方 方,張苗苗,張再平,夏婧竹,馮有龍,曹 玲*

(1.江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，南京 210019; 2.南京簡智儀器設(shè)備有限公司，南京 210049)

局部麻醉藥是一類能在用藥部位可逆性阻斷感覺神經(jīng)沖動發(fā)生與傳遞的藥品[1]，可在保持意識清醒時引起可逆的局部組織痛覺消失。利多卡因和辛可卡因是目前臨床上應(yīng)用較廣的兩種局部麻醉藥，具有起效快、作用強、藥效久等特點，其中利多卡因更是有全能麻醉藥之稱。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)規(guī)定禁止在化妝品中添加麻醉藥。但是，很多祛皺抗衰老、局部修復(fù)的化妝品存在非法添加局部麻醉藥的現(xiàn)象，這些藥物會使皮膚細胞在短時間內(nèi)失去活性，面部皮膚、肌肉暫時麻痹和僵硬，皮膚看起來光滑很多。消費者如果長期或大量使用含有這些成分的化妝品，可能會產(chǎn)生皮膚過敏、心率加快等不良反應(yīng)，嚴重時會造成呼吸、心跳驟停，出現(xiàn)生命危險。

目前，局部麻醉藥的檢測方法主要有液相色譜法[2-4]、氣相色譜法[5]、液相色譜-質(zhì)譜法[6-8]等，這些方法雖然具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，但是分析時間長、效率低、儀器昂貴且對操作人員的專業(yè)能力要求較高，不利于現(xiàn)場快速檢測，無法全面滿足化妝品監(jiān)管需求。因此，有必要建立一種化妝品中局部麻醉藥的快速篩查方法。

表面增強拉曼光譜法(SERS)作為目前發(fā)展較快的一種分析技術(shù)，彌補了傳統(tǒng)拉曼光譜信號弱的短板，具有快速、高效、準(zhǔn)確的特點，廣泛應(yīng)用于食品違禁添加劑[9-11]、殘留農(nóng)獸藥[12-14]、保健食品非法添加劑[15-16]、化妝品安全風(fēng)險物質(zhì)[17-18]等的檢測，但尚未見SERS在化妝品中局部麻醉藥檢測中的相關(guān)應(yīng)用。鑒于此，本工作提出了SERS快速篩查化妝品中利多卡因和辛可卡因的方法，以期為監(jiān)管部門打擊化妝品中非法添加局部麻醉藥提供一定的技術(shù)支撐。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

SSR-3000型便攜式拉曼光譜儀;DM0412S 型離心機;MIX-30型渦旋混勻器;JC-CS200型超聲波清洗器。

單標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液:1 000 mg·L－1，取利多卡因、辛可卡因標(biāo)準(zhǔn)品各0.01 g(精確至0.000 1 g)，用甲醇溶液后置于2個10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻備用。使用時，用水稀釋至所需質(zhì)量濃度。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列:用水將單標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液逐級稀釋 成0.05，0.10，0.50，1.00，10.00，100.00 mg·L－1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。

增強劑助劑:取適量氯化鈉，用水溶解并稀釋，配制成1 mol·L－1氯化鈉溶液。

飽和氯化鈉溶液:在20 mL 水中緩慢加入氯化鈉，不斷攪拌至氯化鈉固體不再溶解為止。

0.1 mol·L－1鹽酸溶液:取鹽酸8.33 mL 至100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

加標(biāo)樣品:依次向固體乳膏、潤膚水、凝膠狀精華等[參考《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)進行檢驗，均未檢出利多卡因和辛可卡因]3 種基質(zhì)中同時加入利多卡因和辛可卡因標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，其中固體乳膏基質(zhì)中利多卡因和辛可卡因的加標(biāo)量均為2，5，10，20 mg·kg－1，潤膚水基質(zhì)中利多卡因和辛可卡因的加標(biāo)量均為5 mg·kg－1，凝膠狀基質(zhì)中利多卡因和辛可卡因的加標(biāo)量均為5 mg·kg－1。

利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品的純度為99.8%，辛可卡因標(biāo)準(zhǔn)品的純度為98.41%;甲醇、乙腈、正己烷、氯化鈉、鹽酸等試劑均為分析純;試驗用水為超純水。

1.2 儀器工作條件

激光波長785 nm;激光功率450 m W;掃描范圍250～2 800 cm－1;積分時間10 s。

1.3 試驗方法

取樣品約0.5 g于5 mL離心管中，加入飽和氯化鈉溶液0.5 mL，渦旋1 min。加入正己烷3 mL，超聲提取3 min，以4 000 r·min－1轉(zhuǎn)速離心30 s。取上清液2 mL，加 入0.1 mol·L－1鹽酸溶 液0.5 mL，振 蕩30 s，以4 000 r·min－1轉(zhuǎn)速離 心15 s，取下層提取液作待測液。取納米金溶膠150μL，加入待測液50μL以及1 mol·L－1氯化鈉溶液50μL，振蕩10 s后上機檢測。

由此造成的網(wǎng)點生存環(huán)境惡化，很可能導(dǎo)致出現(xiàn)網(wǎng)點倒閉現(xiàn)象，影響的不僅僅是總體業(yè)務(wù)量，更易造成全網(wǎng)絡(luò)鏈條不穩(wěn)。因此，無論何種影響，跨區(qū)取件最終造成的后果都是在損害快遞企業(yè)的利益，造成的結(jié)果都需要總部買單。

2 結(jié)果與討論

2.1 SERS特征峰組的選擇

利多卡因和辛可卡因標(biāo)準(zhǔn)品的普通拉曼光譜圖以及1.00 mg·L－1單標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白溶液(純水)的SERS圖見圖1。

圖1 利多卡因和辛可卡因的拉曼光譜圖Fig.1 Raman spectrograms of lidocaine and cinchocaine

由圖1(a)可知:利多卡因標(biāo)準(zhǔn)溶液大部分譜峰和標(biāo)準(zhǔn)品的基本一致，僅1 296 cm－1處的譜峰發(fā)生微小偏移，推測利多卡因與增強劑發(fā)生了化學(xué)吸附;利多卡因505，670，1 081，1 254 cm－1處譜峰的增強效果較 佳，539，792，1 526，1 578 cm－1處的次 之，1 296 cm－1處的較弱，幾乎難以識別;空白溶液1 526，1 578cm－1處的譜峰信號微弱，干擾較小。綜合考慮，試驗選擇505，670，1 081，1 254 cm－1處的譜峰作為利多卡因的SERS特征峰組。由圖1(b)可知:辛可卡因標(biāo)準(zhǔn)溶液在509，774，1 018，1 379，1 599 cm－1處有拉曼特征峰，和標(biāo)準(zhǔn)品的基本一致;空白溶液1 024 cm－1處的譜峰信號較強，會對1 018 cm－1處的特征峰產(chǎn)生一定干擾。綜合考慮，試驗選擇辛可卡因的SERS特征峰組為509，774，1 379，1 599 cm－1。

將1.00 mg·L－1的利多卡因、辛可卡因標(biāo)準(zhǔn)溶液與同濃度的阿米卡因、丁卡因、普魯卡因、丙胺卡因等4種同類局部麻醉藥的標(biāo)準(zhǔn)溶液的SERS圖進行比對，結(jié)果見圖2。

圖2 4種同類局部麻醉藥、利多卡因和辛可卡因的SERS圖Fig.2 SERS spectrograms of the 4 similar local anesthetics，lidocaine and cinchocaine

由圖2可知，4種同類局部麻醉藥的譜峰與利多卡因、辛可卡因的特征峰有少部分重合，但整體譜峰位置、峰形及拉曼信號強度與利多卡因、辛可卡因的差異較大，說明所選的SERS特征峰組特異性好，可用于定性篩查。

2.2 樣品處理方法的選擇

參照商檢行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 4147－2015《進出口化妝品中利多卡因、丁卡因、辛可卡因的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》[19]，取樣品約1.0 g于50 mL離心管中，加入甲醇20 mL，渦旋30 s，超聲提取20 min，以10 000 r·min－1轉(zhuǎn)速離心5 min，取上層提取液作待測液，按照1.3節(jié)方法進行測試，此為方法1;取樣品約0.5 g于5 mL離心管中，加入飽和氯化鈉溶液3 mL，渦旋1 min，加入乙腈1 mL，超聲提取3 min，以4 000 r·min－1轉(zhuǎn)速離心30 s，取上層提取液作待測液，按照1.3節(jié)方法進行測試，此為方法2。分別采用本方法和方法1，2分析固體乳膏加標(biāo)樣品(加標(biāo)量20 mg·kg－1)，結(jié)果見圖3。

由圖3可知:方法1所得SERS圖中未見利多卡因和辛可卡因的特征峰;方法2 和本方法所得SERS圖中有明顯的利多卡因和辛可卡因的拉曼信號，但是在方法2所得SERS圖中僅能夠識別部分特征峰，利多卡因的1 081 cm－1和1 254 cm－1處的特征峰以及辛可卡因的1 599 cm－1處的特征峰均無法識別，而本方法能夠觀察到所選的全部特征峰組。因此，試驗選擇采用本方法處理樣品。

圖3 不同方法處理固體乳膏加標(biāo)樣品所得的SERS圖Fig.3 SERS spectrograms of the solid cream spiked samples pretreated by different methods

2.3 增強劑助劑及其用量的選擇

鹵素離子(Cl－1、Br－1、I－1)可以與金、銀溶膠形成絡(luò)合物，從而有效提升納米溶膠的表面拉曼增強效果[20-21]。試驗比較了分別以1 mol·L－1氯化鈉、溴化鈉和碘化鈉溶液作為增強劑助劑時固體乳膏加標(biāo)樣品(加標(biāo)量20 mg·kg－1)的SERS圖，結(jié)果見圖4。

圖4 選用不同類型增強劑助劑時固體乳膏加標(biāo)樣品的SERS圖Fig.4 SERS spectrograms of the solid cream spiked samples with different reinforcer sauxiliaries

由圖4可知，鹵素離子的表面拉曼增強效果大小順序依次是Cl－1、Br－1、I－1，因此試驗選擇的增強劑助劑為1 mol·L－1氯化鈉溶液。

進一步比較了1 mol·L－1氯化鈉溶液的用量分別為20，50，100μL時固體乳膏加標(biāo)樣品(加標(biāo)量20 mg·kg－1)的SERS圖，結(jié)果見圖5。

由圖5可知，1 mol·L－1氯化鈉溶液的用量變化對利多卡因表面拉曼增強效果影響不大，但對辛可卡因有一定的影響，其中1 379，1 599 cm－1處特征峰的拉曼信號隨著用量的增加先增強后減弱。綜合考慮，試驗選擇的1 mol·L－1氯化鈉溶液的用量為50μL。

圖5 不同用量氯化鈉溶液下固體乳膏加標(biāo)樣品的SERS圖Fig.5 SERS spectrograms of the solid cream spiked samples with different amounts of NaCl solution

2.4 檢出限

按照試驗方法測定混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，當(dāng)儀器對特征峰識別率不大于50%時，判定檢測結(jié)果為陰性。結(jié)果顯示:利多卡因和辛可卡因特征峰的拉曼信號隨著混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度的增加而增強;當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為0.05 mg·L－1時，不能有效識別利多卡因505，670 cm－1處和辛可卡因509，774 cm－1處的特征峰;當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為0.10 mg·L－1時，可有效識別利多卡因和辛可卡因4個特征峰。因此，試驗確定利多卡因和辛可卡因的儀器檢出限為0.10 mg·L－1。

為確定方法檢出限，按照試驗方法分析不同加標(biāo)量的固體乳膏樣品，結(jié)果見圖6。

圖6 不同加標(biāo)量的固體乳膏樣品的SERS圖Fig.6 SERS spectrograms of the solid cream samples with different adding amounts of standard materials

結(jié)果顯示:固體乳膏空白基質(zhì)對利多卡因和辛可卡因的檢測無干擾;固體乳膏樣品中利多卡因和辛可卡因的拉曼信號隨著加標(biāo)量的增加而增強，當(dāng)加標(biāo)量為5 mg·kg－1時，2種局部麻醉藥的特征峰均可明顯識別出，但當(dāng)加標(biāo)量降至2 mg·kg－1時，無法識別出除主峰(利多卡因1 254 cm－1，辛可卡因1 379 cm－1)以外的其他特征峰，特征峰識別率小于50%，故將利多卡因和辛可卡因的方法檢出限確定為5 mg·kg－1。和同濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，固體乳膏樣品SERS基線更復(fù)雜，拉曼信號明顯減弱，這是由于化妝品基質(zhì)復(fù)雜，其中防腐劑、保濕劑等添加劑較多，對試驗結(jié)果干擾較大。

2.5 方法普適性

為檢驗該方法的普適性，按照試驗方法分析潤膚水和凝膠狀精華加標(biāo)樣品，結(jié)果見圖7。

圖7 潤膚水和凝膠狀精華空白基質(zhì)和加標(biāo)樣品的SERS圖Fig.7 SERS spectrograms of the blank matrices and spiked samples of lotion and gel essence

由圖7可知，潤膚水和凝膠狀精華加標(biāo)樣品中利多卡因和辛可卡因的特征峰清晰可見，并且空白基質(zhì)不干擾這兩種藥物的檢測，說明本方法普適性較好。

本工作以納米金溶膠作增強劑，以0.1 mol·L－1氯化鈉溶液作增強劑助劑，采用SERS 定性篩查固體乳膏、潤膚水和凝膠狀精華等化妝品中的利多卡因和辛可卡因，該方法具有檢測時間短、操作簡單、普適性強、檢出限低等優(yōu)點，對化妝品中非法添加局部麻醉藥的快速檢測具有一定的指導(dǎo)意義。