)防新型禽流感的暴發(fā)和評(píng)估人畜共患病的可能性提供參考。