彭政忠 張麗艷 唐靖雯 潘 梅 盧禮平 楊 桃

1.貴州威門藥業(yè)股份有限公司，貴州 貴陽 550018；2.貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025

牛耳楓為虎皮楠科植物牛耳楓DaphniphyllumcalycinumBenth.的干燥地上部分，收載于《貴州省中藥材民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(2019年版 第一冊)》，具有清熱解毒、活血散瘀、祛風(fēng)止痛的功效[1]。牛耳楓是黎族民間常用藥，在黎族地區(qū)用其治療外傷和炎癥[2]。在《中華本草》[3]《全國中草藥匯編》[4]及《福建藥物志》[5]《廣西民族藥簡編》[6]、《海南植物志》[7]等均有記載，具有很高的藥用價值和開發(fā)前景。由牛耳楓和辣蓼組成的復(fù)方牛耳楓片，具有理氣健胃、除濕化滯等功效，治療急慢性腸胃炎，臨床療效佳[3]。筆者綜述了牛耳楓化學(xué)成分、藥理活性、質(zhì)量評價、制劑產(chǎn)品開發(fā)等方面，為黎藥牛耳楓進(jìn)一步研究及綜合利用提供參考。黎藥牛耳楓研究進(jìn)展思維導(dǎo)圖如圖1所示。

1 化學(xué)成分

牛耳楓化學(xué)成分主要包括生物堿類化合物和黃酮類化合物，還含有少量的三萜類、甾醇類、胡蘿卜苷類和酚酸類等其它化合物，其中槲皮素、蘆丁、山奈酚、木犀草素、5,7-二羥基色原酮等均為常見的黃酮類化合物[8]。目前，在對牛耳楓化合物及其成分含量方面研究相對較多。

王永麗等[9]從牛耳楓乙酸乙酯部位和正丁醇部位分離、鑒定出7 個化合物，其中5-oxymaltol、2,6-dimethyl-3-hydroxychromone為首次從該植物中分離獲得。李晶晶等[10]采用柱層析和重結(jié)晶等分離技術(shù)，從牛耳楓果實甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分離、鑒定出10個化合物，其中5,7-二羥基色原酮、對羥基苯甲酸、5,7,4’-三羥基-3’-甲基黃酮等9個化合物首次從該植物的果實中分離得到。張小坡等[11]采用多種柱色譜方法從牛耳楓枝葉乙醇提取物中分離、鑒定出8個化合物，其中羽扇豆酮首次從交讓木屬植物中分離得到，以及胡蘿卜苷、槲皮素、蘆丁為首次從該植物中分離得到。朱文糧等[12]采用各種色譜方法從牛耳楓的莖葉乙醇浸提物中分離、鑒定出8個生物堿。李晶晶等[13]采用柱層析分離技術(shù)和重結(jié)晶等方法從牛耳楓葉的乙酸乙酯層分離、鑒定出3個化合物，其中反式對甲氧基肉桂酸、木樨草素為首次從該屬植物中分離得到。沈壽茂等[14]從牛耳楓的莖和葉中分離得到4個新的水飛薊生物堿，即水飛薊素A - D。近年來從牛耳楓中分離、鑒定的化合物見表1。

表1 牛耳楓中分離、鑒定的化合物

2 藥理活性

2.1 抗炎作用 宋青等[15]進(jìn)行了牛耳楓80%乙醇提取物的體內(nèi)外抗炎作用及其機(jī)制研究，通過建立 LPS 誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7 體外炎癥模型，結(jié)果顯示，牛耳楓提取物抑制了TNF-α、IL-10、IL-1β的分泌，并呈現(xiàn)劑量依賴性。通過 LPS 誘導(dǎo)建立了小鼠內(nèi)毒素血癥模型，結(jié)果顯示，牛耳楓提取物對小鼠血清細(xì)胞因子和炎性細(xì)胞因子有抑制作用；牛耳楓提取物呈劑量依賴性抑制了肝臟中iNOS 和 TNF-α蛋白的表達(dá)，對小鼠內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生較好的預(yù)防和治療作用。任守忠等[16]以牛耳楓和辣蓼為原料制備楓蓼提取物，分析其抗炎機(jī)制，研究表明楓蓼提取物23.4、46.8g/kg均能明顯抑制小鼠耳腫脹，楓蓼提取物16.2 g/kg、32.4 g/kg均能顯著抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹，且均能不同程度地降低炎足組織中TNF-α、IL-1β、PGE2和MDA的含量，但對NO無明顯影響。結(jié)果表明，楓蓼提取物可降低小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性、減少滲出，減輕小鼠耳腫脹和大鼠足腫脹，具有良好的抗炎作用。劉洪梅等[17]以牛耳楓和辣蓼為原料制備楓蓼發(fā)酵提取液，探究其鎮(zhèn)痛、抗炎、抗胃潰瘍作用，研究表明，楓蓼發(fā)酵提取液顯著抑制乙酸致小鼠扭體反應(yīng)，在一定程度上能抑制乙酸致小鼠毛細(xì)血管通透性的升高，還能顯著抑制二甲苯致耳腫脹和蛋清致足腫脹，減弱乙醇對胃黏膜的損傷以及減少血清中IL-1α、IL-1β的水平，同時抑制組織中HIS滲出，對 PED2滲出也有一定抑制作用。結(jié)果表明，楓蓼發(fā)酵提取液質(zhì)量穩(wěn)定可控，具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗胃潰瘍作用。

2.2 抗膽堿酯酶活性 王永麗等[9]從牛耳楓中得到的deoxycalyciphylline B、deoxyisocalyciphylline B具有抗乙酰膽堿酯酶(AChE)活性，secodaphniphylline、deoxyisocalyciphylline B 具有較強(qiáng)的抗丁酰膽堿酯酶(BChE)活性。見表2。

表2 牛耳楓抗膽堿酶活性

吳裕紅等[18]以牛耳楓和辣蓼為原料分別制備楓蓼提取物，在乙酰膽堿引起的家兔小腸平滑肌痙攣模型中，對空腸而言，乙酰膽堿使小腸平滑肌收縮活動加強(qiáng)，給予楓蓼水提物、醇提物各劑量(0.125 g/mL、 0.25g/mL、0.5 g/mL)均可使平滑肌收縮張力下降，進(jìn)而抑制乙酰膽堿引起的小腸平滑肌痙攣；對于回腸平滑肌，楓蓼醇提物各劑量對乙酰膽堿引起的痙攣均有明顯的頡頏作用，最低有效濃度為 0. 125 g /mL，而水提物的最低有效濃度為 0. 5 g /mL。見表3。該抑制作用可能是通過阻斷乙酰膽堿與 M 受體的結(jié)合，降低細(xì)胞中鈣離子濃度，從而降低小腸平滑肌的興奮度。

表3 楓蓼提取物抗乙酰膽堿作用

2.3 抗腫瘤活性 王永麗[19]從牛耳楓中提取16種生物堿進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選，結(jié)果顯示，2-hydroxyyunnandaphnine D在體外具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，其對人宮頸癌細(xì)胞(HeLa)、人肺腺癌細(xì)胞(A-549)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人肝癌細(xì)胞(HePG-2)和人神經(jīng)膠質(zhì)瘤(U-251)等5種腫瘤細(xì)胞株均有一定的抑制作用，其中對HePG-2細(xì)胞的抑制增殖作用最強(qiáng)，且具有量效和時效關(guān)系。曹志然等[20]從牛耳楓的莖葉乙醇浸提物中采用正相硅膠，反相材料(C18，MCI)以及凝膠(Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40C)分離得到牛耳楓生物堿F21，并進(jìn)行了該成分對HePG-2細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究，結(jié)果表明，牛耳楓生物堿F21在體外對HepG-2細(xì)胞具有顯著的抑制作用，其作用機(jī)制并非通過激活胱天蛋白酶途徑而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。王蓓等[21]進(jìn)行了牛耳楓生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D體外抗腫瘤活性及作用機(jī)制研究，結(jié)果顯示，該生物堿在體外對HepG-2細(xì)胞、MCFh7細(xì)胞及HeLa細(xì)胞3種腫瘤細(xì)胞株均有明顯的抑制作用，且具有明顯的時-效和量-效關(guān)系依賴性；FDA/PI雙染色熒光顯微鏡觀察顯示，該生物堿組中死亡細(xì)胞數(shù)較正常對照組細(xì)胞死亡數(shù)量增加，且隨著劑量的加大細(xì)胞死亡數(shù)量增加，表明該生物堿在體外具有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。劉帥等[22]從牛耳楓的莖中分離出一種新的牛耳楓Daphnezomine L型生物堿，對HeLa細(xì)胞具有中等的細(xì)胞毒活性，IC50為16.0μg / mL。

3 質(zhì)量評價

唐靖雯等[23]對牛耳楓進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，建立了以指標(biāo)成分蘆丁、牛耳楓對照藥材為對照的薄層鑒別(TLC)方法，以及以指標(biāo)成分蘆丁為含量的高效液相色譜(HPLC)法，結(jié)果顯示，TLC斑點清晰，重復(fù)性好；蘆丁在0.200～1.403μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為101.65%，RSD為 2.42%。何遠(yuǎn)景[24]建立了牛耳楓中山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量的HPLC法，結(jié)果顯示，山奈酚-3-O-蕓香糖苷濃度在6.92～69.2 μg/mL之間，且其峰面積呈良好的線性關(guān)系。梁穎等[25]建立了同時測定牛耳楓中沒食子酸、原兒茶酸、蘆丁、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素、山柰酚等8種成分含量的高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法，并結(jié)合 TOPSIS 分析法，對不同產(chǎn)地(廣西桂林、海南瓊中、海南?？?牛耳楓樣品的8種成分含量進(jìn)行對比分析及綜合評價，結(jié)果顯示，8種成分在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且海南?？诘乃幉木C合質(zhì)量較好。杜迎翔等[26]建立了牛耳楓的HPLC指紋圖譜方法，標(biāo)定了11個共有峰，指認(rèn)了2個峰(蘆丁、槲皮素)，各指紋圖譜的相似度均達(dá)到 0.85以上；利用系統(tǒng)聚類分析，確定同一地區(qū)牛耳楓藥材化學(xué)成分的穩(wěn)定性，說明藥材質(zhì)量與采集、干燥、運(yùn)輸及貯存過程有關(guān)；利用主成分分析提取了3個主要成分，確定牛耳楓中對第一主成分的影響較大的是蘆丁、槲皮素以及其他 3個未知成分。李海龍等[27]建立了測定牛耳楓藥材中總黃酮的含量方法，總黃酮在7.84～47.04 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4 制劑產(chǎn)品開發(fā)

近年來，各制藥企業(yè)利用牛耳楓藥用資源，開發(fā)的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品楓蓼腸胃康分散片，是以牛耳楓、辣蓼兩味藥材經(jīng)加工制成的分散片，具有理氣健胃、除濕化滯功能，用于中運(yùn)不健、氣滯濕困而致的急性胃腸炎及其所引起的腹脹、腹痛和腹瀉等消化不良癥[28]；在急性胃腸炎治療中，有效改善臨床癥狀[29]。此外，以牛耳楓、辣蓼兩味藥材組合開發(fā)的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品有楓蓼腸胃康顆粒、楓蓼腸胃康口服液、楓蓼腸胃康膠囊、楓蓼腸胃康軟膠囊、楓蓼腸胃康滴丸等，在臨床上有一定的應(yīng)用。黃騰等[30]采用隨機(jī)、雙盲、陽性藥平行對照,多中心、非劣效試驗設(shè)計，收集6個月至5歲患兒240例評價楓蓼腸胃康顆粒治療小兒急性腹瀉(濕熱瀉)的臨床有效性和安全性，結(jié)果表明，楓蓼腸胃康顆粒對6個月至5歲小兒急性腹瀉(濕熱瀉)止瀉率與兒瀉停顆粒療效相當(dāng)且起效較快，臨床應(yīng)用安全。吳珮毓等[31]觀察楓蓼腸胃康口服液聯(lián)合思密達(dá)治療老年慢性腹瀉的臨床療效，結(jié)果表明，觀察組總有效率為94.29%,高于對照組的74.29%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；觀察組治療有效時間為(5.27±2.25)d，短于對照組的(8.58±2.80)d，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組不良反應(yīng)發(fā)生率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。李燕君[32]研究楓蓼腸胃康膠囊聯(lián)合常規(guī)三聯(lián)(克拉霉素片、奧美拉唑腸溶膠囊和阿莫西林膠囊)治療慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生的效果，結(jié)果表明，試驗組幽門螺桿菌(Hp)根除率為82.00%，高于對照組的60.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；試驗組不良反應(yīng)發(fā)生率為6.00%，低于對照組的20.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

5 展望

目前，對牛耳楓在化學(xué)成分和生物活性方面研究較多，但其藥用成分和藥用機(jī)理研究相對較少，嚴(yán)重制約著相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)[8]。采用現(xiàn)代的分離鑒定技術(shù)從牛耳楓中獲得的新生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D在體外對HepG-2細(xì)胞具有較強(qiáng)的抑制作用，且抑制作用具有較好的時效和量效關(guān)系[21]，但其作用機(jī)制研究較少且尚不清楚。牛耳楓提物研究發(fā)現(xiàn)具有抗炎作用[15]，以及在體外具有顯著的抗AChE 及抗BChE活性[9]，但對于藥理藥效等方面的關(guān)注較少。牛耳楓的復(fù)方制劑產(chǎn)品楓蓼腸胃康顆?？烧{(diào)節(jié)幼齡大鼠的胃液分泌，對幼齡大/小鼠具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)胃黏膜及解痙作用，表明其對幼齡動物的急性胃炎具有一定療效[33]，但對治療兒科急性胃炎的臨床應(yīng)用還需進(jìn)一步研究。牛耳楓的中藥復(fù)方制劑產(chǎn)品開發(fā)方面主要與辣蓼組合，與其他中藥組合開發(fā)的制劑產(chǎn)品較少。因此，下一步對牛耳楓的研究可將化學(xué)成分、藥理作用機(jī)制、臨床應(yīng)用三者緊密結(jié)合，開發(fā)更多以牛耳楓為原料的復(fù)方制劑產(chǎn)品。