陳艷蓉, 劉 艷, 王 珊, 張 凈

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院 老年科, 北京, 100050)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)為中老年群體多發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病類型，受肺功能低下及氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎性反應(yīng)等諸多因素影響，心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著增高，其中COPD合并冠心病(CHD)較為常見[1-2]。COPD合并CHD病情復(fù)雜，治療及疾病良好轉(zhuǎn)歸難度較大，故早期對(duì)疾病進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估極為重要[3-4]。超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)為臨床常見炎性反應(yīng)標(biāo)志物，正常生理狀態(tài)下其血清含量較低，若發(fā)生感染、組織損傷等則會(huì)異常增高，可用于疾病診療評(píng)估，但敏感性與特異性欠佳。組胺(HA)屬活性胺化合物，在免疫調(diào)節(jié)、宿主對(duì)病原微生物防御作用、變態(tài)反應(yīng)中具有重要作用，且與心血管疾病密切相關(guān)。王澈等[5]研究證實(shí)，老年CHD合并COPD血清HA含量異常增高，并與肺功能關(guān)系密切，可用于疾病的診斷?？扇苄运铇蛹?xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)為嗜中性粒細(xì)胞活化受體，其激活后可增加炎性介質(zhì)生成量，在COPD及心血管疾病中均呈過(guò)表達(dá)狀態(tài)，參與了上述疾病的發(fā)病與進(jìn)展過(guò)程。臨床研究[6]證實(shí), COPD患者血清sTREM-1顯著高于正常水平，且與病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切。此外，微小核糖核酸(miRNA)作為新型基因調(diào)節(jié)分子，可影響靶基因表達(dá)，從而對(duì)信號(hào)通路及炎性反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，在多種疾病中具有重要作用[7]。趙盼盼等[8]研究證實(shí), 微小核糖核酸-145(miR-145)在炎癥疾病中呈異常表達(dá)狀態(tài)，可參與炎癥及免疫調(diào)節(jié)過(guò)程，在COPD、CHD中均具有重要調(diào)控作用。本研究選取COPD伴CHD患者進(jìn)行分析，旨在明確HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP的表達(dá)特征及檢測(cè)價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月—2021年12月107例COPD合并CHD的患者為研究組，另選取同期健康體檢者107例為對(duì)照組。研究組男59例，女48例; 年齡64～90歲，平均(77.09±11.71)歲; COPD病情嚴(yán)重程度為輕度29例，中度39例，重度21例，極重度18例; 紐約心臟病協(xié)會(huì)(NYHA)心功能分級(jí)為Ⅰ級(jí)27例, Ⅱ級(jí)40例, Ⅲ級(jí)23例, Ⅳ級(jí)17例; 合并疾病為高血壓病39例，糖尿病21例，高脂血癥37例，其他11例。對(duì)照組男63例，女44例; 年齡61～90歲，平均(76.98±13.02)歲。2組年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究組納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2021年修訂版)》[9]中COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)，《穩(wěn)定性冠心病診斷與治療指南》[10]中CHD診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查確診者; ② 新確診者; ③ 臨床資料完整者; ④ 知曉本研究，簽署同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 存在其他心腦血管及呼吸系統(tǒng)疾病者; ② 存在精神系統(tǒng)疾病者; ③ 存在肝、腎等臟器器質(zhì)性病變者; ④ 存在免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)疾病者; ⑤ 存在惡性腫瘤者; ⑥ 既往采取心肺手術(shù)治療者; ⑦ 具有良好依從性及理解溝通能力，可配合完成調(diào)查研究者。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn): ① 體檢健康者; ② 無(wú)基礎(chǔ)疾病者; ③ 知情同意本研究者; ④ 具有良好認(rèn)知功能、理解能力者。

1.2 方法

1.2.1 miR-145檢測(cè)方法: 晨起抽取所有受檢者4 mL空腹靜脈血，置于抗凝離心管中，室溫條件下以2 500轉(zhuǎn)/min離心10 min, 取上層血漿400 μL, 加入提取劑(Trizol)1 mL, 置于-70 ℃環(huán)境中儲(chǔ)存待檢。提取總RNA, 經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)儀實(shí)施實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR), 內(nèi)參選用U6, miRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系15 μL。無(wú)菌雙餾水4.16 μL, RNase抑制劑0.19 μL(20 U/μL), 10×反轉(zhuǎn)錄緩沖液1.5 μL, 逆轉(zhuǎn)錄酶1 μL(50 U/μL), 脫氧核糖核苷酸(dNTPs, 100 mmol/L) 0.15 μL,U6與miRNA特異性莖環(huán)引物3 μL, RNA模板5 μL。反應(yīng)條件: 30 min 16 ℃、30 min 42 ℃、5 min 85 ℃，擴(kuò)增反應(yīng)體系20 μL, 雙蒸餾水7.67 μL, 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA 1.33 μL, TaqMan通用混合物溶液(2×)10 μL, 引物與探針Mix(20×)1 μL。擴(kuò)增條件: 95 ℃條件下實(shí)施10 min預(yù)變性, 95 ℃下變性15 s, 60 ℃下復(fù)性60 s, 共45個(gè)循環(huán)。各反應(yīng)體系內(nèi)熒光信號(hào)達(dá)到預(yù)設(shè)閾值經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)即Ct值，通過(guò)2-△△Ct法計(jì)算miR-145相對(duì)表達(dá)量。

1.2.2 HA及sTREM-1、hs-CRP檢測(cè)方法: 抽取所有受檢者3 mL外周靜脈血，常溫條件下以3 500轉(zhuǎn)/min離心10 min, 取上清液，放入-80 ℃環(huán)境中儲(chǔ)存待檢; 通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)HA及sTREM-1、hs-CRP水平，試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄2組HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平，比較研究組不同COPD病情嚴(yán)重程度者HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平，比較不同NYHA心功能分級(jí)患者HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平，分析HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平與COPD病情嚴(yán)重程度、NYHA心功能分級(jí)的關(guān)聯(lián)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 2組各指標(biāo)水平比較

研究組血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平高于對(duì)照組, miR-145水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

表1 2組指標(biāo)水平比較

2.2 不同COPD病情嚴(yán)重程度患者指標(biāo)水平比較

不同COPD病情嚴(yán)重程度的COPD合并CHD患者血清HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 隨著病情嚴(yán)重程度的加劇，血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平持續(xù)增高，miR-145水平持續(xù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同COPD病情嚴(yán)重程度者各指標(biāo)水平比較

2.3 不同NYHA心功能分級(jí)患者指標(biāo)水平比較

不同NYHA心功能分級(jí)的COPD合并CHD患者血清HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 隨著NYHA心功能分級(jí)的增高，血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平持續(xù)增高, miR-145水平持續(xù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表3。

表3 不同NYHA心功能分級(jí)患者指標(biāo)水平比較

2.4 各指標(biāo)水平與COPD病情嚴(yán)重程度、NYHA心功能分級(jí)的關(guān)聯(lián)性分析

經(jīng)Pearson檢驗(yàn)可知，血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平與COPD合并CHD患者COPD病情嚴(yán)重程度、NYHA心功能分級(jí)呈正相關(guān)(P<0.05), miR-145水平與COPD病情嚴(yán)重程度、NYHA心功能分級(jí)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05), 見表4。

表4 指標(biāo)水平與COPD病情嚴(yán)重程度、NYHA心功能分級(jí)的關(guān)聯(lián)性分析

3 討 論

CHD為COPD常見合并癥，對(duì)患者生命健康及疾病預(yù)后轉(zhuǎn)歸造成了巨大威脅[11-12]。因此，早期對(duì)COPD合并CHD進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估具有重要意義。HA為小分子生物胺，在胃酸分泌、過(guò)敏反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、機(jī)體神經(jīng)信號(hào)傳遞等病理、生理過(guò)程中均具有重要作用。同時(shí)，HA能調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫細(xì)胞與固有免疫細(xì)胞，引發(fā)、加快動(dòng)脈粥樣硬化，與CHD等疾病均密切關(guān)聯(lián)[13-14]。此外, HA可引發(fā)變應(yīng)性炎性反應(yīng)，增加血管通透性及P物質(zhì)生成量，后者可參與神經(jīng)活動(dòng)及免疫調(diào)節(jié)、炎癥發(fā)生與進(jìn)展。MOYA-GARCA A A等[15]研究表明, HA的代謝是極為復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，其可連接多種代謝過(guò)程，在呼吸系統(tǒng)疾病中具有重要作用。本研究結(jié)果顯示，研究組血清HA水平高于對(duì)照組，證實(shí)HA可能參與了疾病發(fā)病及進(jìn)展。炎癥反應(yīng)是COPD合并CHD發(fā)病及進(jìn)展的重要基礎(chǔ)之一, hs-CRP屬急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可在機(jī)體發(fā)生感染等病變后異常增高，但敏感性及特異性較低，導(dǎo)致其單獨(dú)應(yīng)用存在一定局限性。sTREM-1不僅具備ICAM-1大部分序列，還能結(jié)合淋巴細(xì)胞功能相關(guān)分子，在免疫細(xì)胞介導(dǎo)中具有重要作用[16]。SHIBER S等[17]研究證實(shí)，心血管疾病患者血漿sTREM-1水平高于健康體檢者，可準(zhǔn)確鑒別診斷是否為特異性胸痛，并能評(píng)估冠狀動(dòng)脈病情嚴(yán)重程度，預(yù)測(cè)疾病預(yù)后。周榕等[18]研究結(jié)果表明, sTREM-1為嗜中性粒細(xì)胞活化受體，被激活后能造成炎性介質(zhì)過(guò)度釋放, COPD合并CHD患者血清sTREM-1表達(dá)水平異常增高，參與了疾病發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程。本研究結(jié)果也顯示，研究組血清hs-CRP、sTREM-1水平高于對(duì)照組，與上述研究結(jié)果一致，表明hs-CRP、sTREM-1也參與了COPD及CHD的發(fā)病及進(jìn)展過(guò)程，主要是因?yàn)閔s-CRP、sTREM-1為炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)因子，可參與炎性反應(yīng)、免疫細(xì)胞介導(dǎo)過(guò)程，引發(fā)炎癥反應(yīng)，對(duì)體內(nèi)血管產(chǎn)生損傷，加劇病情。

隨著臨床研究不斷深入, miRNAs在呼吸系統(tǒng)及心血管疾病中的應(yīng)用價(jià)值引起廣泛關(guān)注, miRNAs可參與疾病發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程，持續(xù)性慢性炎性反應(yīng)可造成部分miRNA表達(dá)異常，可造成大小氣道重構(gòu)、肺氣腫形成、血管重塑[19]。miR-145能靶向調(diào)節(jié)缺氧所誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移及增殖等過(guò)程，進(jìn)而增加炎性介質(zhì)生成量，誘導(dǎo)上皮細(xì)胞凋亡，參與COPD發(fā)病及進(jìn)展[20]。此外, CHD發(fā)病與脂質(zhì)浸潤(rùn)、免疫機(jī)制、炎癥等關(guān)系密切，而miR-145可調(diào)節(jié)血管平滑肌遷移與增殖，也可參與CHD的病理過(guò)程。蔡曉航[21]研究顯示，冠心病患者miR-145均呈低表達(dá)，檢測(cè)其水平可評(píng)估冠心病患者病情嚴(yán)重程度。本研究中，研究組miR-145水平低于對(duì)照組，與其研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)miR-145低表達(dá)是導(dǎo)致COPD合并CHD發(fā)生及進(jìn)展的重要因素之一。miR-145可影響血管平滑肌的遷移、增殖，并下調(diào)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶含量，通過(guò)抑制炎癥保護(hù)細(xì)胞，若miR-145表達(dá)降低，則會(huì)引發(fā)異常，增大相關(guān)疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究對(duì)不同病情嚴(yán)重程度的COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表達(dá)情況進(jìn)行探討，結(jié)果顯示，不同COPD病情及NYHA心功能分級(jí)患者血清HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP水平存在顯著差異，提示HA、sTREM-1、hs-CRP高表達(dá)及miR-145低表達(dá)是導(dǎo)致COPD合并CHD患者病情加劇及進(jìn)展的重要因素。主要原因?yàn)? ① COPD合并CHD患者受病情等影響可出現(xiàn)免疫活動(dòng)，致使淋巴細(xì)胞呈異常高表達(dá)狀態(tài)，且病情越嚴(yán)重，上述現(xiàn)象越顯著，體內(nèi)炎性反應(yīng)及免疫反應(yīng)更加強(qiáng)烈，故血清HA、sTREM-1、hs-CRP水平越高。② miR-145可控制信號(hào)通路，其表達(dá)異常可活化促炎細(xì)胞因子，引發(fā)氣道反復(fù)炎性反應(yīng)與重塑; miR-145為血管內(nèi)皮上特殊miRNA, 其靶基因Ephrin-A3為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)所介導(dǎo)血管新生信號(hào)通路重要信號(hào)分子，在Hif-1a-VEGF信號(hào)通路的調(diào)節(jié)中具有重要作用，能促使內(nèi)皮細(xì)胞形成血管，有助于血管再生，故COPD及CHD者病情越嚴(yán)重, miR-145表達(dá)越低。

綜上所述, COPD合并CHD患者的HA、sTREM-1、miR-145、hs-CRP表達(dá)呈異常狀態(tài)，且增高或降低程度與COPD病情嚴(yán)重程度、NYHA心功能分級(jí)密切相關(guān)，因此臨床可通過(guò)檢測(cè)上述指標(biāo)水平對(duì)疾病進(jìn)行評(píng)估，并根據(jù)其表達(dá)情況制訂或調(diào)整干預(yù)方案，以保證疾病干預(yù)效果及預(yù)后的良好轉(zhuǎn)歸。