馬明芳 李冬梅

大理大學藥學院，云南 大理 671000

泡核桃(JuglanssigillateDode.)系胡桃科胡桃屬植物，又名茶核桃(云南)、鐵核桃。泡核桃青皮即為泡核桃的外表果皮，未成熟時包裹在果實核外，果實成熟后自然脫落[1-3]。胡桃屬植物具有悠久的用藥歷史，具有補腎固精、溫肺定喘、清熱燥濕、清腸明目等功效[4]。據(jù)文獻報道泡核桃青皮中含有黃酮類、萘醌類、二芳基庚烷類、萜類、鞣質(zhì)類等多種化學成分[5-8]。目前對于泡核桃青皮的研究較少，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，泡核桃青皮70%甲醇提取物具有抗腫瘤活性，為了充分利用好當?shù)氐闹参镔Y源，促進泡核桃青皮藥用價值的開發(fā)與利用，本文對產(chǎn)自大理州漾濞縣的泡核桃青皮化學成分進行了研究，從泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位分離得到了8個化合物，分別鑒定為：β-谷甾醇 (1)、熊果酸 (2)、白樺酸 (3)、2α-羥基齊墩果酸 (4)、齊墩果酸 (5)、核桃酮(6)、4,5-二羥基-α-四氫萘醌 (7)、柚皮素 (8)。其中，化合物2～5首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (BUCHI Rotavapor R210)；低溫冷卻循環(huán)泵 (鞏義市予華儀器有限公司)；梅特勒萬分之一電子分析天平；400MHz全數(shù)字化超導核磁共振譜儀 (AvanceIII400MHZ，瑞士BRUKER公司)；UV-2101紫外分光光度計 (日本島津公司)；柱層析用硅膠 (80～100目，300～400目，硅膠H，青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠 (25～100μm, Pharmacia公司)；GF254薄層層析硅膠板 (青島海洋化工廠)。實驗所用試劑石油醚、丙酮、氯仿、甲醇、乙酸乙酯均為工業(yè)純，經(jīng)重蒸后使用。泡核桃青皮2019年9月采自大理州漾濞縣，經(jīng)大理大學藥學院生藥教研室張德全教授鑒定為胡桃科胡桃屬植物泡核桃 (JuglanssigillataDode.)的青果皮，泡核桃青皮采集后經(jīng)低溫干燥供實驗所用。

2 提取與分離

取干燥后的泡核桃青皮，粉碎，共3.8 kg，采用浸漬法進行提取(70% 甲醇浸泡提取3次，每次24 h)，提取液經(jīng)減壓濃縮后得到浸膏101.1g。浸膏用甲醇溶解，干法拌樣，經(jīng)硅膠柱層析 (80～100目)，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和甲醇洗脫并分別回收溶劑，其中氯仿萃取部位浸膏為18.5g。氯仿部位浸膏經(jīng)硅膠 (80～100目)柱層析，石油醚-丙酮 (15∶1～1∶1)梯度洗脫，洗脫液經(jīng)硅膠TLC檢測后合并相似部分，得A～I共9個組分。其中B組分 (0.6 g)，經(jīng)過反復硅膠柱層析 (石油醚:乙酸乙酯 = 15∶1～12∶1)，分離得到化合物1 (39.1 mg)。C組分(1.0 g)，經(jīng)反復硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯 = 12∶1～10∶1)， Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分離得到化合物2 (93.0 mg)。D組分(1.4g)，經(jīng)反復硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯=12∶1，10∶1)，Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇 = 1∶1)，分離得到化合物3 (73.0 mg)和化合物4 (28.1 mg)。E組分(0.8 g)，經(jīng)反復硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯=10∶1～5∶1)、Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇= 1∶1)，分離得到化合物5 (16.0 mg)和化合物6 (40.2mg)。F組分(1.8 g)，經(jīng)反復硅膠柱層析 (石油醚∶乙酸乙酯=8∶1～5∶1)、Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分離得到化合物6 (160.5 mg)和化合物7 (24.0 mg)。G組分(1.5 g)，經(jīng)反復硅膠柱層析 (氯仿∶甲醇 = 100∶1～40∶1)、Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿∶甲醇=1∶1)，分離得到化合物8 (24.3 mg)。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1.1 化合物1 白色針狀結(jié)晶(石油醚-乙酸乙酯)。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.29 (1H, d,J=4.2 Hz, H-6), 3.55 (H, m, H-3), 0.92 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-21), 0.86 (3H, s, H-29), 0.84 (3H, s, H-27), 0.82 (3H, s, H-26), 0.77 (3H, s, H-20);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 29.8 (C-1), 31.6 (C-2), 71.8 (C-3), 40.3 (C-4), 140.7 (C-5), 121.7 (C-6), 29.4 (C-7), 31.9 (C-8), 50.1 (C-9), 36.2 (C-10), 22.7 (C-11), 37.2 (C-12), 42.3 (C-13), 56.7 (C-14), 24.3 (C-15), 28.5 (C-16), 56.0 (C-17), 11.9 (C-18), 19.1 (C-19), 36.2 (C-20), 19.8 (C-21), 33.9 (C-22), 26.0 (C-23), 45.8 (C-24), 29.1 (C-25), 19.4 (C-26), 21.2 (C-27), 23.1 (C-28), 11.9 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定化合物1為β-谷甾醇。

3.1.2 化合物2 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 5.10 (1H, brs, H-12), 3.32 (1H, m, H-3), 0.89 (3H, d,J=7.6 Hz, H-29), 0.80 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-30), 1.01 (3H, s), 0.90 (3H, s), 0.87 (3H, s), 0.82 (3H, s), 0.66 (3H, s);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 38.3 (C-1), 26.8 (C-2), 76.9 (C-3), 38.4 (C-4), 54.6 (C-5), 17.9 (C-6), 32.7 (C-7), 41.3 (C-8), 47.0 (C-9), 36.2 (C-10), 22.8 (C-11), 124.3 (C-12), 138.1 (C-13), 41.6 (C-14), 28.3 (C-15), 23.7 (C-16), 47.3 (C-17), 52.3 (C-18), 38.9 (C-19), 38.2 (C-20), 30.1 (C-21), 36.6 (C-22), 27.4 (C-23), 15.3 (C-24), 16.0 (C-25), 16.9 (C-26), 23.3 (C-27), 178.0 (C-28), 16.8 (C-29), 21.1 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故鑒定化合物2為熊果酸。

3.1.3 化合物3 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ:12.1 (1H, s, 28-COOH), 4.69 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-29β), 4.56 (1H, d,J= 2.0 Hz, H-29α), 3.37 (1H, t,J= 7.2 Hz, H-3), 1.64 (3H, s, H-30), 0.93 (3H, s, H-27), 0.87 (3H, s, H-26), 0.86 (3H, s, H-25), 0.76 (3H, s, H-23), 0.65 (3H, s, H-24);13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 177.7 (C-28), 150.7 (C-20), 110.1 (C-29), 77.2 (C-3), 55.9 (C-5), 55.3 (C-17), 50.4 (C-9), 49.0 (C-19), 47.1 (C-18), 42.4 (C-14), 40.7 (C-4), 39.8 (C-8), 39.0 (C-1), 38.7 (C-13), 38.0 (C-10), 37.2 (C-22), 34.4 (C-7), 32.2 (C-16), 30.5 (C-21), 29.7 (C-15), 28.6 (C-23), 27.6 (C-2), 25.5 (C-12), 20.9 (C-11), 19.4 (C-30), 18.4 (C-6), 16.4 (C-26), 16.3 (C-24), 16.2 (C-25), 14.9 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故鑒定化合物3為白樺酸。

3.1.4 化合物4 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, C5D5N)δ: 5.44 (1H, t,J= 3.0 Hz, H-12), 4.12 (1H, m, H-2), 3.45 (1H, d,J= 9.5 Hz, H-3), 3.33 (1H, dd,J= 13.5, 4.2 Hz, H-18), 1.18 (3H, s, H-23), 1.12 (3H, s, H-27), 1.00 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-24), 0.91 (3H, s, H-30), 0.90 (3H, s, H-29), 0.77 (3H, s, H-26);13C-NMR (100 MHz, C5D5N)δ: 46.9 (C-1), 68.0 (C-2), 81.6 (C-3), 39.7 (C-4), 54.8 (C-5), 18.4 (C-6), 33.3 (C-7), 39.5 (C-8), 37.8 (C-9), 39.0 (C-10), 24.2 (C-11), 122.0 (C-12), 145.3 (C-13), 42.5 (C-14), 27.9 (C-15), 24.3 (C-16), 48.2 (C-17), 42.3 (C-18), 45.8 (C-19), 30.4 (C-20), 33.7 (C-21), 32.8 (C-22), 28.9 (C-23), 17.2 (C-24), 16.9 (C-25), 18.1 (C-26), 25.5 (C-27), 180.0 (C-28), 32.8 (C-29), 24.2 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，故鑒定化合物4為2α-羥基齊墩果酸。

3.1.5 化合物5 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 12.0 (1H, s, 28-COOH), 5.24 (1H, brs, H-12), 3.20 (1H, dd,J= 7.6, 3.2 Hz, H-3), 2.80 (1H, dd,J= 8.8, 2.4 Hz, H-18), 1.26 (3H, s, H-27), 1.13 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, s, H-29), 0.93 (3H, s, H-30), 0.92 (3H, s, H-24), 0.78 (3H, s, H-23), 0.76 (3H, s, H-26);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 182.9 (C-28), 143.5 (C-13), 122.3 (C-12), 79.1 (C-3), 55.3 (C-5), 47.6 (C-9), 46.5 (C-17), 45.9 (C-19), 41.6 (C-14), 41.0 (C-18), 39.2 (C-8), 38.7 (C-4), 38.4 (C-1), 37.2 (C-10), 33.9 (C-29), 33.1 (C-7), 32.5 (C-21), 32.4 (C-22), 30.7 (C-20), 28.0 (C-23), 27.7 (C-15), 27.2 (C-2), 25.9 (C-27), 23.6 (C-16), 23.4 (C-30), 22.8 (C-11), 18.2 (C-6), 17.2 (C-26), 15.5 (C-24), 15.2 (C-25)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故鑒定化合物5為齊墩果酸。

3.1.6 化合物6 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 12.34 (1H, s, 8-OH), 7.44 (1H, t,J= 8.8 Hz, H-6), 6.99 (1H, d,J= 7.6 Hz, H-5), 6.89 (1H, d,J= 8.8 Hz, H-7), 4.88 (1H, dd,J= 7.6, 4.0 Hz, H-4), 2.95 (1H, m, H-2a), 2.61 (1H, m, H-2β), 2.30 (1H, m, H-3a), 2.14 (1H, m, H-3β);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 204.4 (C-1), 162.4 (C-8), 145.9 (C-5a), 137.1 (C-6), 117.5(C-5), 117.6 (C-7), 115.1 (C-8a), 67.6 (C-4), 34.5 (C-2), 31.1 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故鑒定化合物6為核桃酮。

3.1.7 化合物7 白色粉末。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 7.44 (1H, dd,J= 7.6, 1.2 Hz, H-8), 7.26 (1H, t,J= 7.6 Hz, H-7), 7.05 (1H, dd,J= 7.6, 1.2 Hz, H-6), 5.32 (1H, dd,J= 12.0, 4.4 Hz, H-4), 2.76 (1H, m, H-2), 2.50 (1H, m, H-2), 2.36 (1H, m, H-3), 2.21 (1H, m, H-3);13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 196.8 (C-1), 156.6 (C-5), 133.1 (C-8a), 130.5 (C-5a), 129.1 (C-7), 121.4 (C-6), 118.3 (C-8), 65.5 (C-4), 35.2 (C-2), 31.8 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故鑒定化合物7為4, 5-二羥基-α-四氫萘醌。

3.1.8 化合物8 淺黃色粉末。1H-NMR (400 MHz, CD3COCD3)δ: 7.41 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-2′, H-6′), 6.91 (2H, d,J= 8.2 Hz, H-3′, H-5′), 5.98 (2H, s, H-6, H-8), 5.45 (1H, dd,J= 12.8, 2.4 Hz, H-2), 3.20 (1H, dd,J= 17.0, 12.8 Hz, H-3), 2.72 (1H, dd,J= 17.0, 3.2 Hz, H-3);13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3)δ: 197.3 (C-4), 167.1 (C-7), 164.5 (C-5), 165.2 (C-8a), 158.7 (C-4′), 130.6 (C-1′), 129.0 (C-6′, C-2′), 116.0 (C-3′, C-5′), 103.0 (C-5a), 96.7 (C-6), 95.9 (C-8), 79.8 (C-2), 43.6 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道基本一致，故鑒定化合物8為柚皮素。

4 討論

胡桃屬植物具有悠久的藥用歷史，現(xiàn)代藥理研究[8]表明胡桃屬植物具有較好的抗腫瘤、抗氧化、抗菌、殺蟲、降血糖等作用。目前胡桃屬植物中研究報道最多的是胡桃楸 (Juglansmandshurica Maxim. )青皮，而關(guān)于泡核桃青皮的研究相對比較少。本研究對泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位的化學成分進行了研究，共分離鑒定了8個化合物，其中4個三萜類化合物為首次從該植物中分離得到，三萜類化合物結(jié)構(gòu)類型涉及烏蘇烷型五環(huán)三萜 (2)、羽扇豆烷型五環(huán)三萜 (3)以及齊墩果烷型五環(huán)三萜 (4、5)，從而進一步豐富了泡核桃青皮的化學成分類型。另外，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)泡核桃青皮70%甲醇提取物具有抗腫瘤活性，而本研究分離得到的三萜類化合物文獻報到均具有抗腫瘤作用[16-18]；同時，萘醌類化合物也是胡桃屬植物中的抗腫瘤活性成分之一[19]，本研究從泡核桃青皮70%甲醇提取物氯仿部位中分離得到1個萘醌類化合物 (7)，從而為泡核桃青皮抗腫瘤活性的研究奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。