汪津 唐妮娜

為滿足醫(yī)院快速發(fā)展的需求，泰州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科更新了一臺(tái)速度達(dá)到300測(cè)試/h的全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀：羅氏cobas 8000 e 801，用于檢測(cè)甲狀腺激素指標(biāo)。相較于原先的羅氏cobas 6000 e 602，除了檢測(cè)速度的提升，e 801允許運(yùn)行狀態(tài)下加載試劑和消耗品，具有較高的正常運(yùn)行時(shí)間[1]。根據(jù)中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)制定的ISO 15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[2]的規(guī)定，現(xiàn)用檢驗(yàn)程序的要素包括儀器、試劑、校準(zhǔn)品等如果發(fā)生變更，如試劑升級(jí)、校準(zhǔn)品溯源性改變、儀器更新等，都需要重新對(duì)其性能進(jìn)行驗(yàn)證[2]，以保證檢驗(yàn)質(zhì)量，為臨床提供精確的數(shù)據(jù)。本研究對(duì)羅氏cobas 8000 e 801電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀分析甲狀腺功能五項(xiàng)激素基本性能進(jìn)行驗(yàn)證，其中包括：精密度、正確度、線性范圍、參考區(qū)間、分析靈敏度等性能。

1 材料與方法

1.1 材料

來(lái)源于泰州市中醫(yī)院2022年8—10月門診，住院，體檢中心標(biāo)本，排除脂血、溶血、黃疸血清樣品。

1.1.1 儀器與試劑

德國(guó)羅氏診斷有限公司cobas 8000 e 801全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀、e 801配套試劑與校準(zhǔn)品批號(hào)，見(jiàn)表1。

表1 羅氏cobas 8000 e 801試劑及校準(zhǔn)品批號(hào)

1.1.2 質(zhì)控品

英國(guó)朗道免疫質(zhì)控品，水平1批號(hào)2074EC，水平2批號(hào)2079EC。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)室能力對(duì)比驗(yàn)證樣本（proficiency testing，PT）

2022年國(guó)家衛(wèi)生健康委臨檢中心內(nèi)分泌室間質(zhì)量評(píng)價(jià)樣本 202211，202212，202213，202214，202215。

1.2 方法

按照ISO15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的規(guī)定并參照相關(guān)文件[3]，檢驗(yàn)的具體操作按照泰州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科儀器及項(xiàng)目操作規(guī)程，對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)通過(guò)，每日質(zhì)控在控前提下進(jìn)行性能驗(yàn)證。

1.2.1 驗(yàn)證精密度

精密度驗(yàn)證應(yīng)包括重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度。參照相關(guān)文件[4-5]進(jìn)行操作，用于驗(yàn)證的樣本濃度水平接近廠家精密度聲明試驗(yàn)中所使用的濃度水平，連續(xù)測(cè)定5 d，每天一個(gè)分析批，每批測(cè)定兩個(gè)濃度水平，其中每個(gè)濃度水平同一樣品進(jìn)行3次的重復(fù)測(cè)定。通過(guò)相關(guān)文件[6]與Excel 2016，計(jì)算數(shù)據(jù)得出批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差與廠方的聲明值進(jìn)行比較，若＜廠家聲明值，則驗(yàn)證通過(guò)，若＞廠家聲明值，需進(jìn)一步計(jì)算廠家聲明的驗(yàn)證值。計(jì)算公式見(jiàn)圖1。

圖1 廠家聲明驗(yàn)證值計(jì)算公式

1.2.2 正確度驗(yàn)證

參照相關(guān)文件[3]中可比性驗(yàn)證方法，與國(guó)家衛(wèi)生健康委臨檢中心PT項(xiàng)目結(jié)果比對(duì)，使用室間質(zhì)評(píng)樣本的靶值進(jìn)行評(píng)價(jià)，檢測(cè)值與靶值之間的偏倚（%）與1/2的允許總誤差（allow total error，TEa）進(jìn)行比較，偏倚（%）=（測(cè)定值-靶值）÷靶值×100%；同時(shí)與泰州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科經(jīng)中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS） 認(rèn)可的經(jīng)性能驗(yàn)證符合要求的羅氏cobas 8000 e 602檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行比對(duì)，20份樣本的被測(cè)物濃度在線性范圍內(nèi)均勻分布，覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平。

1.2.3 線性范圍驗(yàn)證

參照相關(guān)文件[7-9]提供的方案進(jìn)行驗(yàn)證。選取高濃度樣品與低濃度樣品的值接近廠商聲明線性范圍的上限和下限。將低濃度樣品（L）與高濃度樣品（H）以5 L、4 L+1 H、3 L+2 H、2 L+3 H、1 L+4 H、5 H的體積比例混合，得到6個(gè)等濃度間隔的不同水平樣品系列。將樣品系列分別按照低→高、高→低、低→高的順序各檢測(cè)一次，3次得到計(jì)18個(gè)結(jié)果。將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析，得出最優(yōu)擬合方程。同時(shí)要求測(cè)量數(shù)據(jù)具有較高的測(cè)量精密度，否則將會(huì)降低統(tǒng)計(jì)功效。其次，只有結(jié)合臨床的實(shí)際情況才能夠具有實(shí)際價(jià)值，多項(xiàng)式回歸分析強(qiáng)調(diào)利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法判斷線性，不會(huì)考慮臨床過(guò)程中允許存在一定誤差，為此提出了對(duì)統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的非線性作程度判斷，計(jì)算最優(yōu)擬合曲線與直線的平均差異值（average difference line，ADL），設(shè)定 PctBnd ＜ 5%為臨床可允許的誤差，將ADL與WS/T 492-2016《臨床檢驗(yàn)定量測(cè)定項(xiàng)目精密度與正確度性能驗(yàn)證》的臨界值比較，ADL小于臨界值，判定為臨床可接受的非線性，最適方程為線性方程不需判斷。

1.2.4 參考區(qū)間驗(yàn)證

參照相關(guān)文件[6]收集20名健康人血清標(biāo)本，要求其年齡，性別等均勻分布，對(duì)羅氏試劑說(shuō)明書提供的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，20個(gè)樣本超出參考區(qū)間的數(shù)據(jù)不超過(guò)2個(gè)，則驗(yàn)證通過(guò)。

1.2.5 功能靈敏度驗(yàn)證

選取濃度接近廠家聲明的最低檢測(cè)限的樣本，連續(xù)測(cè)定5 d，每天該樣本重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算日間重復(fù)變異系數(shù)（coefficient of variation，CV），CV=標(biāo)準(zhǔn)差 /均值×100%＜20%[10]，則驗(yàn)證通過(guò)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2003和SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)和回歸方程。

2 結(jié)果

2.1 驗(yàn)證精密度結(jié)果

每個(gè)項(xiàng)目的兩個(gè)濃度的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（SD）均小于廠家聲明值或者驗(yàn)證值，具體結(jié)果見(jiàn)表2，驗(yàn)證通過(guò)。

表2 項(xiàng)目精密度驗(yàn)證結(jié)果

2.2 正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.2.1 PT結(jié)果可比性驗(yàn)證

用留存的2022年國(guó)家衛(wèi)生健康委臨檢中心第一次發(fā)放的PT樣本在e 801儀器上的檢測(cè)結(jié)果與回報(bào)結(jié)果的靶值偏倚分析見(jiàn)表3，均在允許范圍內(nèi)（T3/TSH/FT3/FT4：靶值 ±25%；T：靶值±20%）。驗(yàn)證通過(guò)。

表3 國(guó)家衛(wèi)生健康委臨檢中心PT樣本在e 801 檢測(cè)結(jié)果

2.2.2 不同檢測(cè)系統(tǒng)可比性驗(yàn)證

20份濃度覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平，均勻分布在線性范圍的樣本在e 801檢測(cè)系統(tǒng)上的檢測(cè)結(jié)果與泰州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科CNAS 認(rèn)可的經(jīng)性能驗(yàn)證符合要求的羅氏cobas 6000 e 602檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行比對(duì)，相關(guān)系數(shù)R2均＞0.99 ，系統(tǒng)差異性小，因此改變檢測(cè)系統(tǒng)后，對(duì)臨床結(jié)果影響小。具體比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 e 602與e 801項(xiàng)目可比性驗(yàn)證

2.3 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

各項(xiàng)目的最優(yōu)擬合方程，數(shù)據(jù)的精密度檢驗(yàn)及非線性程度的判斷見(jiàn)表5，驗(yàn)證通過(guò)。同時(shí)驗(yàn)證線性上限超出廠家所給上限的80%，驗(yàn)證線性下限未超出廠家所給的下限，因此廠家給出的線性范圍可用于臨床。

表5 線性范圍驗(yàn)證數(shù)據(jù)

2.4 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

選取的20名體檢中心的健康人樣本結(jié)果均在廠家給出的參考范圍以內(nèi)，驗(yàn)證通過(guò)。結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

2.5 功能靈敏度驗(yàn)證結(jié)果

選取濃度接近廠家聲明的最低檢測(cè)限的樣本，連續(xù)測(cè)定5 d，每天該樣本重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算得日間CV為8.04%＜20%，驗(yàn)證通過(guò)。數(shù)據(jù)見(jiàn)表7。

表7 功能靈敏度驗(yàn)證數(shù)據(jù)

3 討論

查閱各種文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)羅氏幾代電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的性能驗(yàn)證多有研究報(bào)道，包括型號(hào)e 411，e 601，e602等。對(duì)于2019年上市的羅氏新一代電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀e 801的性能驗(yàn)證鮮有對(duì)甲狀腺功能項(xiàng)目研究，性能驗(yàn)證具有重要的意義，對(duì)于實(shí)驗(yàn)中涉及中的各項(xiàng)檢驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)所涉及的各種檢測(cè)系統(tǒng)的性能以及進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所涉及的方法，都需要與臨床要求相符，符合檢驗(yàn)所需，以便保證患者的標(biāo)本檢測(cè)足夠準(zhǔn)確可靠，同時(shí)檢驗(yàn)人員應(yīng)對(duì)儀器的性能充分掌握。泰州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)新引進(jìn)的羅氏 e 801上檢測(cè)甲狀腺功能五項(xiàng)激素進(jìn)行性能驗(yàn)證，包括精密度、正確度、線性范圍、參考區(qū)間，以及TSH的分析靈敏度。

精密度是指在同一檢測(cè)系統(tǒng)下，對(duì)同一樣本進(jìn)行重復(fù)多次檢測(cè)，所得結(jié)果一致性程度，可以用標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)來(lái)表示不精密度，值越小，代表精密度越好，是反映測(cè)定結(jié)果隨機(jī)誤差大小程度的指標(biāo)。在檢測(cè)系統(tǒng)中，精密度性能屬于其中較為基本的一個(gè)分析性能，也是完成其他方法學(xué)評(píng)價(jià)的基本項(xiàng)。本次精密度檢測(cè)的方案所采用的樣本為是2個(gè)濃度水平，每日需進(jìn)行3次檢測(cè)，需保持5 d內(nèi)連續(xù)檢測(cè)，計(jì)算重復(fù)性精密度和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度。選用的是廠家精密度評(píng)價(jià)時(shí)濃度一致的臨床血清樣本，不應(yīng)用質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，因?yàn)橘|(zhì)控品與天然患者樣品的檢測(cè)存在基質(zhì)差異。計(jì)算所得的重復(fù)性精密度和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度均小于廠家聲明值或驗(yàn)證值，驗(yàn)證通過(guò)。

為了更好地反映正確度的驗(yàn)證情況，本次驗(yàn)證使用了兩種方法，與國(guó)家衛(wèi)生健康委臨檢中心發(fā)放的PT樣本進(jìn)行偏倚分析，另外一種方法是與本科室已通過(guò)ISO15189 評(píng)審的儀器進(jìn)行可比性驗(yàn)證。PT樣本在e 801上的檢測(cè)都為可接受結(jié)果，偏倚均＜1/2允許總誤差，大部分偏倚＜1/3允許總誤差，考慮到該P(yáng)T樣本為重復(fù)凍融的樣本，而且凍存時(shí)間超過(guò)一個(gè)月。進(jìn)行可比性驗(yàn)證的標(biāo)本覆蓋項(xiàng)目的廠家聲明的線性范圍，并且涵蓋醫(yī)學(xué)決定水平，相關(guān)系數(shù)R2均＞0.99 ，系統(tǒng)差異性小 ，因此改變檢測(cè)系統(tǒng)后對(duì)臨床結(jié)果影響小。

分析測(cè)量范圍便是所謂的定量檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍，在整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)中，如儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、操作程序、檢驗(yàn)人員等，可以對(duì)系列分析濃度的儀器最終輸出的信號(hào)間是否呈恒定比例的性能進(jìn)行評(píng)估的指標(biāo)。針對(duì)新鮮患者標(biāo)本，配比比例高低值不同，便可以通過(guò)測(cè)定，驗(yàn)證實(shí)測(cè)值和理論值的線性關(guān)系，從而對(duì)每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的線性范圍進(jìn)行評(píng)估。隨著檢驗(yàn)學(xué)的不斷發(fā)展及進(jìn)步，對(duì)于測(cè)量范圍的評(píng)價(jià)分子方法也越來(lái)越多，初期均是通過(guò)目測(cè)分析進(jìn)行判斷，逐漸地發(fā)展開(kāi)始出現(xiàn)了統(tǒng)計(jì)學(xué)回歸分析，由美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)制訂的評(píng)價(jià)方案 EP6P，再發(fā)展到目前的EP6A指南，有了較大改進(jìn)。其中EP6A方法是通過(guò)統(tǒng)計(jì)理論來(lái)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行有效分析，并在臨床上允許存在一定范圍內(nèi)的誤差，從而對(duì)非線性進(jìn)行合理判定，實(shí)際運(yùn)用價(jià)值顯著[11]。選用的患者血清樣本高低值濃度盡可能接近廠家聲明的線性范圍上限和下限，本次驗(yàn)證T3、T4、TSH等項(xiàng)目在廠家聲明的線性范圍內(nèi)均具有良好的線性。T4和FT4之間滿足結(jié)合常數(shù)K公式的動(dòng)態(tài)平衡，稀釋液與標(biāo)本在蛋白種類和水平前具有一定的水平差異，同時(shí)其他所結(jié)合的常數(shù)K也有一定的區(qū)別。所以FT4不適合進(jìn)行線性稀釋[12]。 FT3多是由T4所轉(zhuǎn)變的，且占據(jù)的比例較高，二者之間具有一定程度的動(dòng)態(tài)平衡性。FT3與FT4所具有的效應(yīng)相同，如果溯源FT3與FT4，可通過(guò)使用平衡透析或超濾法處理，這目前被定義為檢測(cè)游離激素的“金標(biāo)準(zhǔn)”[13]。

參考區(qū)間的設(shè)定可將正常人群作為檢測(cè)項(xiàng)目，隨著人群的年齡、性別等樣本類型的變化，設(shè)立相應(yīng)的區(qū)間。參考區(qū)間最常采用的建立方法是95%分布區(qū)間，因此根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目選擇不同年齡、不同性別要求樣本，共選擇健康人群20例作為樣本，所得到的測(cè)定結(jié)果，至少需要18個(gè)或以上處于廠家所聲明的參考區(qū)間內(nèi)，說(shuō)明參考區(qū)間驗(yàn)證通過(guò)，廠家所聲明的參考區(qū)間可用于本實(shí)驗(yàn)。其實(shí)，現(xiàn)在提倡個(gè)體化醫(yī)療和精準(zhǔn)醫(yī)療，所以“建立個(gè)體參考值”越來(lái)越受重視。

本次驗(yàn)證還進(jìn)行了TSH項(xiàng)目的分析靈敏度，TSH項(xiàng)目檢測(cè)是甲狀腺功能檢測(cè)的重要指標(biāo)之一、在人血清中含量極低，因此對(duì)檢測(cè)儀器的靈敏度，尤其是對(duì)低值區(qū)信號(hào)區(qū)分度的要求極高；若檢測(cè)體系中的本底值過(guò)高的話，就會(huì)對(duì)低值區(qū)的檢測(cè)造成較大干擾產(chǎn)生誤差，所以TSH靈敏度常被用來(lái)作為評(píng)估檢測(cè)儀器靈敏度的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。驗(yàn)證方法選用選取濃度接近廠家聲明的最低檢測(cè)限的樣本，連續(xù)測(cè)定5 d，每天該樣本重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算得日間CV為8.04%，＜20%，驗(yàn)證通過(guò)。

綜上所述，本科室完成了對(duì)羅氏e 801 電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上檢測(cè)的T3、T4、TSH、FT3、FT4項(xiàng)目的性能驗(yàn)證。其中包涵精密度、正確度、線性范圍、參考區(qū)間，以及TSH的分析靈敏度，驗(yàn)證均通過(guò)。說(shuō)明新引進(jìn)的儀器可以用于甲狀腺五項(xiàng)激素的臨床檢測(cè)，質(zhì)量達(dá)標(biāo)。