譚俊杰 江欣欣

清遠(yuǎn)市婦幼保健院兒科，清遠(yuǎn) 511510

重組人帕金森蛋白7（Parkinson's disease 7，PARK7）基因在1997 年被發(fā)現(xiàn)，是一種新的絲裂原依賴型癌基因。隨后在2003 年，被證實(shí)是帕金森?。≒arkinson's disease，PD）家族的致病基因之一［1］。PARK7廣泛存在于人體的腦、肝、腎、骨骼肌和生殖器官中，參與線粒體自噬途徑和細(xì)胞死亡、細(xì)胞氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞凋亡、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、分子伴侶等生物功能，參與腫瘤細(xì)胞的生存、生長(zhǎng)、抗氧化、轉(zhuǎn)移、侵襲及增殖，具有促進(jìn)細(xì)胞的抗化療能力［2-5］。

PARK7基因及蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

PARK7基因位于染色體1的P36.2～P36.3，長(zhǎng)約24 kb，包含8 個(gè)外顯子，其中2 個(gè)外顯子不參與編碼，也不參與蛋白質(zhì)翻譯。PARK7 mRNA含有567個(gè)編碼子，編碼189個(gè)氨基酸殘基的PARK7 蛋白［6］。PARK7 蛋白相對(duì)分子量約為20 kDa，有189個(gè)氨基酸，主要以二聚體形式存在，二級(jí)結(jié)構(gòu)由8 個(gè)α 螺旋和11 條β 鏈組成的α∕β 折疊，屬于保守的PARK7∕ThiJ∕PfpI 蛋白超家族［7］。在原核及真核細(xì)胞中，PARK7 基因具有高度的保守性，在人類與大鼠的進(jìn)化過(guò)程中，PARK7基因結(jié)構(gòu)是密切相似的［1］。

PARK7的生理功能

1.參與線粒體自噬

線粒體自噬是一種特異選擇性清除損傷的線粒體自噬現(xiàn)象，即自噬過(guò)程大致為：在饑餓、炎癥損傷、敗血癥、氧化應(yīng)激等情況下，DNA 突變、活性氧自由基產(chǎn)生增加、線粒體膜電位改變等共同作用下，線粒體出現(xiàn)功能障礙，進(jìn)而引起線粒體自噬相關(guān)蛋白激活，形成隔離膜包裹線粒體，導(dǎo)致線粒體自噬體的形成，線粒體自噬體與溶酶體融合，進(jìn)而形成線粒體自噬-溶酶體，線粒體在細(xì)胞溶酶體中完全降解，其降解產(chǎn)物可導(dǎo)致大量細(xì)胞因子的產(chǎn)生［8-9］。

PARK7 可通過(guò)參與PTEN誘導(dǎo)假定激酶1（PINK1）∕Parkin 經(jīng)典自噬通路［10-11］：PINK1 首先激活免疫復(fù)合物1（complex 1）、磷酸化Parkin 蛋白、鈣平衡調(diào)節(jié)及線粒體囊泡形成，進(jìn)而通過(guò)調(diào)節(jié)線粒體融合和分裂平衡性，參與線粒體穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)。同時(shí)，PINK1 能夠聚集電壓依賴性陰離子通道1（VDAC1）、miro 等蛋白，直接介導(dǎo)線粒體自噬過(guò)程。PINK1參與主要是通過(guò)抑制蛋白激酶A（PKA）的磷酸化，激活自噬蛋白LC-3 和裂解蛋白Drp-1。Parkin 蛋白具有4 個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域：RING0、RING1、IBR 和RING2，但是只有Ring1 是經(jīng)典的Ring 泛素化連接酶組裝E2 泛素化連接酶，它能促進(jìn)E2 泛素化連接酶結(jié)構(gòu)域硫脂鍵的釋放。當(dāng)線粒體受損時(shí)，PINK1 的MTS 序列會(huì)誘導(dǎo)線粒體膜電位的去極化，完整的PINK1穩(wěn)定地固定在線粒體外膜并自身激活，同時(shí)，它將細(xì)胞質(zhì)中未被抑制的Parkin 招募并激活到受損的線粒體上，然后激活Parkin泛素化線粒體融合蛋白2（Mfn2）和線粒體電壓依賴性陰離子選擇通道1（VDAC1）等蛋白，再募集LC-3等蛋白家族，進(jìn)而形成線粒體自噬-溶酶體，最后通過(guò)自噬作用將因老化受損的線粒體消除［12-13］。

小鼠過(guò)表達(dá)PARK7 蛋白可增加線粒體自噬標(biāo)志蛋白LC3Ⅱ和Beclin-1的表達(dá)，激光共聚集及投射電鏡顯示自噬標(biāo)志物微結(jié)構(gòu)的改變及增加。當(dāng)線粒體膜電位JC-1 下降時(shí)，PARK7 蛋白發(fā)生轉(zhuǎn)移，引起線粒體自噬，進(jìn)一步清除老化受損的線粒體，說(shuō)明PARK7 直接參與線粒體自噬［3，14］。Lopert 和Patel［15］研究表明敲除PARK7 基因后，小鼠早期線粒體中H2O2含量明顯升高，PARK7 依賴的線粒體缺失直接導(dǎo)致氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞死亡∕凋亡的敏感性增加。

2.參與氧化應(yīng)激

PARK7 通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮抗氧化作用，包括可通過(guò)清除活性氧自由基直接發(fā)揮抗氧化活性。PARK7 通過(guò)Cys106 殘基與凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 1（apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1）結(jié)合，從而以兩種不同的方式阻止ASK1 的活化。首先，PARK7 阻止ASK1 的同源聚合化，從而阻止ASK1 激活凋亡途徑；其次，PARK7 通過(guò)調(diào)節(jié)另一種抑制劑血清硫氧還蛋白（thioredoxin，TRX）的結(jié)合來(lái)阻止ASK1 的活化。在正常靜息情況下，減少的TRX 與ASK1結(jié)合，抑制ASK1活性，使其處于非活性狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí)，TRX 被氧化并釋放ASK1，ASK1 促進(jìn)細(xì)胞凋亡。當(dāng)PARK7 與ASK1 結(jié)合，阻止TRX 釋放ASK1，從而為細(xì)胞提供抗氧化保護(hù)作用［16-17］。

PARK7 調(diào)節(jié)許多轉(zhuǎn)錄因子的活性，包括Nrf2、p53 和NF-κB 等［17］。核因子E2 相關(guān)因子2（Nrf2）是上調(diào)細(xì)胞中抗氧化基因表達(dá)的最相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，它與抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合，包括TRX和谷胱甘肽系統(tǒng)等關(guān)鍵成員。其中，Nrf2∕ARE 參與細(xì)胞抗炎，亦在抗凋亡和免疫損傷中發(fā)揮重要作用。PARK7 在Nrf2 的調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，通過(guò)激活Nrf2 有助于發(fā)揮抗氧化反應(yīng)。研究表明，PARK7∕Nrf2 信號(hào)通路的激活對(duì)機(jī)體抗氧化應(yīng)激損傷起到內(nèi)源性保護(hù)作用，證實(shí)PARK7 和Nrf2 蛋白均是內(nèi)源性保護(hù)蛋白［18］。此外，PARK7 通過(guò)降低Nrf2 的泛素化，穩(wěn)定Nrf2 蛋白及其下游的Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶等表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)報(bào)道，激活Nrf2 蛋白可有效保護(hù)糖尿病腎臟的氧化應(yīng)激損傷，啟動(dòng)內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制，在糖尿病早期階段PARK7 蛋白表達(dá)代償性增加，證明PARK7 激活Nrf2 相關(guān)信號(hào)通路可發(fā)揮內(nèi)源性保護(hù)作用［19］。當(dāng)PARK7 基因被敲除后，細(xì)胞的線粒體形態(tài)和功能受到影響，其中包含線粒體呼吸鏈損傷、活性氧產(chǎn)生增加、線粒體膜電位降低以及線粒體形態(tài)改變，導(dǎo)致溶酶體活性也下降，老化或損傷的線粒體使體內(nèi)活性氧過(guò)量蓄積，部分線粒體發(fā)生自噬作用，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或死亡［20］。

3.參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控

PARK7通過(guò)參與調(diào)控細(xì)胞內(nèi)外轉(zhuǎn)錄分子來(lái)發(fā)揮抗氧化應(yīng)激和介導(dǎo)細(xì)胞存活等主要功能，常見下游分子包括人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因（PTEN）、Nrf2、胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、ASK、p53、Bcl-2 等［21］。PTEN 是PARK7 下游分子，Oswald 等［22］提出氧化后的PARK7 可與PTEN 緊密結(jié)合，抑制其功能，由此增加了磷脂酰肌醇3-激酶∕蛋白激酶B（PI3K∕Akt）的磷酸化的活性狀態(tài)，介導(dǎo)結(jié)構(gòu)性突觸末端的可塑性。PARK7 通過(guò)激活ERK1∕2 途徑介導(dǎo)細(xì)胞存活和增殖，并通過(guò)抑制ASK1 激活來(lái)減弱細(xì)胞死亡信號(hào)傳導(dǎo)，在癌癥發(fā)病機(jī)理和神經(jīng)元存活中具有獨(dú)特作用［23］。p53蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，可以誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄一些基因，參與DNA 修復(fù)、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和程序性細(xì)胞死亡等蛋白的編碼。PARK7可直接與p53結(jié)合，抑制p53的磺?；瑥亩绊懩[瘤抑制因子p53∕Bax-caspase 途徑觸發(fā)的細(xì)胞凋亡［21］。PARK7 還通過(guò)調(diào)節(jié)Bcl-2 基因家族編碼的凋亡分子調(diào)控細(xì)胞凋亡，如PARK7 降低凋亡效應(yīng)分子Bax（BCL2-Associated X 蛋白）的表達(dá)，以氧化還原依賴性的方式誘導(dǎo)細(xì)胞存活［3，24］。

4.參與抑制凋亡

PTEN 基因作為PI3K∕Akt 信號(hào)通路的主要負(fù)性調(diào)控因子，是一個(gè)具有雙重特異磷酸酶活性的抑癌基因。在外界因素刺激下，細(xì)胞中的磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）可被激活，并使磷酯酰肌醇4，5-二磷酸（PIP2）磷酸化產(chǎn)生磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸（PIP3）。PIP3 可使PKD 聚集并使活化的激酶PKB∕Akt磷酸化，形成有利于細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。實(shí)驗(yàn)表明，PTEN 基因可以抑制PIP2 磷酸化，從而減少PIP3 產(chǎn)生，阻斷PI3K∕PKB∕Akt 通路的激活，抑制生長(zhǎng)和增殖。PARK7 是PTEN∕PI3K∕Akt 信號(hào)通路上游的負(fù)性調(diào)控因子，通過(guò)干擾沉默PARK7 后，PTEN 基因被釋放，PTEN∕PKB∕Akt 通路被阻斷激活，抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡［14，25-26］。在活性氧刺激下，細(xì)胞胞核中的PARK7 蛋白能夠與死亡域相關(guān)蛋白（DAXX）結(jié)合，抑制DAXX 出細(xì)胞核，并阻止DAXX 與細(xì)胞質(zhì)中的ASK1結(jié)合，從而抑制細(xì)胞凋亡［27］。

5.參與分子伴侶

Knobbe 等［28］對(duì)細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)譜定量分析，結(jié)果表明PARK7 可與糖酵解酶、熱休克蛋白Hsp70∕Hsp90 和過(guò)氧化物酶發(fā)生相互作用，Hsp70 可被PARK7 特異性識(shí)別結(jié)合后直接相互作用，在氧化應(yīng)激下PARK7 可抑制錯(cuò)誤折疊蛋白的積累，并通過(guò)與Hsp90 相互作用調(diào)節(jié)Akt 信號(hào)通路。此外，在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，PARK7蛋白被激活，并抑制殼聚糖、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和突觸核蛋白等分子形成多聚復(fù)合物的形成，直接參與分子伴侶的作用［29-30］。

6.PARK7參與其他通路

PARK7 還與許多細(xì)胞信號(hào)通路相互作用，參與細(xì)胞的生存，如Akt、HER3 等。其中，HER3 蛋白在細(xì)胞增殖和存活中起著至關(guān)重要的作用，乳腺癌患者的腫瘤組織HER3 和PARK7 的顯著共表達(dá)。PARK7 與HER3 結(jié)合的神經(jīng)蛋白（NRG）可誘導(dǎo)HER3 與其他靶向表皮生長(zhǎng)因子受體家族受體的異構(gòu)化，導(dǎo)致其磷酸化。癌細(xì)胞中PARK7 的過(guò)度表達(dá)可以增加HER3 的水平，促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤生長(zhǎng)。因此，PARK7 在乳腺癌細(xì)胞中的高表達(dá)預(yù)示HER3 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增加［31］。此外，PARK7 還能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB（NF-κB），增強(qiáng)其核運(yùn)輸和細(xì)胞存活率，NF-κB亦參與了癌癥的發(fā)生發(fā)展［32-33］。

PARK7與腎臟疾病的關(guān)系

1.PARK7與糖尿病腎病

糖尿病腎病可引起腎小球病變的主要病理變化為腎小球基底膜增厚，腎小球系膜肥大擴(kuò)張，系膜細(xì)胞外基質(zhì)和蛋白質(zhì)的積聚，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)功能受損。Wu 等［34］研究中，研究組蛋白在高誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷中，發(fā)現(xiàn)沉默Pim1（原癌基因蛋白質(zhì)c-pim-1）基因后可逆轉(zhuǎn)組蛋白誘導(dǎo)的足細(xì)胞內(nèi)PARK7 下降，同時(shí)發(fā)現(xiàn)組蛋白誘導(dǎo)的保護(hù)性自噬分子機(jī)制與雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相關(guān)，證明PARK7∕mTOR通路參與了糖尿病腎病的發(fā)病。Das 等［35］體外應(yīng)用葡萄糖孵育腎小球系膜細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)高糖可誘導(dǎo)PARK7 刺激Akt 激酶磷酸化，激活mTOR。當(dāng)沉默PARK7 基因后，Akt 磷酸化隨之下降，高葡萄糖誘導(dǎo)的TORC1 活化被逆轉(zhuǎn)，說(shuō)明三者呈正相關(guān)關(guān)系。此外，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PARK7 和PTEN 聚合增加，加強(qiáng)了高糖環(huán)境下PTEN 的下調(diào)，由此推斷，高糖環(huán)境下腎小球足細(xì)胞和系膜細(xì)胞內(nèi)上調(diào)的PARK7 可通過(guò)PARK7∕mTOR 途徑減少高糖誘導(dǎo)的氧化損傷。Sun 等［36］在研究糖尿病大鼠心肌缺血∕再灌注（MIR）引起的急性腎損傷（AKI）發(fā)生機(jī)制時(shí)，與空白組、MIR 組和糖尿病組相比，糖尿病+MIR 組的PARK7 和Nrf2 表達(dá)顯著增加。在糖尿病條件下，MIR 誘發(fā)加劇腎功能下降，引起PARK7∕Nrf2 信號(hào)通路的上調(diào)，表明由MIR 誘導(dǎo)的糖尿病大鼠AKI可能與PARK7∕Nrf2途徑的激活有關(guān)。

2.PARK7與急性腎損傷

Leeds等［37］研究表明，膿毒癥相關(guān)性急性腎損傷是一種自身炎癥失衡，導(dǎo)致組織氧化應(yīng)激和自由基形成增加，從而使多種形式的細(xì)胞死亡。PARK7 是一種過(guò)氧化物酶蛋白，具有多種生物功能，包括抗細(xì)胞氧化應(yīng)激的能力，并證實(shí)膿毒血癥在PARK7 基因缺陷小鼠中引起更嚴(yán)重的腎損傷。實(shí)驗(yàn)證實(shí)PARK7 缺失會(huì)增加腎臟氧化應(yīng)激，與腎小管凋亡和DAXX 的表達(dá)增加有關(guān)。與體內(nèi)模型相似，使用髓樣收集導(dǎo)管細(xì)胞系（mIMCD3）和細(xì)胞毒性血清進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)顯示，從野生型小鼠獲得的血清可使s100A8∕s100A9、DAXX的表達(dá)增加。研究表明膿毒血癥中PARK7 通過(guò)控制氧化應(yīng)激，腎臟炎癥和DAXX 依賴性細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步說(shuō)明對(duì)腎小管具有保護(hù)作用。PARK7 缺失會(huì)增加腎臟氧化應(yīng)激，與腎小管凋亡和DAXX的表達(dá)增加有關(guān)。

3.PARK7與腎小管疾病

Shen等［38］通過(guò)大鼠腎小管近曲小管細(xì)胞在模擬不同糖濃度下，發(fā)現(xiàn)較低糖濃度時(shí)，PARK7 蛋白表達(dá)增加，但在暴露于高糖48 h 后，細(xì)胞中PARK7 蛋白表達(dá)降低。當(dāng)血糖濃度過(guò)高時(shí)，PARK7表達(dá)的降低可增加糖尿病患者對(duì)腎缺血∕再灌注損傷的脆弱性。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)PARK7 后，相關(guān)腎臟損傷指標(biāo)被逆轉(zhuǎn)，Nrf2 表達(dá)上升，證明PARK7 的過(guò)表達(dá)及PARK7∕Nrf2 途徑參與腎近曲小管細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。Yao 等［39］研究表明上調(diào)PARK7 后可通過(guò)抑制細(xì)胞質(zhì)PTEN 表達(dá)和Akt 活化來(lái)促進(jìn)腎小管間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，進(jìn)一步解釋了PARK7的表達(dá)和PTEN在纖維化中關(guān)系的調(diào)控作用。

4.PARK7與常染色體顯性多囊腎?。ˋDPKD）

Li 等［3］通過(guò)在IMCD3 細(xì)胞中敲除PARK7 以評(píng)估PARK7 對(duì)體外細(xì)胞表型和線粒體功能的影響。PARK7 在ADPKD 模型中被下調(diào)，依據(jù)p53 信號(hào)通路介導(dǎo)的增殖、凋亡、氧化應(yīng)激和線粒體代謝，減輕腎臟功能障礙和病理?yè)p害。

5.PARK7與腎臟纖維化

Eltoweissy 等［40］用促纖維化激動(dòng)劑血管緊張素Ⅱ處理腎臟成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞，使PARK7 的表達(dá)明顯上調(diào)，監(jiān)測(cè)腎臟纖維化小鼠模型的腎臟提取物和組織切片中的PARK7 表達(dá)，揭示了該蛋白的疾病分級(jí)調(diào)控。通過(guò)研究促纖維化激動(dòng)劑對(duì)PARK7的影響，PARK7及其突變體的相互作用配偶體的親和沉淀，揭示了膜聯(lián)蛋白在PARK7 抗氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制中的重要作用，并明確了該蛋白在腎纖維化中的作用。

6.PARK7與腎臟腫瘤

腎透明細(xì)胞癌是成人的一種高度惡性腫瘤。Trivedi等［41］的研究表明，通過(guò)siRNA 敲除PARK7 和使用質(zhì)粒過(guò)表達(dá)，PARK7 基因被顯著下調(diào)，突顯了PARK7 在腎細(xì)胞癌中對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡反應(yīng)。PARK7的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡顯著減少，而蛋白敲除則伴隨著順鉑處理的Caki-2 和A498細(xì)胞凋亡的增加，強(qiáng)調(diào)了PARK7在順鉑誘導(dǎo)的癌細(xì)胞凋亡中的重要作用。

雖然PARK7 在腎臟疾病中的作用尚未完全明確，但PARK7 作為新的多功能絲裂原依賴型癌基因，參與機(jī)體許多生理過(guò)程的調(diào)控，并參與腎臟疾病發(fā)生發(fā)展的病理過(guò)程。因此，隨著對(duì)PARK7 的不斷深入研究，加深了我們對(duì)于腎臟疾病的認(rèn)識(shí)及理解，確定PARK7 能否作為特異性生物標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)，將為新的潛在治療方案提供科學(xué)依據(jù)。

作者貢獻(xiàn)聲明譚俊杰：實(shí)施研究，起草文章，對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱，獲取研究經(jīng)費(fèi)，行政、技術(shù)或材料支持；江欣欣：分析∕解釋數(shù)據(jù)，對(duì)文章的知識(shí)性內(nèi)容作批評(píng)性審閱，行政、技術(shù)或材料支持