于亮, 楊帥, 黃祝剛, 劉勇, 蔣海強(qiáng), 呂青濤*

白花蛇舌草的化學(xué)成分研究

于亮1,2, 楊帥1,2, 黃祝剛2, 劉勇2, 蔣海強(qiáng)2, 呂青濤2*

(1. 山東省藥學(xué)科學(xué)院, 山東省化學(xué)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250101；2. 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，濟(jì)南 250355)

為研究白花蛇舌草()的化學(xué)成分，采用硅膠柱色譜、制備HPLC色譜等方法，從白花蛇舌草全草的70%乙醇提取物中分離得到9個(gè)化合物。根據(jù)理化性質(zhì)及其波譜或光譜數(shù)據(jù)，結(jié)構(gòu)分別鑒定為：豆甾醇(1)、-谷甾醇(2)、rubiadin (3)、2,6-二羥基-1-甲氧基蒽醌(4)、-谷甾醇-3---d-葡萄糖苷(5)、對(duì)香豆酸(6)、山奈酚(7)、槲皮素(8)和2-羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌(9)?；衔?為新化合物；氯仿提取部位的Fr.4、Fr.4-2及Fr.4-4流分具有較強(qiáng)體外抗人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活性，其IC50值分別為52.8、78.1和27.5g/mL。

白花蛇舌草；化學(xué)成分；2,6-二羥基-1-甲氧基蒽醌；抗子宮內(nèi)膜癌活性

白花蛇舌草()為茜草科(Rubi- aceae)耳草屬植物, 全草具有清熱、解毒、消腫、止痛之功效[1]，主要用于抗癌治療[2]，含有三萜類、蒽醌類、環(huán)烯醚萜類、甾醇類、香豆素類、黃酮類、烷烴類等化學(xué)成分[3]。前期用MTT法進(jìn)行的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，白花蛇舌草氯仿提取部位具有較強(qiáng)的體外抗子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活性, IC50值為113.0g/mL。為探究其抗癌有效成分，本文對(duì)該植物氯仿等提取部位的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離，從全草中分離得到9個(gè)化合物(圖1)，為深入研究白花蛇舌草的藥理作用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

白花蛇舌草藥材(購(gòu)自濟(jì)南建聯(lián)中藥店，批號(hào): 20120730，20130201)，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李峰教授鑒定為茜草科耳草屬白花蛇舌草()的干燥全草。

圖1 化合物1～9 的結(jié)構(gòu)

1.2 儀器和試劑

Bruker AM-400/600型核磁共振儀(德國(guó)Bruker公司)；Q Exactive?組合型四極桿Orbitrap質(zhì)譜儀(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)；顯微熔點(diǎn)儀(XRC-1, 四川大學(xué)科儀廠)；柱色譜硅膠(100～200、200～300目，青島海洋化工有限公司)；高效液相色譜儀(1200, 美國(guó)安捷倫公司)；Eclipse XDB-C18高效液相制備柱(5m, 9.4 mm×250 mm，美國(guó)安捷倫公司)；粉碎機(jī)(AZL-600Y，永康市艾澤拉儀器有限公司);EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化器械株式會(huì)社);多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)MD Spectra M5)。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙醇等試劑均為分析純。

1.3 提取和分離

干燥白花蛇舌草藥材15 kg，粉碎，70%乙醇回流提取3次(藥材與乙醇質(zhì)量比=1:7)，每次1.5 h。抽濾、減壓濃縮、離心棄去沉淀，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，依次得到浸膏8、75和92 g。

取氯仿部位浸膏，以二氯甲烷:甲醇=300:0、300: 1、60:1、30:1、15:1、3:1、0:1梯度洗脫，得到7個(gè)流分(Fr.1～Fr.7)。Fr.3流分以石油醚:乙酸乙酯=60:1，30:1，9:1，3:1，1:1，1:3梯度洗脫，得到Fr.3-1～Fr.3-4流分。Fr.3-2流分揮干溶劑后得無色結(jié)晶，以石油醚:丙酮=4:1洗脫，得到化合物1 (10 mg)和化合物2 (11 mg)。Fr.4流分以石油醚:乙酸乙酯=60:1、30:1、15:1、8:1、4:1、2:1、1:1、0:1梯度洗脫，得到Fr.4-1～ Fr.4-4流分。取Fr.4-2流分析出的黃色沉淀，應(yīng)用高效液相制備，得到化合物3 (11 mg)(流動(dòng)相為甲醇:水=70:30～100:0)。Fr.5流分以石油醚:乙酸乙酯= 100:0、100:1、50:1、30:1、10:1、3:1梯度洗脫, 得到Fr.5-1～Fr.5-6流分。Fr.5-3流分以石油醚:乙酸乙酯=30:1、20:1、15:1、10:1、8:1、5:1、3:1梯度洗脫得到Fr.5-3-1～Fr.5-3-4流分。Fr.5-3-3流分應(yīng)用高效液相制備(流動(dòng)相為：乙腈:水=35:65), 得到化合物4 (11 mg)。

取乙酸乙酯部位浸膏，以二氯甲烷:甲醇(150:1～ 1:1)進(jìn)行分級(jí)洗脫，得到Fr.1～Fr.5共7個(gè)流分。取Fr.3流分，以二氯甲烷:甲醇(45:1～1:1)進(jìn)行分級(jí)洗脫,得到Fr.3.1～Fr.3.7流分和化合物5 (16 mg)。Fr.3.2、Fr.3.3和Fr.3.5流分經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜和重結(jié)晶得化合物6 (10 mg)、7 (24 mg)和8 (22 mg)。

取石油醚部位浸膏，以二氯甲烷:甲醇(99:1～9:1)進(jìn)行梯度洗脫，得到A～E共5個(gè)流分。D餾分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離和高速逆流色譜分離，重結(jié)晶, 得到化合物9 (7 mg)。

1.4 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 無色針狀結(jié)晶，10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。UHPLC-QE/MS/MS: 413.38 [M + H]+; m.p: 147 ℃～149 ℃;1H NMR (400 MHz, CDCl3+DMSO):0.70、0.80, 0.82, 0.85, 1.01, 1.02 (6CH3), 3.51 (m, H-3), 5.35 (d,= 5.2 Hz, H-6), 5.00 (dd,= 15.2, 8.8 Hz, H-23), 5.15 (dd,= 15.2, 8.8 Hz, H-22);13C NMR (100 MHz, CDCl3+DMSO):37.30 (C-1), 31.66 (C- 2), 71.62 (C-3), 42.32 (C-4), 140.94 (C-5), 121.54 (C- 6), 31.87 (C-7), 31.91 (C-8), 50.18 (C-9), 36.54 (C- 10), 21.07 (C-11), 39.70 (C-12), 42.23 (C-13), 56.88 (C-14), 24.36 (C-15), 28.90 (C-16), 55.97 (C-17), 12.05 (C-18), 19.41 (C-19), 40.47 (C-20), 21.21 (C- 21), 138.31 (C-22), 129.28 (C-23), 51.23 (C-24), 31.90 (C-25), 18.99 (C-26), 21.21 (C-27), 25.39 (C- 28), 12.24 (C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道一致，故鑒定為豆甾醇。

化合物2 無色針狀結(jié)晶, m.p: 140 ℃～142 ℃。10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色, Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。UHPLC-QE/MS/MS: 415.41 [M + H]+;1H NMR (600 MHz, CDCl3)中有6個(gè)甲基單峰信號(hào)(: 0.68、0.80、0.85、0.92、0.93和0.98);13C NMR (100 MHz, CDCl3)中有29個(gè)碳的吸收峰, 其中在: 11.83、11.98、18.74、19.00、19.40和20.00有6個(gè)甲基碳的吸收峰。經(jīng)分析, 該化合物與-谷甾醇對(duì)照品共同薄層展開后, 用硫酸-乙醇顯色, 兩者Rf值一致，且與-谷甾醇對(duì)照品混合后，熔點(diǎn)不降。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致，故鑒定為-谷甾醇。

化合物3 黃色針狀結(jié)晶, 硅膠薄層板展開, 氨熏后顯紅色, Borntrager’s反應(yīng)陽性。m.p: 249℃～ 250 ℃; UHPLC-QE/MS/MS: 255.07 [M + H]+;1H NMR (DMSO-6, 400 MHz):7.25 (1H, s, H-4), 8.14 (1H, d,= 7.2 Hz, H-5), 7.90 (2H, m, H-6, 7), 8.21 (1H, d,= 7.2 Hz, H-8), 2.08 (3H, s, CH3), 13.16 (1H, s, 1-OH), 11.36 (1H, s, 3-OH);13C NMR (DMSO-6, 100 MHz):8.57 (-H3), 108.25 (C-4), 109.20 (C- 9a), 117.73 (C-2), 126.82 (C-8), 127.17 (C-5), 132.26 (C-8a), 133.42 (C-10a), 133.65 (C-4a), 134.82 (C-7), 135.02 (C-6), 162.97 (C-3), 164.08 (C-1), 182.47 (C- 10), 186.40 (C-9)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致, 故鑒定為甲基異茜草素(rubiadin)。

化合物4 黃色片狀結(jié)晶, 硅膠薄層板展開, 氨熏后顯紅色, Borntrager’s反應(yīng)陽性, AlCl3反應(yīng)呈陰性。UHPLC-QE/MS/MS: 271.06 [M + H]+; m.p: 301 ℃～303 ℃;1H NMR (600 MHz, DMSO-d6):10.87 (1H, s, 2-OH), 10.75 (1H, s, 6-OH), 8.02 (1H, d,= 8.4 Hz, H-8), 7.89 (1H, d,= 8.4 Hz, H-4), 7.42 (1H, d,= 2.4 Hz, H-5), 7.28 (1H, d,= 8.4 Hz, H-3), 7.20 (1H, dd,= 8.4, 2.4 Hz, H-7), 3.81 (3H, s, -OCH3);13C NMR (150 MHz, DMSO-6):181.76 (C-10), 181.24 (C-9), 162.71 (C-6), 158.24 (C-2), 147.79 (C-1), 134.78 (C-10a), 129.81 (C-8), 126.92 (C-9a), 126.85 (C-8a), 126.05 (C-4a), 125.09 (C-4), 121.39 (C-7), 121.01 (C-3), 111.57 (C-5), 60.69 (-OCH3)。13C NMR譜和DEPT譜表明化合物4有15個(gè)碳原子，其中1個(gè)甲基(CH3)，0個(gè)亞甲基(CH2)，5個(gè)次甲基(CH)和9個(gè)季碳(C)。13C NMR譜中110～ 185 ppm間14個(gè)碳的是蒽醌母核的化學(xué)位移[7], 且2個(gè)羰基碳的化學(xué)位移為181.76和181.24；1H NMR譜表明，取代基共有3個(gè)，分別為2個(gè)-OH (氫的化學(xué)位移分別為10.87和10.75)、1個(gè)-OCH3(氫的化學(xué)位移為3.806)。蒽醌母核上有1氫(: 7.195, 1H, dd,= 8.4, 2.4 Hz)裂分為4重峰，說明母核上此氫與鄰位氫和另一側(cè)的間位氫分別有耦合效應(yīng); 另由耦合常數(shù)為8.4 Hz的H峰共有4個(gè)，故有2對(duì)H處于鄰位，這與1H-1H COSY譜相吻合。因此推斷出蒽醌母核右環(huán)(A環(huán))為鄰位的,-H之間的耦合，蒽醌母核左環(huán)(C環(huán))為2個(gè)-H和1個(gè)-H之間的耦合。由化合物的AlCl3反應(yīng)呈陰性可知, 結(jié)構(gòu)中沒有-酚羥基，因此可推斷出結(jié)構(gòu)中-OCH3只能位于母核的1位，母核上2位的基團(tuán)只能為-OH，另一-OH只能在6位或7位上，即結(jié)構(gòu)只能為圖2中顯示的2種可能。由HMBC譜得知，化學(xué)位移為181.24的羰基碳只與母核H-8 (: 8.02, d,= 8.4 Hz)有遠(yuǎn)程耦合關(guān)系，說明此羰基碳(C-9)與取代基-OCH3更為鄰近；另一化學(xué)位移為181.76的羰基碳(C-10)與母核H-4 (: 7.89, d,= 8.4 Hz)和H-5 (: 7.42, d,= 2.4 Hz)分別有遠(yuǎn)程耦合關(guān)系，表明此羰基碳(C-10)與母核C環(huán)上的取代基更為鄰近，故母核上6位的基團(tuán)只能為剩余取代基-OH。故結(jié)構(gòu)式只能是圖2中的第1種，且5、7、8位的碳?xì)錃w屬與HSQC譜吻合。故鑒定為2,6-二羥基-1-甲氧基蒽醌(圖3, 表1)。

化合物5 白色粉末, 10%硫酸-乙醇顯色為紫紅色, Molish反應(yīng)呈陽性。UHPLC-QE/MS/MS: 577.45 [M + H]+;1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):0.66 (3H, s, C18-H), 1.23 (3H, d,= 3.6 Hz, C21-H), 1.15 (3H, s, C19-H), 0.96 (3H, s, C25-H), 0.91 (3H, s, C29-H), 0.82 (3H, s, C27-H), 4.42 (H, t,=5.6 Hz, C4′- H), 5.33 (H, d,= 5.6 Hz, C1′-H)。13C NMR (100 MHz, DMSO-6):141.11 (C-5), 121.64 (C-6), 101.32 (C- 1′), 77.45 (C-3), 77.26 (C-2′), 77.21 (C-5′), 73.94 (C- 2′), 70.57 (C-4′), 61.58 (C-6′), 56.67 (C-14), 55.94 (C- 17), 50.10 (C-9), 45.85 (C-24), 42.34 (C-13), 39.61 (C-12), 38.81 (C-4), 37.32 (C-1), 36.69 (C-10), 35.98 (C-20), 33.85 (C-22), 31.90 (C-7), 31.86 (C-8), 29.75 (C-2), 29.21 (C-25), 28.27 (C-16), 25.97 (C-23), 25.34 (C-15), 23.10 (C-28), 21.09 (C-11), 19.57 (C-27), 19.42 (C-26), 19.33 (C-19), 19.09 (C-21), 12.31 (C- 29), 12.14 (C-18)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定為-谷甾醇-3---d-葡萄糖苷(-sito- sterol-3---d-glucoside)。

圖2 化合物4可能的2種結(jié)構(gòu)及其醌環(huán)上H的耦合情況

圖3 化合物4的結(jié)構(gòu)，HMBC及COSY相關(guān)

表1 化合物4的核磁共振波譜數(shù)據(jù)

化合物6 白色粉末，UHPLC-QE/MS/MS: 165.05 [M + H]+;1H NMR (400 MHz, DMSO-6):7.53 (1H, d,= 16 Hz,-H), 7.50 (2H, d,= 8 Hz, 2,6-H), 6.80 (2H, d,= 8Hz, 3,5-H), 6.31 (1H, d,= 16 Hz,-H)。13C NMR (100 MHz, DMSO-6):168.43 (=O), 160.05 (C-4), 144.56 (C-), 130.52 (C-3, 5), 125.75 (C-1), 116.21 (C-2, 6), 115.89 (C-)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致, 故鑒定為對(duì)香豆酸。

化合物7 黃色粉末(甲醇), mp: 274 ℃～ 275 ℃, HCl-Mg反應(yīng)為陽性, ZrCl2反應(yīng)為陽性, 加檸檬酸后黃色部分褪去；UHPLC-QE/MS/MS/: 287.06 [M + H]+;1H NMR (600 MHz, DMSO-6):12.48 (1H, s, 5-OH), 10.78 (1H, s, 3-OH), 10.12 (1H, s, 7-OH), 8.05 (2H, d,= 8.4 Hz, C2′,6′-H), 6.92 (2H, d,= 8.4 Hz, C3′,5′-H), 6.44 (1H, d,= 1.8 Hz, C8-H), 6.19 (1H, d,= 1.8 Hz, C6-H)。13C NMR (150 MHz, DMSO-6):176.14 (C-4), 164.12 (C-7), 160.95 (C- 9), 156.41 (C-5), 147.04 (C-2), 135.91 (C-3), 129.75 (C-2′, 6′), 121.91 (C-1′), 159.41 (C-4′), 115.68 (C-3′, 5′), 103.28 (C-10), 98.44 (C-6), 93.72 (C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定為山奈酚。

化合物8 黃色粉末(甲醇), HCl-Mg反應(yīng)為陽性, ZrCl2反應(yīng)為陽性, 加檸檬酸后黃色部分褪去；UHPLC-QE/MS/MS: 303.05 [M + H]+;1H NMR (600 MHz, DMSO-6):12.49 (1H, s, 5-OH), 10.78 (1H, s, 3-OH), 9.59 (1H, s, 7-OH), 7.67 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 7.53 (1H, dd,= 1.8, 8.4 Hz, H-6′), 6.87 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.40 (1H, d,= 1.8 Hz, H-8), 6.18(1H, d,= 1.8 Hz, H-6);13C NMR (150 MHz, DMSO-6):176.03 (C-4), 164.06 (C-7), 160.91 (C- 9), 156.31 (C-5), 147.89 (C-4′), 146.98 (C-2), 145.24 (C-3′), 135.92 (C-3), 122.13 (C-1′), 120.15 (C-6′), 115.78 (C-5′), 115.23 (C-2′), 103.19 (C-10), 98.36 (C- 6), 93.53 (C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致, 故鑒定為槲皮素。

化合物9 黃色針狀結(jié)晶; UHPLC-QE/MS/ MS: 269.06 [M + H]+;1H NMR (CDCl3, 600 MHz):8.19 (1H, d,= 7.8 Hz, H-8), 8.08 (1H, d,= 1.4 Hz, H-5), 7.79 (1H, s, H-4), 7.76 (1H, s, H-1), 7.58 (1H, d,= 7.2 Hz, H-7), 4.11 (3H, s, OMe-3), 2.54 (3H, s, Me-7);13C NMR (CDCl3):182.70 (C-9), 182.37 (C- 10), 151.11 (C-2), 150.71 (C-3), 144.89 (C-7), 134.51 (C-6), 133.53 (C-8a), 131.34 (C-10a), 129.33 (C-4a), 128.25 (C-5), 127.42 (C-9a), 127.26 (C-8), 112.59 (C- 1), 108.24 (C-4), 56.63 (OMe-3), 21.91 (Me-7)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定為2-羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌。

2 結(jié)果和討論

本研究對(duì)白花蛇舌草氯仿提取部分的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離，得到9個(gè)化合物，分別為：豆甾醇(1)、-谷甾醇(2)、rubiadin (3)、2,6-二羥基-1-甲氧基蒽醌(4)、-谷甾醇-3---d-葡萄糖苷(5)、對(duì)香豆酸(6)、山奈酚(7)、槲皮素(8)和2-羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌(9)，其中化合物4是新的蒽醌類化合物。

前期應(yīng)用MTT法測(cè)定了部分流分及化合物對(duì)人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)抑制作用，其中-谷甾醇(2)的IC50為233.3g/mL，顯示具有一定的體外抑制活性；對(duì)香豆酸(6)的IC50為394.3g/mL，未顯示有體外抑制活性。氯仿提取部分中Fr.4、Fr.4-2和Fr.4-4流分的IC50值分別為52.8、78.1和27.5g/mL，表明這3個(gè)流分有較強(qiáng)的體外抗人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞活性，同時(shí)也表明多種活性成分的聯(lián)合抗癌活性要優(yōu)于單一化合物。后期將繼續(xù)對(duì)其他流分和化合物開展體外抗癌研究。

據(jù)報(bào)道，分離得到的各化合物具有一定的藥理活性，-谷甾醇(2)可抵抗細(xì)菌入侵、調(diào)節(jié)膽固醇、消炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗腫瘤、抗抑郁[12]，對(duì)香豆酸(6)具有清除自由基、抑制氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抑菌[13]，山奈酚(7)和槲皮素(8)是很多常用抗癌方劑中的重要有效成分[14]，rubiadin (3)具有骨質(zhì)疏松癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥骨轉(zhuǎn)移等破骨細(xì)胞活性[15]。白花蛇舌草的藥用成分仍需要進(jìn)一步開發(fā)，尋找潛在利用價(jià)值。

[1] YE Y X, ZHANG P Z, WANG L, et al. Effects of different extraction methods on polysaccharide and its antioxidant characteristics ofWilld. in Henan Province [J]. Nat Prod Res Dev, 2019, 31(7): 1138–1146. [葉穎曉, 張朋展, 王麗, 等. 不同提取方法對(duì)豫產(chǎn)白花蛇舌草多糖及抗氧化活性的影響[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2019, 31(7): 1138–1146. doi: 10.16333/j.1001-6880.2019.7.004.]

[2] WANG S Q, CHEN L, NI H. Effect ofongene expression in hepatoma cells [J]. J Chin Med Mat, 2007, 30(10): 1285–1289. [王順啟, 陳力, 倪虹, 等. 白花蛇舌草對(duì)肝癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響[J]. 中藥材, 2007, 30(10): 1285–1289. doi: 10.13863/j. issn1001-4454.2007.10.033.]

[3] YU L, Lü Q T, HUANG Z G, et al. Comparison of the contents of two coumarins infrom different areas by HPLC [J]. Mod Instrum Med Treat, 2015, 21(3): 85–87. [于亮, 呂青濤, 黃祝剛, 等. HPLC法比較不同產(chǎn)地白花蛇舌草中兩種香豆素類成分的含量 [J]. 現(xiàn)代儀器與醫(yī)療, 2015, 21(3): 85–87. doi: 10.11876/mimt20150 3031.]

[4] MAO X F. Studies on the steroidal chemical constituents and quanti- tative determination of-sitosterol of(Willd.) Roxb. [D]. Guangzhou: The First Military Medical University, 2002. [毛杏飛. 白花蛇舌草甾體類化學(xué)成分及其-谷甾醇含量測(cè)定方法的研究[D]. 廣州: 第一軍醫(yī)大學(xué), 2002.]

[5] LI G Q, LI Y Y, TAN Z J. Spectroscopic Identification of-sitosterol [J]. Guangdong Chem Ind, 2018, 45(10): 128–129. [李國(guó)強(qiáng), 李韻儀, 譚卓杰. Β-谷甾醇的波譜結(jié)構(gòu)解析 [J]. 廣東化工, 2018, 45(10): 128–129. doi: 10.3969/j.issn.1007-1865.2018.10.057.]

[6] CHEN H, CHEN M, HUANG Z H, et al. Chemical constituents of[J]. Chin J Exp Trad Med Form, 2013, 19(21): 69– 71. [陳紅, 陳敏, 黃澤豪, 等. 巴戟天的化學(xué)成分研究 [J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2013, 19(21): 69–71. doi: 10.11653/syfj2013210069.]

[7] YU L, LI J M, JIANG Z. A new anthraquinone from[J]. Chin J Med Chem, 2008, 18(4): 298–299. [于莉, 李俊明, 姜珍, 等. 白花蛇舌草中的一個(gè)新蒽醌 [J]. 中國(guó)藥物化學(xué)雜志, 2008, 18 (4): 298–299. doi: 10.3969/j.issn.1005-0108.2008.04.015.]

[8] CHEN C, ZHANG H, XIAO W. Study on the chemical constituents ofsubsp.Rousi [J]. Glob Seabuckthorn Res Dev, 2005, 3(4): 25–27. [陳雛, 張浩, 肖蔚. 中國(guó)沙棘果實(shí)的部分化學(xué)成分提取 [J]. 國(guó)際沙棘研究與開發(fā), 2005, 3(4): 25–27. doi: 10.3969/j.issn.1672-4836.2005.04.006.]

[9] MA X M, GUO Y J, WANG L S. Studies on the chemical constituents of[J]. China J Chin Mat Med, 2004, 29(5): 472. [馬學(xué)敏, 郭亞健, 王力生. 麻葉蕁麻的化學(xué)成分研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2004, 29(5): 472. doi: 10.3321/j.issn:1001-5302.2004.05.031.]

[10] ZHOU Z H, YANG C R. Chemical constituents of crude green tea, the material oftea in Yunnan [J]. Acta Bot Yunnan, 2000, 22(3): 343–350. [周志宏, 楊崇仁. 云南普洱茶原料曬青毛茶的化學(xué)成分 [J]. 云南植物研究, 2000, 22(3): 343–350. doi: 10.3969/j.issn.2095- 0845.2000.03.017.]

[11] ZENG Y C, LIANG S Y, WU J H, et al. Chemical constituents fromand their antitumor activities [J]. Chin Trad Patent Med, 2018, 40(8): 1768–1772. [曾永長(zhǎng), 梁少瑜, 吳俊洪, 等. 白花蛇舌草化學(xué)成分及其抗腫瘤活性 [J]. 中成藥, 2018, 40(8): 1768– 1772. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2018.08.019.]

[12] CHEN Y K, ZENG A, LUO Z H, et al. Advances on pharmacology ofsitosterol [J]. J Guangdong Pharm Univ, 2021, 37(1): 148–153. [陳元堃, 曾奧, 羅振輝, 等.-谷甾醇藥理作用研究進(jìn)展 [J]. 廣東藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 2021, 37(1): 148–153. doi: 10.16809/j.cnki.2096-3653.202004 0801.]

[13] GUAN X Q, MAO J L, TANG Y X, et al. Research progress on phar- macological effects of-coumaric acid [J]. Chin Trad Herb Drugs, 2018, 49(17): 4162–4170. [管西芹, 毛近隆, 唐迎雪, 等. 對(duì)香豆酸的藥理作用研究進(jìn)展 [J]. 中草藥, 2018, 49(17): 4162–4170. doi: 10. 7501/j.issn.0253-2670.2018.17.030.]

[14] CHENG Y F, GUAN W. Determination of quercetin and kaempferol inby high performance liquid chromatography [J]. China J Pharm Econom, 2020, 15(10): 34–36. [程韻霏, 關(guān)巍. 高效液相色譜法測(cè)定人字草中槲皮素和山柰酚的含量 [J]. 中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué), 2020, 15(10): 34–36. doi: 10.12010/j.issn.1673-5846.2020.10.007.]

[15] LIU Y. Study on the regulation mechanism of rubiadin on osteoclast differentiation [D]. Yan’an: Yan’an University, 2021. [劉元. 甲基異茜草素對(duì)破骨細(xì)胞分化調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D]. 延安: 延安大學(xué), 2021. doi: 10.27438/d.cnki.gyadu.2021.000246.]

Chemical Constituents fromWilld.

YU Liang1,2, YANG Shuai1,2, HUANG Zhugang2, LIU Yong2, JIANG Haiqiang2, Lü Qingtao2*

(1. Shandong Provincial Key Laboratory of Chemical Drugs, Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences,Ji’nan 250101, China; 2. School of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Ji’nan 250355, China)

To understand the chemical composition of, nine compounds were isolated from the 70% ethanol extract by column chromatography on silica gel and preparative high-performance liquid chromato- graphy. Based on physicochemical properties and spectral data, their structures were identified as stigmasterol (1),-sitosterol (2), rubiadin (3), 2,6-dihydroxy-1-methoxyanthraquinone (4),-sitosterol-3---d-glucoside (5),- coumaric acid (6), kaempferol (7), quercetin (8) and 2-hydroxy-3-methoxy-7-methylanthraquinone (9). Compound4 was a new compound. The Fr.4, Fr.4-2 and Fr.4-4 fractions in chloroform extract had strong activity against human endometrial carcinoma Ishikawa cells, with IC50of 52.8, 78.1 and 27.5g/mL, respectively.

; Chemical constituent; 2,6-dihydroxy-1-methoxyanthraquinone; Anti-endometrial cancer activity

10.11926/jtsb.4556

2021-11-02

2022-03-18

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81173614)資助

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (Grant No. 81173614).

于亮(1985年生)，藥師，主要從事藥物化學(xué)研究。E-mail: yulianger777@163.com

E-mail: luqingtao9@163.com