史 芳 邱慧萍 嚴(yán)進(jìn)錦 柯昌林 李 瑤

肺癌是我國第一大癌癥,發(fā)病率與死亡率均位居我國惡性腫瘤之首,其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最常見的類型,占80%～85%。近年來隨著科學(xué)的發(fā)展,各種新型藥物層出不窮,為腫瘤患者帶來了新的希望,然而腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的發(fā)生率仍然較高。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫狀況密切相關(guān),腫瘤細(xì)胞免疫逃逸是NSCLC病程中的重要環(huán)節(jié),也是NSCLC免疫治療關(guān)鍵環(huán)節(jié)。髓源性抑制細(xì)胞是來自骨髓的一群異質(zhì)性細(xì)胞,在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮免疫抑制功能。胸腺法新是一種人工合成的由28種氨基酸組成的多肽,與人體天然的胸腺肽α1在氨基酸序列和空間結(jié)構(gòu)上均一致。研究認(rèn)為,胸腺法新具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用,能增強(qiáng)免疫功能,臨床上主要應(yīng)用在腫瘤患者、免疫系統(tǒng)功能受到抑制的患者及感染性疾病的患者等治療中。本研究通過胸腺法新與NSCLC患者外周血來源的髓源性抑制細(xì)胞共同培養(yǎng),觀察胸腺法新對髓源性抑制細(xì)胞的影響,探索其可能的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月至2022年12月我院經(jīng)病理組織或細(xì)胞學(xué)確診的非小細(xì)胞肺癌患者30例。納入標(biāo)準(zhǔn):所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診并且為初診初治,未行任何相關(guān)抗腫瘤治療及未使用類似藥物;無心血管及肺部等基礎(chǔ)疾病及其它惡性腫瘤。對照組:選取我院健康志愿者30例,經(jīng)體檢排除各系統(tǒng)性疾病。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書,本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

按實(shí)驗(yàn)要求于術(shù)前一日清晨空腹采集NSCLC組患者外周靜脈血4 ml,手術(shù)當(dāng)日收集患者癌組織;健康對照組均于清晨采集空腹靜脈血4 ml,所有標(biāo)本按要求保存。按實(shí)驗(yàn)方法檢測NSCLC患者外周血PBMNC、腫瘤組織中MDSCs的表達(dá)及健康對照組外周血中MDSCs表達(dá),外周血PBMNC與胸腺法新共培養(yǎng)后MDSCs的表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 NSCLC患者外周血HLA-DR-CD14-CD33+MDSCs的表達(dá)

NSCLC患者外周血中MDSCs表達(dá)明顯高于健康對照組[(1.62±0.46)% vs (0.41±0.14)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.817,P<0.001)。

2.2 NSCLC患者腫瘤組織HLA-DR-CD14-CD33+MDSCs的表達(dá)

NSCLC腫瘤組織中MDSCs表達(dá)明顯高于健康對照組[(0.96±0.39)% vs (0.41±0.14)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.373,P<0.001)。

2.3 NSCLC患者外周血和腫瘤組織中HLA-DR-CD14-CD33+MDSCs表達(dá)

NSCLC腫瘤組織中MDSCs表達(dá)低于外周血[(0.96±0.39)% vs (1.62±0.46)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.825,P<0.01)。

2.4 胸腺法新處理前后NSCLC患者外周血MDSCs比例的變化

處理后外周血中MDSCs明顯低于處理前[(0.53±0.11)% vs (1.62±0.46)%],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.456,P<0.01)。

3 討論

肺癌在全球發(fā)病率及死亡率位居首位,盡管近年來診斷技術(shù)及治療手段不斷增多,為患者帶來了更多獲益,但5年生存期仍較短,總體治療有效率較低。腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是腫瘤治療過程中的最大障礙,目前肺癌領(lǐng)域研究的關(guān)鍵是延長患者的生存期、減少腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中,腫瘤微環(huán)境發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在微環(huán)境中,免疫抑制是促進(jìn)腫瘤生長和耐藥的重要因素之一。

研究表明,髓源性抑制細(xì)胞(MDSCs)是腫瘤微環(huán)境中常見的免疫抑制細(xì)胞之一,腫瘤、感染及慢性炎癥等疾病會促進(jìn)其大量擴(kuò)增并聚集至病灶局部,發(fā)揮免疫抑制功能,負(fù)向調(diào)控免疫應(yīng)答[1-2],近年來已經(jīng)在多種實(shí)體瘤患者中被證實(shí)高表達(dá)。然而不同組織來源、不同部位的腫瘤患者中存在的MDSCs免疫表型都可能不同,HLA-DR-CD14-CD33+MDSCs是目前報(bào)道較多的譜系標(biāo)志之一。 本研究以NSCLC患者和健康志愿者的外周血為研究對象,以HLA-DR-CD14-CD33+作為NSCLC患者的髓源性抑制細(xì)胞標(biāo)志,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測HLA-DR-CD14-CD33+MDSCs表達(dá),結(jié)果表明,NSCLC患者外周血中MDSCs的比例[(1.62±0.46)%]明顯高于健康志愿者[(0.41±0.14)%],NSCLC患者腫瘤組織中的表達(dá)[(0.96±0.39)%]低于外周血[(1.62±0.46)%]。

胸腺法新是一種注射用小分子多肽類免疫制劑,作為一種免疫調(diào)節(jié)劑已廣泛應(yīng)用于多個(gè)臨床領(lǐng)域,主要應(yīng)用在腫瘤治療、感染性疾病、慢性乙肝等領(lǐng)域,既有免疫增強(qiáng)作用,又有免疫調(diào)節(jié)作用[3-4]。藥理研究證實(shí),胸腺法新能夠促進(jìn)T細(xì)胞在胸腺內(nèi)成熟、分化及增生,調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群變化,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能[5-6]。胸腺法新能否影響MDSCs的活性發(fā)揮抗腫瘤作用,機(jī)制尚不明了。本研究通過胸腺法新與外周血MDSCs共培養(yǎng),觀察處理前后外周血單個(gè)核細(xì)胞中MDSCs的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理后(0.53±0.11)%較處理前(1.62±0.46)%明顯降低。說明胸腺法新可以降低MDSCs在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的數(shù)量,其原因可能是胸腺法新通過促進(jìn)HLA-DR-CD14-CD33+MDSCs進(jìn)一步分化成熟而降低MDSCs的比例。

綜上:本研究初步揭示了胸腺法新可以降低MDSCs在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的數(shù)量,調(diào)節(jié)患者的免疫功能,為胸腺法新在腫瘤中的免疫輔助治療提供了新依據(jù)。MDSCs在腫瘤發(fā)生發(fā)展、免疫逃逸中擔(dān)任重要角色,去除、抑制MDSCs、促進(jìn)其分化成熟,可能成為腫瘤治療的一種新方法。