鄭菲菲，單宇峰，祝東梅，楊禧文，陳 菲，葉 可，馬 帥，王玉軍

(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)養(yǎng)殖國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，武漢 430070)

黃鱔(Monopterusalbus)隸屬于合鰓魚科黃鱔屬，常棲息于稻田、河流湖泊等淤泥質(zhì)水底層，適應(yīng)能力強(qiáng)。黃鱔味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，富含各種微量元素及不飽和脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，作為滋補(bǔ)佳品深受人們喜愛，因而市場(chǎng)需求大幅增加，野生黃鱔已供不應(yīng)求，目前多采用網(wǎng)箱進(jìn)行高密度集約化養(yǎng)殖[1,2]。在集約化養(yǎng)殖過程中黃鱔會(huì)過量食用投喂的高蛋白、高脂肪餌料，但其消化能力較其它淡水肉食性魚類弱，過量及不均衡的飲食會(huì)增加胃腸及肝膽的負(fù)擔(dān)，加之高密度的養(yǎng)殖環(huán)境導(dǎo)致水質(zhì)惡化快，極易引發(fā)黃鱔出血病、腸炎病、赤皮病、腐皮病等，甚至造成大量死亡，嚴(yán)重影響了黃鱔產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[2,3]。

在長(zhǎng)期進(jìn)化過程中，魚類與其胃腸道內(nèi)的微生物間互惠雙贏，形成了復(fù)雜的共生關(guān)系[4]。研究表明，不同養(yǎng)殖模式會(huì)對(duì)魚類腸道微生物菌群產(chǎn)生影響。趙月季等[5]研究發(fā)現(xiàn)，4種養(yǎng)殖模式下凡納濱對(duì)蝦(Penaeusvannamei)腸道微生物群落結(jié)構(gòu)存在顯著差異，而淡水池塘養(yǎng)殖模式腸道微生物菌群最穩(wěn)定。此外，邱楚雯等[6]研究發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖模式能夠通過改變水體中氮、磷的含量對(duì)水體和暗紋東方鲀(Takifuguobscures)腸道的微生物群結(jié)構(gòu)產(chǎn)生一定的影響。盛鵬程等[7]發(fā)現(xiàn)投喂不同飼糧也會(huì)對(duì)烏鱧(Channaargus)腸道生物群落結(jié)構(gòu)和微生物多樣性產(chǎn)生影響，丁紅秀等[8]研究發(fā)現(xiàn)4種不同生境來源的草魚(Ctenopharyngodonidellus)腸道微生物組成和群落特征隨著養(yǎng)殖水體的餌料和環(huán)境因子的變化而產(chǎn)生較大差異。另外，魚類腸道不同區(qū)段的生理生化環(huán)境也會(huì)對(duì)相應(yīng)區(qū)段微生物菌群產(chǎn)生影響[9]。但是，目前關(guān)于不同養(yǎng)殖模式下黃鱔腸道微生物的差異仍未有系統(tǒng)研究。

目前，黃鱔多以網(wǎng)箱養(yǎng)殖為主，主要分為投喂魚漿與投喂水蚯蚓，以及與蝦蟹混放散養(yǎng)等養(yǎng)殖模式。究竟哪種養(yǎng)殖模式更有益于黃鱔腸道菌群值得探究。因此，本實(shí)驗(yàn)通過高通量測(cè)序的方法，對(duì)蝦塘散養(yǎng)、蟹塘散養(yǎng)、網(wǎng)箱投喂魚漿及網(wǎng)箱投喂水蚯蚓4種養(yǎng)殖模式下黃鱔胃及腸道的微生物進(jìn)行檢測(cè)，分析比對(duì)不同養(yǎng)殖模式黃鱔胃及腸道微生物菌群的異同，探究不同養(yǎng)殖模式對(duì)黃鱔胃及腸道微生物菌群的影響，以期為黃鱔的健康養(yǎng)殖提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

4種不同養(yǎng)殖模式黃鱔采取自仙桃市西流河鎮(zhèn)，每種養(yǎng)殖模式隨機(jī)選取9尾，體重約為(117.75±31.77) g。用MS222麻醉后，用75%酒精擦拭黃鱔體表消毒，迅速在BSC-1300型無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)解剖，分別取胃和腸道[10]，每3尾黃鱔的相同位置的部分組織放入一個(gè)2 mL凍存管中混為一個(gè)樣本，每種養(yǎng)殖模式取3個(gè)混合樣本。樣品取好后迅速放于液氮中凍存?zhèn)溆?。蝦塘散養(yǎng)組、蟹塘散養(yǎng)組、網(wǎng)箱投喂魚漿組和網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組的黃鱔樣品編號(hào)分別為：A、B、C和D；胃編號(hào)為X，腸道編號(hào)為Y。

1.2 DNA提取和PCR擴(kuò)增

用DNA提取試劑盒(Omega Bio-Tek公司，美國(guó))提取黃鱔胃、腸微生物總DNA，用Nanodrop NC2000定量DNA，同時(shí)用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量。

兩步建庫(kù)法：第一步以DNA為模板，設(shè)計(jì)帶接頭的引物進(jìn)行PCR，第二步以第一步的PCR產(chǎn)物為模板在9902型96 well PCR儀進(jìn)行PCR。用16S rRNA V3-4區(qū)通用引物(338F:5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′,806R:5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)進(jìn)行目標(biāo)區(qū)域PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增體系(30 μL)：基因組DNA 50 ng±20%、338F(10 μmol/L) 0.9 μL、806R(10 μmol/L) 0.9 μL、KOD FX Neo Buffer 15 μL、dNTP(2 mmol/L each) 6 μL、KOD FX Neo(NEB公司，美國(guó)) 0.6μL、ddH2O補(bǔ)至30 μL；PCR程序：98 ℃ 2 min；98 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min，4 ℃直到停止。Solexa PCR(20 μL體系)：目的區(qū)域PCR純化產(chǎn)物5 μL、2 μmol/L MPPI-a 2.5 μL、2μmol/L MPPI-b 2.5 μL、2×Q5 HF MM 10 μL，反應(yīng)條件：98 ℃ 30 s；98 ℃ 10 s，65 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，10個(gè)循環(huán)；72 ℃ 30 s；72 ℃ 5 min；1.8%的瓊脂糖凝膠，DYY-6C型電泳儀電壓為120 V，電泳40 min；將PCR產(chǎn)物根據(jù)電泳定量結(jié)果，按照質(zhì)量比1∶1進(jìn)行混樣；混樣后，采用OMEGA DNA純化柱(Monarch公司，美國(guó))進(jìn)行過柱純化；1.8%的瓊脂糖凝膠，120 V 40 min電泳后，切目的片段并回收；構(gòu)建好的文庫(kù)在武漢擎科生物技術(shù)有限公司用illumina Novaseq6000 PE250進(jìn)行高通量測(cè)序。

1.3 測(cè)序數(shù)據(jù)分析

用Trimmomatic v0.33軟件對(duì)測(cè)序得到的原始序列進(jìn)行過濾，然后使用cutadapt 1.9.1軟件進(jìn)行引物序列的識(shí)別與去除，得到不包含引物序列的高質(zhì)量序列，使用QIIME2 2020.6軟件中的DADA2方法進(jìn)行去噪并去除嵌合體序列，得到最終有效序列；利用USEARCH version 10.0軟件在相似性97%的水平上對(duì)序列進(jìn)行可操作分類單元(operational taxonomic unit,OUT)分析；再利用R語(yǔ)言工具繪制稀釋性曲線圖、等級(jí)豐度曲線圖、Venn圖、群落結(jié)構(gòu)圖和熱圖；使用QIIME2軟件對(duì)樣品Alpha多樣性指數(shù)進(jìn)行評(píng)估，分析樣品間物種多樣性。

2 測(cè)序結(jié)果

2.1 樣品測(cè)序質(zhì)量分析

基于Illumina Novaseq測(cè)序及數(shù)據(jù)預(yù)處理總共獲得3 689 315條有效序列；以97%相似性水平為標(biāo)準(zhǔn)劃分各樣品的OTU數(shù)量。利用已測(cè)得的rDNA序列中已知的各OTU相對(duì)比例與其相對(duì)應(yīng)的OTU數(shù)量的期望值來構(gòu)建稀釋性曲線，各樣品曲線都達(dá)到平臺(tái)期(圖1)，等級(jí)豐度曲線反映出4組黃鱔胃腸道內(nèi)物種分布均勻(圖2)。綜上所述，說明隨著測(cè)序深度的增加測(cè)序量達(dá)到飽和且測(cè)序質(zhì)量比較好、數(shù)據(jù)量合理，測(cè)序的深度基本能夠覆蓋不同養(yǎng)殖模式黃鱔胃腸道微生物的所有物種。

圖1 不同養(yǎng)殖模式樣品高通量測(cè)序結(jié)果的稀釋曲線Fig.1 The rarefaction curve of high-through sequencing result of samples from different culture modes

2.2 胃腸道微生物Alpha多樣性分析

根據(jù)4種養(yǎng)殖模式中黃鱔胃腸道微生物OTU數(shù)量，進(jìn)行Alpha指數(shù)分析。通過覆蓋率來評(píng)估抽樣的完整性，本研究中各樣品OTUs的覆蓋率是99.95%～100%，說明各樣品中的全部微生物種類幾乎都被檢測(cè)到(表1)。OTU、Chao1和ACE表征豐富度，數(shù)值越高，表明群落的總數(shù)越高即豐富度越高；Shannon和Simpson指數(shù)表征物種多樣性，數(shù)值越高，表明群落的多樣性越高。

圖2 等級(jí)豐度曲線圖Fig.2 Curves of rank abundance

4種養(yǎng)殖模式胃的OTU、Chao1和ACE指數(shù)表明，網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組和蝦塘散養(yǎng)組菌落豐富度都較高，網(wǎng)箱投喂魚漿組次之，蟹塘散養(yǎng)組豐富度最低；胃的Shannon和Simpson指數(shù)表明網(wǎng)箱投喂魚漿組的物種多樣性最高，其次是網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組和蝦塘散養(yǎng)組，物種多樣性最低的是蟹塘散養(yǎng)組。

4種養(yǎng)殖模式腸道的OTU、Chao1和ACE指數(shù)表明，網(wǎng)箱投喂魚漿組和網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組的黃鱔菌落豐度都較高，蟹塘散養(yǎng)組次之，蝦塘散養(yǎng)組豐富度最低；腸道的Shannon和Simpson指數(shù)表明網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組的物種多樣性最高，其次是網(wǎng)箱投喂魚漿組和蝦塘散養(yǎng)組，物種多樣性最低的是蟹塘散養(yǎng)組。

表1 不同養(yǎng)殖模式黃鱔胃腸道微生物Alpha多樣性分析Tab.1 Alpha-diversity of stomach and intestines microbial community of M.albus in different culture modes

2.3 Venn圖分析

為分析4種不同養(yǎng)殖模式胃腸道樣品中共有和獨(dú)有的OTU的數(shù)目，根據(jù)樣本的OTU繪制Venn圖。如圖3所示，蝦塘散養(yǎng)組、蟹塘散養(yǎng)組、網(wǎng)箱投喂魚漿組和網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組胃的OTU數(shù)分別為474、337、392和470個(gè)，共有的OTU數(shù)量為152個(gè)，特有的OTU數(shù)量分別為89、30、43和103個(gè)，分別占各自所有OTU總數(shù)的18.78%、8.90%、10.97%和21.91%。4種養(yǎng)殖模式腸道的OTU數(shù)量分別為308、389、478和458個(gè)，共有的OTU數(shù)量為143個(gè)，特有的OTU數(shù)量分別為49、50、86和83個(gè)，分別占各自所有OTU總數(shù)的15.91%、12.85%、17.99%和18.12%。

圖3 不同養(yǎng)殖模式樣品OTU分布Venn圖Fig.3 OTU Venn analysis of samples from different culture modes

2.4 腸道微生物群落結(jié)構(gòu)和組成分析

樣品中所有OUT經(jīng)物種注釋，在門和屬的水平分析不同組別的優(yōu)勢(shì)菌種。圖4為門水平上微生物的相對(duì)豐度，4種養(yǎng)殖模式下黃鱔的胃腸道微生物主要由厚壁菌門、變形菌門、放線菌門、擬桿菌門和疣微菌門組成，但優(yōu)勢(shì)菌群存在一定差異。不同養(yǎng)殖模式黃鱔消化道的不同區(qū)段優(yōu)勢(shì)菌群也不同，4種養(yǎng)殖模式下黃鱔胃的最主要優(yōu)勢(shì)菌均是厚壁菌門，變形菌門在蝦塘散養(yǎng)、蟹塘散養(yǎng)和網(wǎng)箱投喂魚漿養(yǎng)殖環(huán)境下也較多，疣微菌門只在網(wǎng)箱投喂魚漿及網(wǎng)箱投喂水蚯蚓養(yǎng)殖環(huán)境下占優(yōu)勢(shì)，擬桿菌門只在網(wǎng)箱投喂水蚯蚓養(yǎng)殖環(huán)境下占有優(yōu)勢(shì)。除蟹塘散養(yǎng)外，其余3種養(yǎng)殖模式黃鱔腸道的優(yōu)勢(shì)菌均為厚壁菌門，蟹塘散養(yǎng)養(yǎng)殖模式中黃鱔腸道的優(yōu)勢(shì)菌為變形菌門。

圖4 門水平上微生物相對(duì)豐度Fig.4 Microbial community structure of different samples in phylum

圖5為屬水平上微生物的相對(duì)豐度，4種養(yǎng)殖模式黃鱔消化道優(yōu)勢(shì)菌群均差異明顯。就黃鱔胃而言，蝦塘散養(yǎng)和網(wǎng)箱投喂魚漿組的優(yōu)勢(shì)菌群為韋榮球菌屬(Veillonella)，分別占細(xì)菌總數(shù)的51.81%、38.53%；蟹塘散養(yǎng)組優(yōu)勢(shì)菌群為韋榮球菌屬和綠膿桿菌屬(Pseudomonas)，分別占細(xì)菌總數(shù)的25.46%、27.22%；網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組的優(yōu)勢(shì)菌群為糞桿菌屬(Faecalibacterium)與嗜黏蛋白阿克曼菌屬(Akkermansia)，分別占細(xì)菌總數(shù)的22.13%、15.53%。綜上所述，除網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組外，其余3種養(yǎng)殖模式中黃鱔胃的優(yōu)勢(shì)菌群都有韋榮球菌屬。就黃鱔腸道而言，除蝦塘散養(yǎng)組的優(yōu)勢(shì)菌為瘤胃球菌屬(Ruminococcus)，占細(xì)菌總數(shù)的26.56%，其余3種養(yǎng)殖模式的優(yōu)勢(shì)菌群中都有雙歧桿菌屬。其中蟹塘散養(yǎng)組的優(yōu)勢(shì)菌為克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)，分別占細(xì)菌總數(shù)的25.70%和23.58%；網(wǎng)箱投喂魚漿組的優(yōu)勢(shì)菌為雙歧桿菌屬，占細(xì)菌總數(shù)的24.63%；網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組的優(yōu)勢(shì)菌為雙歧桿菌屬和流感嗜血桿菌屬(Haemophilus)，分別占細(xì)菌總數(shù)的13.28%、14.99%。

圖5 屬水平上微生物相對(duì)豐度Fig.5 Microbial community structure of different samples in the genus

2.5 腸道微生物群落相對(duì)豐度

對(duì)黃鱔胃腸道微生物在屬水平上進(jìn)行聚類式熱圖分析，由圖6可看出，4種養(yǎng)殖模式下黃鱔胃腸道微生物主要聚為兩大分支，多數(shù)胃樣品聚為一支，多數(shù)腸道樣品聚為一支。

就黃鱔胃而言，蝦塘散養(yǎng)組中的韋榮球菌屬豐度顯著高于其它組；蟹塘散養(yǎng)組中綠膿桿菌屬和柯林斯菌屬(Collinsella)豐度顯著高于其它組；網(wǎng)箱投喂魚漿組中霍爾德曼氏菌屬(Holdemanella)、韋榮球菌屬、疣微菌屬等豐度顯著高于其它組；網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組中豐度較高的菌群有糞桿菌屬、嗜黏蛋白阿克曼菌屬、擬桿菌屬(Bacteroides)和另枝菌屬(Alistipes)等。

就黃鱔腸道而言，蝦塘散養(yǎng)組中瘤胃球菌屬、毛螺菌科的豐度顯著高于其它組；蟹塘散養(yǎng)組中豐度顯著較高的為克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、腸桿菌屬(Enterobacter)、雙歧桿菌屬和埃希氏菌屬(Escherichia)；羅氏菌屬(Roseburia)、考拉桿菌屬(Phascolarctobacterium)和雙歧桿菌屬等在網(wǎng)箱投喂魚漿組中豐度顯著較高；網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組中流感嗜血桿菌屬、罕見小球菌屬(Subdoligranulum)等豐度較高。

圖6 微生物群落在屬水平的熱圖分析Fig.6 Microbial community heatmap analysis of different samples in genus

3 討論

綜上所述，蟹塘散養(yǎng)組胃腸道微生物物種多樣性和豐度均最低，而網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組黃鱔胃腸道微生物多樣性和豐度都較高。研究表明，腸道微生物多樣性與機(jī)體的健康密切相關(guān)，腸道微生物多樣性的降低可能會(huì)成為多種疾病的誘因，例如炎癥性腸病等[11]。朱昊俊等[12]也發(fā)現(xiàn)，黃顙魚腸道微生物多樣性更高，穩(wěn)定性更好，對(duì)疾病的抵抗力可能更強(qiáng)。但腸道菌群是否健康不僅和腸道微生物多樣性相關(guān)，還和優(yōu)勢(shì)菌群關(guān)系密切。比如，飼喂畜禽內(nèi)臟飼料的烏鱧腸道細(xì)菌群落多樣性比飼喂冰鮮魚組的高，但是其存在潛在致病菌，從烏鱧腸道微生物健康角度考慮，冰鮮魚較畜禽內(nèi)臟更適合作為烏鱧的飼糧[7]。

分析發(fā)現(xiàn)4種養(yǎng)殖模式下黃鱔胃腸道微生物主要由厚壁菌門、變形菌門、擬桿菌門、放線菌門和疣微菌門組成。研究表明，異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)和斑馬魚(Daniorerio)腸道都有核心菌群[13,14]，本研究發(fā)現(xiàn)除蟹塘散養(yǎng)組黃鱔腸道的優(yōu)勢(shì)菌為變形菌門，其余3種養(yǎng)殖模式黃鱔胃腸道優(yōu)勢(shì)菌群均為厚壁菌門。推測(cè)不同養(yǎng)殖模式對(duì)菌群種類影響不大，只是影響各菌群所占比例；黃鱔胃腸道微生物的核心菌群可能是厚壁菌門。朱昊俊等[12]研究發(fā)現(xiàn)，厚壁菌門豐度的提高有利于從相同飲食中獲取更多能量。并且有研究報(bào)道指出，變形菌門豐度的增高可能是腸道菌群失衡的一個(gè)重要標(biāo)志[15]。

通過分析研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)蝦塘散養(yǎng)組、蟹塘散養(yǎng)組和網(wǎng)箱投喂魚漿組養(yǎng)殖模式中黃鱔胃的優(yōu)勢(shì)菌種均為韋榮球菌屬。研究發(fā)現(xiàn)韋榮球菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素會(huì)引發(fā)慢性炎癥，誘導(dǎo)細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10的釋放[16]；ZHAO等[17]發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期食用高脂肪、低纖維的食物會(huì)導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，尤其是革蘭氏陰性菌增多，從而產(chǎn)生過多的內(nèi)毒素引發(fā)炎癥反應(yīng)，并造成肥胖、糖尿病等慢性病的發(fā)生，推測(cè)蝦塘散養(yǎng)、蟹塘散養(yǎng)與網(wǎng)箱魚漿養(yǎng)殖模式存在較高的潛在患病風(fēng)險(xiǎn)，并且黃鱔由于貪食高脂肪、高蛋白餌料，養(yǎng)殖過程中經(jīng)常暴發(fā)的腸炎病可能與韋榮球菌相關(guān)。網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組養(yǎng)殖模式中黃鱔胃中糞桿菌屬和嗜黏蛋白阿克曼菌屬占比最多。糞桿菌在人腸道中分布廣泛，是健康的標(biāo)志，并有研究表明糞桿菌屬的普拉梭菌在腸道黏膜屏障保護(hù)及炎癥抑制等方面發(fā)揮重要作用，在益生菌開發(fā)或生物治療藥物方面前景光明[18,19]；嗜黏蛋白阿克曼菌也是腸道菌群中的“明星菌”，在抗衰老、抗腫瘤、機(jī)體代謝、免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用[20]。蝦塘散養(yǎng)組黃鱔腸道的優(yōu)勢(shì)菌群為瘤胃球菌屬，這可能與蝦塘散養(yǎng)組黃鱔捕食小龍蝦有一定的關(guān)系；其它三種養(yǎng)殖模式黃鱔腸道的優(yōu)勢(shì)菌群均為雙歧桿菌，雙歧桿菌在促進(jìn)腸道健康、延緩衰老、提高機(jī)體免疫、降血糖、降血脂和降膽固醇等方面發(fā)揮功效[21]。黃鱔腸道優(yōu)勢(shì)菌群的差異也印證了前人的研究，魚類攝食不同類型的食物會(huì)影響腸道微生物菌群[8]。并且黃鱔胃和腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群存在差異，可能是由于其胃和腸道的組織結(jié)構(gòu)、消化酶活力等不同有關(guān)，胃的蛋白酶和淀粉酶活力高，有較強(qiáng)的消化能力但沒有吸收細(xì)胞分布，而腸道的吸收能力則較強(qiáng)[10,22]。

水蚯蚓是一種優(yōu)質(zhì)的開口餌料，研究發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)含有抑菌活性物質(zhì)[23]，飼料中添加抗菌肽可以調(diào)節(jié)黃鱔腸道菌群結(jié)構(gòu)，提高菌群多樣性[24]。并且，江為民等[25]發(fā)現(xiàn)用水蚯蚓搭配少量配合飼料在網(wǎng)箱中養(yǎng)殖黃鱔成活率高，品質(zhì)好，經(jīng)濟(jì)效益高。

4 結(jié)論

綜合比較發(fā)現(xiàn)，網(wǎng)箱投喂水蚯蚓組黃鱔消化道微生物豐度和多樣性都較高，胃腸道益生菌群占比高，潛在的致病菌少；而網(wǎng)箱投喂魚漿的養(yǎng)殖模式雖然黃鱔生長(zhǎng)較快，但是魚漿對(duì)水質(zhì)污染嚴(yán)重易導(dǎo)致疾病大爆發(fā)，并且胃腸道潛在的致病菌較多，養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)高。因此，在養(yǎng)殖黃鱔時(shí)，推薦使用網(wǎng)箱養(yǎng)殖并適當(dāng)調(diào)整養(yǎng)殖密度，水蚯蚓作為開口餌料或育肥餌料，養(yǎng)殖過程中則按照一定比例添加魚漿與配合飼料以降低成本。