孫淦琳，郭樸原，楊 韻，李建勇，陳 斌，陳 聰

（云南農業(yè)大學 植物保護學院/云南生物資源保護與利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201）

益 蝽（Picromerus lewisi）隸 屬 半 翅 目（Hemiptera）蝽 科（Pentatomidae）益 蝽 亞 科（Asopinae）益蝽屬（Picromerus）昆蟲，主要分布于我國云南、貴州、四川、廣西、海南、河南等多個省份[1-2]。益蝽是農林業(yè)生產上重要的捕食性天敵昆蟲，其若蟲和成蟲對亞洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）、草地貪夜蛾（Spodoptera frugiperda）、黏蟲（Mythimna separate）、煙青蟲（Helicoverpa assulta）、斜紋夜蛾（Spodoptera litura）等多種作物重要害蟲的幼蟲均具有捕食作用[3-7]。

害蟲的化學防治常導致害蟲抗藥性提升、農殘超標和環(huán)境污染等問題發(fā)生，而生物防治措施可較好地規(guī)避上述問題。生物防治作為一種安全有效的害蟲防治策略，是害蟲長期防控體系的重要組成部分，其中利用天敵昆蟲防治害蟲是害蟲生物防治的重要措施之一[8]。近年來，天敵昆蟲產品由于良好的防治效果且具有對環(huán)境友好的特性，使得其在農林業(yè)生產中得到了越來越廣泛的應用，因此，需要成熟的規(guī)模化人工繁育技術來生產更多優(yōu)質的天敵昆蟲。天敵昆蟲的室內人工繁育已有較多的研究報道，如花絨寄甲（Dastarcus helophoroides）、瓢蟲、寄生蜂等，這些天敵昆蟲以卵或成蟲的形式已被開發(fā)成商品進行運輸、釋放和田間應用[9-13]。益蝽作為許多作物害蟲的重要捕食性天敵昆蟲，利用其較強的捕食能力防治害蟲具有重要價值[14]，當前對益蝽的人工繁育卵塊收集研究已有一些報道，但益蝽室內飼養(yǎng)過程中仍存在產卵分散、卵塊不集中、收集時極易散落、散落卵粒影響卵的孵化等問題。李喜旺等[15]在室內人工繁育中，采用放置折疊呈“扇形”的普通紙張于交配產卵容器內供益蝽成蟲產卵，蔡東海等[16]在飼養(yǎng)盒的四壁及底壁放置貼紙供益蝽雌成蟲產卵，雌成蟲產卵仍然存在分散的現(xiàn)象，卵分散的問題還是沒有得到有效解決，這不利于益蝽卵塊的有效收集和應用，阻礙了益蝽在農林業(yè)作物害蟲防治生產實踐上的應用。目前，國內外關于天敵昆蟲產卵介質的篩選研究較少[17-18]，而對于具有良好應用潛力的捕食性天敵益蝽的產卵行為和產卵介質篩選至今尚未見報道。觀察益蝽的產卵行為及尋找有利于卵塊聚攏和運輸的產卵介質對于益蝽的大規(guī)模利用有一定參考價值。

產卵介質是影響天敵昆蟲產卵的因素之一，適宜的產卵介質會吸引天敵并刺激雌成蟲進行產卵[19-20]。昆蟲的產卵介質包括植物組織材料和人工合成材料，植物組織材料可模擬生態(tài)環(huán)境，具有昆蟲適應性強的特性，但由于植物組織材料在室溫條件下會快速失水皺縮萎蔫，較難維持活性，不利于天敵繁育及商品化，且植物組織材料的獲取和栽培條件也增加了生產成本[21-23]。然而，人工合成材料則具有易獲得、成本低、耐存放、產品包裝和運輸應用性強等特性[24]。為此，選擇易獲得、可重復利用、成本低的牛皮紙、硫酸紙、A4 打印紙和紗布4 種材料作為產卵介質，在室內開展益蝽人工繁育研究，觀察益蝽成蟲的產卵行為，同時比較雌成蟲在折疊與未折疊處理的4 種介質上的產卵選擇性，并分析介質對益蝽卵孵化的影響，旨在為益蝽室內人工繁育提供適宜的產卵介質，解決益蝽雌成蟲產卵分散的問題，提高繁育效率，同時為益蝽卵塊商品化生產并更好地應用于農林作物害蟲的防治提供科學依據。

1 材料和方法

1.1 供試材料

包括塑料杯（上部直徑7.2 cm，底部直徑4.6 cm，高8.2 cm，側面扎有小孔），面積均為24 cm2的牛皮紙、硫酸紙、A4 打印紙和紗布4 種產卵介質，小型無線攝像機（型號KL-MN02）。

1.2 供試蟲源及飼養(yǎng)方法

供試益蝽由云南農業(yè)大學植物保護學院昆蟲實驗室提供；黃粉蟲購于市場。采用孔徑為0.125 mm尼龍網養(yǎng)蟲籠（長×寬×高=50 cm×50 cm×50 cm），將盛有濕潤脫脂棉的培養(yǎng)皿（直徑120 mm）放入養(yǎng)蟲籠內底部，再取黃粉蟲（Tenebrio molitor）蛹20 頭放入上述培養(yǎng)皿中，供益蝽取食。根據試驗需要，在養(yǎng)蟲籠內投放益蝽后，將養(yǎng)蟲籠放置于（27±1）℃、相對濕度（70±5）%、光周期14 L∶10 D 的江南RXZ型人工氣候箱中進行試驗研究。飼養(yǎng)過程中，隔日取出剩余食物殘渣及益蝽的蛻皮并補充黃粉蟲蛹，保持養(yǎng)蟲籠內的環(huán)境清潔。

1.3 試驗方法

1.3.1 益蝽雌成蟲的產卵行為觀察 在室內，觀察益蝽雌成蟲的產卵行為。選取已交配且處于產卵盛期（羽化后15～20 d）的益蝽雌成蟲置于放有菜豆植株的養(yǎng)蟲籠內飼養(yǎng)，飼養(yǎng)方法及條件同1.2。每天定時近距離肉眼觀察益蝽雌成蟲的產卵動作，同時觀察記錄益蝽雌成蟲的產卵位置、卵的排列和卵塊的卵數量，連續(xù)觀察統(tǒng)計10 d[25-26]。益蝽雌成蟲的產卵全過程使用小型無線攝像機記錄觀察。

1.3.2 益蝽雌成蟲對不同介質的產卵選擇偏好研究 選擇牛皮紙、硫酸紙、A4 打印紙、紗布4 種材料作為益蝽雌成蟲的產卵介質，將各種介質剪成長方形（長×寬=6 cm×4 cm），分別將折疊處理和未折疊處理的4 種介質懸掛于塑料杯中，每杯懸掛一種介質。每種介質為1 個處理，每個處理分別設置3 個重復，每個重復5 對成蟲。將各處理組的塑料杯放入養(yǎng)蟲籠內，飼養(yǎng)方法及條件同1.2。每天定時統(tǒng)計雌成蟲在不同介質上的產卵量并記錄產卵持續(xù)時間，同時觀察在不同介質上益蝽卵塊的分布狀態(tài)，直至雌成蟲死亡為止。

以益蝽雌成蟲在不同介質上的卵塊集中度、產卵量、總產卵量以及產卵持續(xù)時間反映其對不同材料的產卵選擇偏好。卵塊集中度越高，產卵量及總產卵量越大，產卵持續(xù)時間越長表明益蝽雌成蟲對該種介質材料的產卵選擇具有偏好性[17]。

1.3.3 不同介質對益蝽卵孵化率的影響試驗 將各種介質的益蝽卵塊剪下，分別放入墊有脫脂棉的培養(yǎng)皿中，每個培養(yǎng)皿放置卵塊1 片。每種介質分別各設置3 個重復，每個重復5 片。將裝有卵的所有培養(yǎng)皿置于溫度（27±1）℃、相對濕度（70±5）%、光周期14 L∶10 D 的江南RXZ 型人工氣候箱內，每天定時觀察記錄卵的孵化情況，統(tǒng)計分析卵在不同介質上的孵化率。

1.4 數據處理

試驗數據采用Excel 2019和DPS 9.5進行處理，并采用GraphPad Prism 9 作圖，通過Tukey 法多重比較進行不同介質上卵塊集中度、單雌產卵量、單雌總產卵量、產卵持續(xù)時間及不同介質上卵孵化率的差異顯著性分析，結果均以平均值±標準誤表示。按照以下公式計算總產卵量、卵塊集中度、孵化率[17，21]。

2 結果與分析

2.1 益蝽雌成蟲的產卵行為

益蝽雌成蟲的產卵行為主要分為3個步驟：（1）尋找合適的產卵位置：雌成蟲偏好將卵產于濕潤且粗糙的菜豆葉片背面。（2）產卵：雌成蟲能多次產卵，在確定好產卵位置后，靜止不動，用足固定后開始產卵，產卵過程中后足岔開較平時稍大；此時雌成蟲將產卵器伸出體外一部分，卵的末端先出現(xiàn)，在確認卵末端黏附在葉片表面后，腹部末端向上收縮將卵剩余部分迅速排出，產下短柱狀卵粒，隨后身體會上下浮動數秒，產卵器緩慢收回；兩粒卵的產卵間隔時間平均為13.73 s，雌成蟲在葉片背部沿著從基部到端部的順序排列卵，卵塊的形狀和大小由產卵的位置決定，每排2～6 粒卵不等，其中以4 粒及5 粒卵居多，分別占24.00%和30.00%；最終所有卵排列呈長方形或菱形的卵塊，偶爾也存在近圓形卵塊，每個卵塊5～60 粒卵不等，其中以21～30 粒及31～40 粒 的 卵 塊 占 比 較 多，分 別 為34.46% 和36.25%。（3）停歇：在產卵結束后，雌成蟲不會迅速離開，而是在原地停留5～10 min 后才離開，在此期間觸角會偶爾上下活動，但未觀察到明顯的梳洗行為。完成上述一次完整的產卵過程后，益蝽雌成蟲會間隔2～7 d 繼續(xù)下一次產卵，很少有間隔1 d 繼續(xù)產卵的情況（圖1）。

圖1 益蝽雌成蟲產卵行為Fig.1 Oviposition behavior of femaleP.lewisi

2.2 益蝽雌成蟲在不同介質上的卵塊分布

益蝽雌成蟲在A4 打印紙、牛皮紙、硫酸紙和紗布4種不同介質上產的卵均以卵塊形式分布（圖2），表明益蝽雌成蟲在不同介質上產的卵塊均較集中，但集中度不同。

圖2 益蝽雌成蟲在不同介質上產的卵塊Fig.2 Egg mass produced byP.lewisifemale adults on different mediums

2.3 益蝽雌成蟲對不同介質的產卵選擇性

2.3.1 益蝽雌成蟲在不同介質上的產卵集中度

由圖3 可知，雌成蟲在4 種不同介質上的產卵集中度存在顯著差異（P＜0.05）。在不同介質上的產卵集中度由高到低依次為紗布32.54%＞A4 打印紙19.91%＞牛皮紙9.76%＞硫酸紙5.00%。紗布上的產卵集中度顯著高于其他3 種介質，A4 打印紙上的產卵集中度顯著高于牛皮紙和硫酸紙，而牛皮紙上的產卵集中度與硫酸紙差異不顯著。

雌成蟲在上述4種折疊介質上的產卵集中度之間也存在顯著差異。折疊紗布上的產卵集中度最高為38.86%，顯著高于其他3 種折疊介質；折疊牛皮紙上的產卵集中度為30.41%，顯著高于折疊硫酸紙和折疊A4 打印紙；折疊A4 打印紙上的產卵集中度最低為22.98%，與折疊硫酸紙24.28%之間差異不顯著（圖3）。

雌成蟲在A4打印紙與折疊A4打印紙上的產卵集中度差異不顯著，但在紗布與折疊紗布、牛皮紙與折疊牛皮紙、硫酸紙與折疊硫酸紙介質上的產卵集中度均存在顯著差異（圖3）。

圖3 益蝽雌成蟲在不同介質上的產卵集中度Fig.3 Oviposition concentration ofP.lewisifemale adults on different mediums

2.3.2 益蝽雌成蟲在不同介質上的產卵量 從表1可知，益蝽雌成蟲在A4 打印紙、牛皮紙、硫酸紙和紗布4種不同介質上的產卵量之間存在顯著差異。雌成蟲在紗布上的產卵量最高，顯著高于其他3 種介質，在A4 打印紙上的產卵量顯著高于牛皮紙和硫酸紙，在硫酸紙上的產卵量最低，顯著低于其他3種介質。同樣，雌成蟲在4種不同介質上的總產卵量之間也存在顯著差異。其中A4 打印紙上的總產卵量最高，硫酸紙上最低；硫酸紙上的總產卵量顯著低于其他3 種介質；A4 打印紙、紗布、牛皮紙兩兩之間的總產卵量差異不顯著。

益蝽雌成蟲在4種折疊介質上的產卵量存在顯著差異。折疊紗布上的產卵量最高，顯著高于折疊A4打印紙和折疊硫酸紙，但與折疊牛皮紙之間差異不顯著。折疊A4 打印紙、折疊硫酸紙、折疊牛皮紙兩兩之間的產卵量差異不顯著。雌成蟲在4種折疊介質上的總產卵量間差異不顯著，其中在折疊紗布上的總產卵量最高，在折疊硫酸紙上最低（表1）。

表1 益蝽雌成蟲在不同介質上的產卵量和總產卵量Tab.1 Oviposition quantity and total oviposition quantity ofP.lewisifemale adults on different mediums

雌成蟲在牛皮紙與折疊牛皮紙、硫酸紙與折疊硫酸紙上的產卵量均存在顯著差異，但A4 打印紙與折疊A4 打印紙、紗布與折疊紗布差異不顯著。雌成蟲在A4 打印紙與折疊A4 打印紙、牛皮紙與折疊牛皮紙、紗布與折疊紗布上的總產卵量差異均不顯著（表1）。

2.3.3 益蝽雌成蟲在不同產卵介質上的產卵持續(xù)時間 由圖 4可知，益蝽雌成蟲在未折疊處理的 4種產卵介質上的產卵持續(xù)時間差異不顯著，由高到低依次為紗布（37.87 d）＞牛皮紙（36.27 d）＞A4 打印紙（36.07 d）＞硫酸紙（34.33 d）。在4種折疊介質上的產卵持續(xù)時間差異也不顯著，在折疊紗布上的產卵持續(xù)時間最長（38.27 d），而折疊硫酸紙最短（35.13 d）。

圖4 益蝽雌成蟲在不同介質上的產卵持續(xù)時間Fig.4 Oviposition duration ofP.lewisifemale adults on different mediums

2.4 不同介質對益蝽卵孵化率的影響

由表2 可知，益蝽卵在折疊紗布、紗布、折疊A4打印紙、A4 打印紙、折疊牛皮紙、牛皮紙、折疊硫酸紙、硫酸紙上均能正常孵化，表明供試產卵介質不會影響益蝽卵的存活。4 種產卵介質的折疊與未折疊8種處理對益蝽卵孵化率的影響均不顯著。益蝽卵在 8種處理之間的孵化率由高到低依次為折疊A4 打印紙（90.84%）＞硫酸紙（90.72%）＞折疊牛皮紙（90.60%）＞折 疊 硫 酸 紙（90.48%）＞折 疊 紗 布（90.47%）＞紗布（90.40%）＞A4 打印紙（90.32%）＞牛皮紙（90.25%）。

表2 益蝽卵在不同介質上的孵化率Tab.2 Hatching rate ofP.lewisieggs on different mediums

3 結論與討論

本研究發(fā)現(xiàn)，益蝽雌成蟲的產卵行為主要包括產卵位置搜尋、產卵、停歇3 個階段，結果與三葉蟲螢（Emeia pseudosauteri）[25]及 深 點 食 螨 瓢 蟲（Stethorus punctillum）[27]的產卵行為存在相似之處，開始產卵時均通過晃動觸角來搜尋產卵位置，且雌蟲均能多次產卵，但益蝽雌成蟲兩次產卵間會間隔一定的時間，這與天敵昆蟲東亞小花蝽（Orius sauteri）[21]和南方小花蝽（Orius similis）[22]具有連續(xù)產卵的習性不同，可能是因為益蝽屬于中等體型的天敵，其卵粒大需要積累的營養(yǎng)物質較多，其卵發(fā)育成熟較小花蝽這類小型昆蟲慢。昆蟲雌成蟲喙和觸角在產卵場所搜尋中發(fā)揮著重要作用[28-29]，然而益蝽觸角在整個產卵過程中的具體作用有待深入研究。

益蝽雌成蟲產卵均以卵塊形式分布，但卵塊存在分散的普遍現(xiàn)象，可能是為了避免子代的食物資源競爭或自相殘食。然而產卵分散的問題不利于天敵昆蟲的人工規(guī)模繁育和利用，卵塊的集中收集對于天敵昆蟲的商品化應用具有至關重要的作用，是天敵昆蟲卵塊有效利用的一個重要環(huán)節(jié)[8，19]。為解決這一問題，本試驗開展了雌成蟲對不同介質的產卵選擇性研究，發(fā)現(xiàn)雌成蟲在不同介質上產的卵均以卵塊形式分布，卵塊均較集中但集中度不同，其中在折疊紗布上的產卵集中度、產卵量和總產卵量均最高，且產卵持續(xù)時間最長，表明雌成蟲對4種產卵介質中的折疊紗布具有最高的產卵偏好選擇性。光滑的產卵介質會降低昆蟲的產卵量，如荔枝葉片光滑可減少荔枝蒂蛀蟲（Conopomorpha sinensis）的產卵[30]。雌成蟲選擇將卵產在粗糙的紗布表面上，而不是較光滑的硫酸紙上，可能由于粗糙的表面能提高卵的附著，使卵塊不易掉落，可解決益蝽雌成蟲產卵分散的問題，助力益蝽的室內人工規(guī)模繁育和田間應用。本研究結果還表明，將產卵介質進行折疊處理后，相較于未折疊處理的介質，益蝽雌成蟲的產卵量存在增大的趨勢。這與前人研究結果相似，如MALINGA 等[18]研究發(fā)現(xiàn)，螽斯（Ruspolia differens）在折疊處理的塑料布上的產卵量更大，可以替代棉絮或天然材料的產卵介質；侯崢嶸等[17]研究表明，異色瓢蟲（Harmonia axyridis）在條狀折疊紙片上的產卵量大、集中度高。出現(xiàn)這一現(xiàn)象可能是因為折疊處理模擬出昆蟲寄主植物葉片的褶皺部分，為昆蟲提供了產卵所需的遮蔽場所，更有利于昆蟲的產卵。產卵介質的顏色及軟硬程度也會對昆蟲的產卵造成影響[31-32]。本研究中，硫酸紙不管是否經過折疊處理，益蝽的產卵量均低于其他介質，是否由于硫酸紙的顏色為半透明白色而干擾益蝽的視覺，還有待進一步研究。本研究中，折疊與未折疊的產卵介質對益蝽卵孵化率的影響差異不顯著，所有處理組的益蝽卵孵化率均較高，超過90.00%，與不同介質對異色瓢蟲卵孵化率的影響研究結果相似[17]，表明產卵介質對益蝽卵的孵化率影響不大。

本研究結果表明，折疊紗布是室內規(guī)模繁育益蝽的有效產卵介質，以折疊紗布作為產卵介質時，益蝽的產卵集中度高，可有效解決雌成蟲產卵分散的問題；同時，益蝽雌成蟲的產卵量大且卵的孵化率高。此外，供試產卵介質材料成本低且易獲得，還可以循環(huán)多次使用，有利于益蝽卵產品的保存、包裝、運輸和應用等。