董 威，武凌云

（秭歸縣中醫(yī)醫(yī)院，湖北 秭歸 443600）

肝癌作為臨床上常見的一種惡性腫瘤，其發(fā)病與肝硬化、病毒性肝炎、環(huán)境等因素有關(guān)[1]。近年來(lái)，超聲及介入技術(shù)被廣泛應(yīng)用于肝癌患者的治療中，其中超聲引導(dǎo)下微波凝固治療較為常用，可使肝癌患者的5 年病情復(fù)發(fā)率降至40% 以下[2]。超聲引導(dǎo)下微波凝固治療尤其適用于治療小肝癌，可使患者的5 年生存率達(dá)到80% 左右。超聲引導(dǎo)下微波凝固治療的療效與肝癌根治性手術(shù)相當(dāng)，且具有能實(shí)現(xiàn)監(jiān)控微波熱場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)，可有效凝固肝癌病灶，促使其壞死。治療后，患者局部的淋巴細(xì)胞表達(dá)明顯升高，表明肝癌患者采用超聲引導(dǎo)下微波凝固治療具有一定預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的作用[3]。為了進(jìn)一步保障超聲引導(dǎo)下微波凝固治療的抗腫瘤及預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的作用，本次研究聯(lián)用了局部瘤區(qū)注射高聚生的治療方式。高聚生作為一種生物制劑，是從金黃色葡萄球菌代謝產(chǎn)物中提取制成，可抑制腫瘤細(xì)胞活性，修復(fù)損傷組織和細(xì)胞，對(duì)提高機(jī)體免疫力有積極的促進(jìn)作用[4]。本文以我院收治的86 例肝癌患者為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行分組對(duì)照研究，旨在探討超聲引導(dǎo)瘤區(qū)注射高聚生協(xié)同微波凝固治療對(duì)肝癌患者局部細(xì)胞免疫的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對(duì)象為我院于2021 年2 月至2022 年2 月期間收治的肝癌患者86 例。以治療方式的差異作為分組原則，將其中單純行超聲引導(dǎo)下微波凝固治療的43例肝癌患者設(shè)為對(duì)比組，將其中行超聲引導(dǎo)瘤區(qū)注射高聚生協(xié)同微波凝固治療的43 例肝癌患者設(shè)為試驗(yàn)組。對(duì)比組中，有男性患者23 例，女性患者20 例；年齡40 ～69 歲，平均年齡（56.19±2.17）歲；病程2 ～5年，平均病程（4.05±0.85）年；腫瘤直徑2.0 ～6.5 cm，平均腫瘤直徑（4.21±0.43）cm；腫瘤分化程度分布：低分化、中分化、高分化患者分別有10 例、25 例、8 例。試驗(yàn)組中，有男性患者22 例，女性患者21 例；年齡41 ～69 歲，平均年齡（56.26±2.09）歲；病程3 ～5年，平均病程（4.48±0.80）年；腫瘤直徑2.2 ～6.6 cm，平均腫瘤直徑（4.68±0.41）cm；腫瘤分化程度分布：低分化、中分化、高分化患者分別有12 例、22 例、9 例。兩組上述一般資料對(duì)比，P＞0.05。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：1）經(jīng)病理學(xué)檢查確診為原發(fā)性肝癌。2）肝癌CNLC 分期為Ⅰa 期，部分患者為Ⅰb 期。3）Child-Pugh 分級(jí)為A 級(jí)、B 級(jí)。4）臨床資料完整且能接受隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：1）經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)患繼發(fā)性肝癌。2）合并其他類型惡性腫瘤。3）合并免疫缺陷性疾病或血液系統(tǒng)疾病。4）臨床資料缺失或拒絕隨訪。

1.3 治療方法

對(duì)對(duì)比組43 例患者行超聲引導(dǎo)下微波凝固治療，在此基礎(chǔ)上，對(duì)試驗(yàn)組43 例患者行超聲引導(dǎo)瘤區(qū)注射高聚生協(xié)同治療。使用的儀器及設(shè)備：超聲引導(dǎo)微波凝固治療儀、絕緣微波輻射天線、穿刺引導(dǎo)針、半導(dǎo)熱敏電阻測(cè)溫針。設(shè)置超聲引導(dǎo)微波凝固治療儀的各項(xiàng)治療參數(shù)，微波頻率：2450 MHz，微波輸出功率：40 ～75 W。治療前，經(jīng)腹部超聲檢查明確癌灶的相關(guān)情況，包括癌灶大小、具體位置、內(nèi)部血流情況及與周圍組織的關(guān)系等，據(jù)此制定微波凝固治療方案（治療時(shí)間、絕緣微波輻射天線入路方式、各項(xiàng)參數(shù)、進(jìn)針?lè)绞降龋３曇龑?dǎo)下微波凝固治療方法：確定穿刺部位后，常規(guī)消毒鋪巾、局部麻醉，超聲引導(dǎo)下穿刺。置入穿刺引導(dǎo)針，抽出內(nèi)芯，將微波天線置入，并撤出部分穿刺引導(dǎo)針，使微波天線顯露出來(lái)。將半導(dǎo)熱敏電阻測(cè)溫針置于目標(biāo)病灶周圍5 mm 處（治療性測(cè)溫）、重要臟器邊緣（保護(hù)性測(cè)溫）。靜脈麻醉成功后，對(duì)存在滋養(yǎng)血管的目標(biāo)病灶先實(shí)施微波損毀后給予微波凝固（時(shí)間5 ～10 min）。微波治療后，若確定腫瘤壞死，則3 周后先對(duì)試驗(yàn)組行試驗(yàn)性高聚生肌內(nèi)注射，注射時(shí)間為3 d，注射量分別為500 U、1000 U、2000 U。注射后若患者未出現(xiàn)任何過(guò)敏反應(yīng)，則于高聚生肌內(nèi)注射后的第3 d、第7 d、1 個(gè)月、3 個(gè)月及6 個(gè)月時(shí)，分別行超聲引導(dǎo)瘤區(qū)注射高聚生協(xié)同治療。治療時(shí)體位選取仰臥位或側(cè)臥位（左側(cè)肢體在上），超聲引導(dǎo)下選擇穿刺點(diǎn)，麻醉方式為局部浸潤(rùn)麻醉，將引導(dǎo)針置于皮下，將介入穿刺針置于目標(biāo)病灶中心處，緩慢輸注2000 U 高聚生。

1.4 免疫組化檢查方法

分別于治療前后經(jīng)肝穿刺活檢取標(biāo)本，方法：超聲引導(dǎo)下選擇穿刺點(diǎn)，穿刺部位常規(guī)消毒、鋪巾，局部浸潤(rùn)麻醉，取小切口（長(zhǎng)度2 mm），在超聲探頭的引導(dǎo)下，采用穿刺活檢槍取出組織條（1 mm×19 mm），其中腫瘤組織和周圍正常組織各占50%?；顧z組織常規(guī)行福爾馬林固定、脫水、透明、石蠟處理后，行免疫組化染色，對(duì)局部免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、分布情況進(jìn)行觀察。組織切片完成染色處理后，切片常規(guī)行緩沖液沖洗、脫水、浸泡、包埋處理，制成超薄切片，雙重染色。鏡下觀察測(cè)量窗內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞（免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+）浸潤(rùn)情況，陽(yáng)性細(xì)胞判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞相應(yīng)部位有棕色顆粒出現(xiàn)。了解單位面積內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞抗原的表達(dá)量，記錄浸潤(rùn)密度值，以mm2為單位。一個(gè)組織標(biāo)本取10 個(gè)視野，10 個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均值為該標(biāo)本中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。每個(gè)標(biāo)本測(cè)10 個(gè)測(cè)量窗口，計(jì)算平均值作為面密度。

1.5 觀察指標(biāo)

1）對(duì)比兩組治療前后組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤(rùn)密度值。2）治療后1 年，統(tǒng)計(jì)兩組病情復(fù)發(fā)情況，檢測(cè)血清異常凝血酶原（PIVKA- Ⅱ）和甲胎蛋白（AFP）水平。取兩組空腹血液樣本，經(jīng)離心處理（4000 r/min，5 min）獲得血清，檢測(cè)血清中PIVKA- Ⅱ、AFP 的濃度，檢測(cè)方法為化學(xué)發(fā)光免疫分析法，嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，繪制樣本數(shù)據(jù)直方圖，采用正態(tài)性檢驗(yàn)，資料滿足正態(tài)分布。計(jì)量資料以±s表示，行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，行卡方（χ2）檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前后組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+浸潤(rùn)密度值的對(duì)比

治療前，兩組組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤(rùn)密度值對(duì)比，P＞0.05。治療后，兩組組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤(rùn)密度值均高于治療前，P＜0.05；試驗(yàn)組組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+的浸潤(rùn)密度值均高于對(duì)比組，P＜0.05。詳見表1。

表1 兩組治療前后組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+浸潤(rùn)密度值的對(duì)比（mm2，± s）

表1 兩組治療前后組織標(biāo)本中免疫細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD57+浸潤(rùn)密度值的對(duì)比（mm2，± s）

組別 時(shí)間 CD3+CD4+CD8+CD57+對(duì)比組（n=43）治療前 14.25±2.19 9.25±1.03 5.63±0.64 14.23±2.36治療后 31.36±3.54 15.31±1.54 15.32±1.30 26.32±2.47試驗(yàn)組（n=43）治療前 14.31±2.05 9.30±0.98 5.65±0.59 14.30±2.31治療后 48.62±5.34 18.20±1.32 19.21±1.53 40.39±3.01t值/P值（對(duì)比組治療前后比較）26.953/＜0.001 21.449/＜0.001 43.852/＜0.001 23.207/＜0.001t值/P值（試驗(yàn)組治療前后比較）39.333/＜0.001 35.499/＜0.001 54.225/＜0.001 45.090/＜0.001t值/P值（組間治療后比較）17.666/＜0.001 9.343/＜0.001 12.705/＜0.001 23.695/＜0.001

2.2 兩組治療后1 年病情復(fù)發(fā)率及血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平的對(duì)比

治療后1 年，兩組血清PIVKA- Ⅱ、AFP 的水平對(duì)比，試驗(yàn)組均低于對(duì)比組，P＜0.05。詳見表2。治療后1 年，對(duì)比組、試驗(yàn)組的病情復(fù)發(fā)率分別為58.14%（25/43）、34.88%（15/43），二 者 相 比，χ2=4.674，P=0.031。

表2 兩組治療后血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平的對(duì)比（± s）

表2 兩組治療后血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平的對(duì)比（± s）

組別 血清PIVKA-Ⅱ（mAU/mL）血清AFP（ng/mL）對(duì)比組（n=43）53.58±3.38 8.35±0.98試驗(yàn)組（n=43）20.32±2.14 5.65±1.06t值 54.518 12.264P值 ＜0.001 ＜0.001

3 討論

肝癌患者以肝區(qū)疼痛為首發(fā)癥狀。導(dǎo)致肝區(qū)疼痛出現(xiàn)的原因是腫瘤生長(zhǎng)速度較快，肝包膜張力隨著腫瘤的增大而增加[5]。此外，肝癌患者還可出現(xiàn)乏力、消瘦、腹脹、食欲下降等癥狀，若疾病進(jìn)展至晚期，還可表現(xiàn)為貧血、腹水、水腫等惡病質(zhì)[6]。臨床上對(duì)肝癌患者主要進(jìn)行肝切除治療。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)肝切除治療后，肝癌患者的5 年病情復(fù)發(fā)率超過(guò)60%[7]。術(shù)后1 ～2 年為肝癌患者病情復(fù)發(fā)的高峰期，原因在于進(jìn)行肝切除手術(shù)可在一定程度上促進(jìn)殘留癌灶的生長(zhǎng)，且若將肝大部分切除可引發(fā)免疫功能低下，從而促使患者的病情復(fù)發(fā)[8]。20 世紀(jì)70 年代，微波技術(shù)開始應(yīng)用于臨床，主要用于止血、組織切割等領(lǐng)域[9]。近年來(lái)隨著超聲診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，微波療法在肝癌治療中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，超聲引導(dǎo)下微波凝固治療已被廣泛應(yīng)用于肝癌的治療中[10]。研究發(fā)現(xiàn)，人體組織細(xì)胞內(nèi)外液中包含多種極性分子，如水、離子、蛋白質(zhì)等[11]。對(duì)肝癌患者進(jìn)行微波凝固治療時(shí)，微波可產(chǎn)生交變電場(chǎng)，細(xì)胞內(nèi)外液中的極性分子可因振動(dòng)或摩擦而產(chǎn)生熱量，從而使微波凝固治療相較于其他類型的局部介入治療在熱效率、凝固范圍等方面更具優(yōu)勢(shì)[12]。微波凝固治療的頻率為2450 MHz 左右，微波電極可接收到經(jīng)同軸電纜傳導(dǎo)的高頻能量，產(chǎn)生的熱效應(yīng)可起到理想的促進(jìn)組織凝結(jié)的作用。治療期間，引導(dǎo)針可與瘤體接觸，有效傳導(dǎo)微波能量。在行局部微波凝固治療時(shí)，應(yīng)確保整個(gè)瘤體覆蓋于微波凝固范圍內(nèi)，這屬于該介入手術(shù)的難點(diǎn)。對(duì)于直徑＜3 cm 的瘤體，微波凝固治療期間可采用單電極；對(duì)于直徑＞3 cm 的瘤體，微波凝固治療期間應(yīng)采用雙電極[13-14]。有研究表明，行微波凝固治療的肝癌患者在局部病灶壞死的同時(shí)，還可明顯提高此處淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平，說(shuō)明此療法具有理想的抗腫瘤作用[15]。為了解決肝癌患者微波凝固治療后病情復(fù)發(fā)率高的問(wèn)題，目前臨床上常在微波凝固治療后聯(lián)用高聚生瘤體注射法。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞免疫功能降低是導(dǎo)致肝癌患者病情復(fù)發(fā)的重要誘因。高聚生是一種高科技生物制劑，屬于惡性腫瘤超抗原生物制劑，在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時(shí)，還可提高機(jī)體的免疫功能[16]。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，高聚生可有效激活免疫細(xì)胞，并促使免疫細(xì)胞增殖、釋放多種細(xì)胞因子，增強(qiáng)細(xì)胞毒性作用，提高機(jī)體的免疫功能。

本研究結(jié)果證實(shí)，肝癌患者行超聲引導(dǎo)瘤區(qū)注射高聚生協(xié)同微波凝固治療的效果較理想，可有效增強(qiáng)局部細(xì)胞免疫功能，并可降低患者的病情復(fù)發(fā)率。