潘瑛潔，孟祥河，錢園鳳，寧建美，王月圓，劉齊銘，唐仕琴，徐曉安，葉沁

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定茶鮮葉中79種農(nóng)藥殘留

潘瑛潔1,2，孟祥河1，錢園鳳2，寧建美2，王月圓2，劉齊銘2，唐仕琴2，徐曉安2，葉沁3*

1. 浙江工業(yè)大學食品科學與工程學院，浙江 杭州 310018； 2. 松陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，浙江 松陽 323400；3. 浙江樹人學院生物與環(huán)境工程學院，浙江 杭州 310014

建立以超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）同時測定茶鮮葉中79種農(nóng)藥殘留量的分析方法。以乙腈為提取劑，茶鮮葉樣品經(jīng)高速破壁均質(zhì)后加入NaCl鹽析，離心取上清液經(jīng)無水硫酸鎂、C18、PSA和GCB分散固相萃取凈化后上機，多反應(yīng)監(jiān)測模式掃描，分段時間窗口采集數(shù)據(jù)，外標法定量。結(jié)果顯示，79種目標化合物在0.001～0.400?mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（2）為0.990?6～0.999?9，在0.01、0.03、0.05、0.10?mg·kg-1和0.20?mg·kg-1等5個添加水平下的平均回收率為70.7%～119.0%，相對標準偏差（RSD）為0.1%～19.8%，方法定量限為0.01～0.05?mg·kg-1。該方法靈敏度高、準確性好、分析速度快，適用于茶鮮葉中79種農(nóng)藥殘留的檢測。

茶鮮葉；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；農(nóng)藥殘留；回收率

茶葉作為一種傳統(tǒng)的飲品，其質(zhì)量安全直接關(guān)系到消費者的健康。農(nóng)藥殘留是茶葉質(zhì)量安全的最重要因素之一，直接影響到茶產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。在浙江、福建、安徽、云南等主要茶葉產(chǎn)區(qū)，茶業(yè)是當?shù)剞r(nóng)民增收致富的重要產(chǎn)業(yè)[1]。但高溫高濕的生長環(huán)境使得茶樹病蟲害多發(fā)，為了獲得更好的經(jīng)濟效益，茶農(nóng)一般選擇化學農(nóng)藥來防治病蟲害，可能存在著超量、超范圍、盲目用藥等問題[2]，給茶產(chǎn)業(yè)質(zhì)量安全帶來嚴重風險。茶鮮葉是茶葉生產(chǎn)的原材料，其質(zhì)量安全是監(jiān)管茶葉安全的第一道防線，尤其在茶產(chǎn)業(yè)分工逐步明細的背景下，干茶檢出農(nóng)殘后追溯難，從茶鮮葉入手，把茶葉安全生產(chǎn)危害分析的關(guān)鍵控制點前移，可以實時監(jiān)督茶園用藥情況，有效引導茶農(nóng)合理施藥，從而實現(xiàn)茶葉農(nóng)藥源頭控制，同時減少農(nóng)藥不合理使用帶來的茶園環(huán)境污染[3-4]。干茶的農(nóng)藥多殘留檢測技術(shù)或方法在國內(nèi)外已有較多文獻報道[5-6]，我國也已出臺了多個檢測標準[7-8]，而關(guān)于茶鮮葉的農(nóng)殘檢測研究較少，已有文獻報道的有快速檢測法、氣相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）等。目前這些檢測方法存在檢出限高、檢測對象范圍窄、前處理過程復雜、有毒試劑消耗量大等缺點[9-14]，難以滿足農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速、準確、綠色環(huán)保監(jiān)測要求。分散固相萃取凈化技術(shù)節(jié)省試劑、減少污染、檢測效率高；超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（UPLC-MS/MS）定性定量準確、靈敏度高、選擇性好[15]。本研究選擇有機磷類、有機氯類、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類、酰胺類等共79種農(nóng)藥，利用乙腈提取和分散固相萃取技術(shù)凈化結(jié)合UPLC-MS/MS建立了一種同時測定茶鮮葉中79種農(nóng)藥殘留的分析方法，以期為茶葉質(zhì)量安全和風險預警提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Homogenizer 2094樣品均質(zhì)磨，美國FOSS公司；T18高剪切分散破壁機，德國IKA公司；Vortex XW-80A旋渦混合器，上海青浦滬西儀器廠；Neofuge1600臺式高速離心機，上海力申科學儀器有限公司；Waters ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色譜，美國Waters公司；AB SCIEX TRIPLE QUADTM 4500三重四極桿質(zhì)譜儀，美國ABI公司。

乙腈、甲醇（質(zhì)譜純）購自德國默克公司，甲酸（質(zhì)譜純）購自美國ACS恩科化學公司，甲酸銨（質(zhì)譜純）購自上海阿拉丁生物科技股份有限公司，乙酸（優(yōu)級純）購自山東西亞化學工業(yè)有限公司，無水硫酸鎂（分析純）購自成都市科隆化學品有限公司，乙二胺--丙基硅烷化硅膠（PSA，40～63?μm）、十八烷基硅烷鍵合硅膠（HC-C18，40～63?μm）、石墨化炭黑（GCB，120～400目）購自上海安譜實驗科技股份有限公司，氯化鈉（分析純）購自浙江中星化工試劑有限公司，乙酰甲胺磷、啶蟲脒、乙草胺等本研究測定的79種農(nóng)藥標準品購自天津阿爾塔科技有限公司。18份茶鮮葉樣品于2022年9月購自麗水市松陽縣寺口茶鮮葉交易市場，空白茶鮮葉樣品購自松陽縣綠茗峰茶業(yè)有限公司有機茶園。

1.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱為Waters HSS T3（2.1?mm×100?mm，1.8?μm），柱溫40?℃，進樣量2?μL，流動相A為2?mmol·L-1甲酸銨-0.01%甲酸甲醇溶液，B為2?mmol·L-1甲酸銨-0.01%甲酸水溶液。梯度洗脫條件：0～1.5?min，97%～85%流動相A；1.5～2.5?min，85%～50% 流動相A；2.5～18?min，50%～30%流動相A；18～23?min，30%～2%流動相A；27～30?min，2%～97%流動相A。

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源類型為電噴霧離子源，掃描方式為正離子和負離子同時掃描，多反應(yīng)監(jiān)測模式；氣簾氣為38?psi，噴霧氣為50?psi，輔助加熱氣為20?psi，離子噴霧電壓為正離子5?500?V，負離子–4?500?V，溫度為350?℃，監(jiān)測離子對、碰撞氣能量和去簇電壓經(jīng)優(yōu)化后如表1所示。選用分段時間窗口采集檢測器數(shù)據(jù)。

1.3 標準貯存液配制與標準曲線繪制

79種農(nóng)藥100?mg·L-1單標儲備液的配制：準確吸取1.00?mL質(zhì)量濃度為1?000?mg·L-1的各標準物質(zhì)溶液，用甲醇稀釋配制成100?mg·L-1單標儲備液。

10?mg·L-1混合標準儲備液的配制：將上述單標儲備液分別準確吸取1.00?mL用甲醇稀釋配制成10?mg·L-1的混標儲備液。–20?℃避光貯存?zhèn)溆谩?/p>

混合標準工作溶液的配制：茶鮮葉空白樣品經(jīng)前處理后，將上述10?mg·L-1的混合標準溶液用甲醇和空白基質(zhì)溶液分別稀釋配制成0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、0.200、0.400?mg·L-1的兩組工作標準液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.4 樣品前處理

將茶鮮葉樣品于均質(zhì)磨中磨碎混合均勻，稱取10.00?g均質(zhì)樣品于離心管中，加入20.0?mL乙腈溶液，12?000?r·min-1高速均質(zhì)1?min，加入5?g NaCl后上下振搖1?min，再10?000?r·min-1離心5?min。取2.0?mL上清液于15?mL塑料離心管中，加入300?mg無水硫酸鎂、100?mg C18、100?mg PSA和50?mg GCB，渦旋混勻1?min，10?000?r·min-1高速離心5?min，所得上清液過0.22?μm有機濾膜，用于分析測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取步驟優(yōu)化

茶鮮葉樣品制備后為細小碎葉狀態(tài)，因農(nóng)藥殘留除了存在于鮮葉表面，也可能滲入組織細胞內(nèi)，經(jīng)破壁處理后，有助于細胞內(nèi)容物溶出，更有利于后續(xù)乙腈提取，提高農(nóng)藥殘留提取效率[16]。因此本研究將茶鮮葉樣品加入提取劑后利用破壁機高速勻漿，使其充分提取，再加入NaCl促進水相和有機相分離。

考慮氨基甲酸酯類農(nóng)藥在堿性條件下易分解，在提取溶劑中加入適量的酸，可一定程度增加酸性目標農(nóng)藥在溶劑中的溶解度，從而提高提取效果[17-18]。因此本研究分別采用乙腈、1%乙酸乙腈和1%甲酸乙腈溶液為提取劑，考察其對添加0.10?mg·kg-1目標化合物的茶鮮葉中79種農(nóng)藥的回收情況。結(jié)果表明，整體回收率從高到低為1%乙酸乙腈＞乙腈＞1%甲酸乙腈。與乙腈相比，添加1%乙酸乙腈使59種農(nóng)藥回收率有所提高，如多菌靈的回收率從69.5%提高到83.6%，氯蟲苯甲酰胺的回收率從83.8%提高到104.0%，其中回收率提高大于5%的農(nóng)藥有27種，大于10%的有11種。但也存在一些農(nóng)藥的回收率超出了農(nóng)殘檢測規(guī)定范圍（70.0%～130.0%），如溴氰菊酯的回收率從103.6%提高到157.9%，氰戊菊酯的回收率從98.8%提高到143.6%，氟胺氰菊酯的回收率從110.1%提高到154.1%。這可能是因為加入乙酸后萃取出的共提物增多，并且加酸后離子化效率提高，使其回收率偏高。根據(jù)3種提取劑下79種農(nóng)藥的回收率范圍統(tǒng)計（圖1）可以看出，以乙腈為提取劑時，79種農(nóng)藥的回收率范圍最窄，為74.0%～117.0%，且都在農(nóng)殘檢測規(guī)定范圍內(nèi)，因此本方法選用乙腈為提取劑。

2.2 樣品凈化方式的選擇和優(yōu)化

茶鮮葉中含有多種生物堿、有機酸、多酚和色素，這些基質(zhì)共提物可能會引起大的基質(zhì)效應(yīng)、污染儀器及縮短儀器設(shè)備使用壽命[19]。為降低基質(zhì)對分析結(jié)果和儀器的影響，采用分散固相萃取去除雜質(zhì)。PSA具有很強的離子交換能力，可以通過氫鍵與干擾化合物相互作用有效去除樣品中的兒茶素、多酚、脂肪酸、部分有機酸和糖類，但其純化色素的能力有限；C18去除脂肪化合物和甾醇以及非極性溶劑能力較強；GCB能夠強烈吸附色素類物質(zhì)，對基質(zhì)的凈化效果較好[20-21]。因此選取PSA、C18、GCB作為吸附劑并對他們組合優(yōu)化，考察不同組合對添加量為0.10?mg·kg-1目標農(nóng)藥回收率的影響。本研究共設(shè)置PSA+C18、PSA+GCB、C18+GCB、PSA+C18+GCB 4種組合，每種用量均為100?mg，取加標提取液2.0?mL分別經(jīng)上述組合渦旋凈化。結(jié)果表明，按回收率在70.0%～130.0%的農(nóng)藥所占比例進行統(tǒng)計，PSA+GCB組最高，為87.3%；其次為PSA+C18+GCB組，占比為82.3%；C18+GCB組最低，僅為78.5%。為最大程度凈化樣品提取液，本研究選擇PSA、C18和GCB組合，同時加入300?mg無水硫酸鎂除去溶劑中水分，并對GCB用量進行優(yōu)化。固定PSA和C18用量各100?mg，分別添加50、100、150?mg GCB，結(jié)果表明，當GCB用量為50?mg時，所有農(nóng)藥的回收率均在70.0%～130.0%，隨著GCB用量的增加，有16種農(nóng)藥的回收率降低，各組合回收率占比結(jié)果如圖2所示。綜上，本研究選擇在2.0?mL提取液中加入300?mg無水硫酸鎂、100?mg PSA、100?mg C18和50?mg GCB吸附雜質(zhì)。圖3為茶鮮葉空白基質(zhì)凈化前后色譜圖，由圖3可見，凈化后前10?min的基質(zhì)峰明顯降低或消除，凈化效果較好。

表1 79種農(nóng)藥的UPLC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測參數(shù)

續(xù)表1

圖1 不同提取劑對79種農(nóng)藥回收率的影響

2.3 方法線性的測定

以79種農(nóng)藥的定量峰面積為縱坐標，以混合標準工作液系列濃度為橫坐標繪制標準曲線，獲得相關(guān)系數(shù)（表2）。結(jié)果表明，79種農(nóng)藥在0.001～0.400?mg·L-1的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（2）為0.990?6～0.999?9，同時質(zhì)譜表現(xiàn)出較好的靈敏度。

2.4 定量限、精密度及回收率測定

準確稱取10.00?g空白茶鮮葉樣品，添加5個質(zhì)量分數(shù)水平（0.01、0.03、0.05、0.10、0.20?mg·kg-1），每個質(zhì)量分數(shù)水平設(shè)3個平行樣，進行加標回收率試驗，并且按回收率大于70.0%的添加濃度確定為定量限[22]，平均回收率、相對標準偏差及定量限結(jié)果如表2所示。79種目標化合物在添加定量限及以上的平均回收率為70.7%～119.0%，相對標準偏差范圍為0.1%～19.8%。說明方法具有較好的定量準確性和重復性。

注：PC表示PSA+C18組合，PG表示PSA+GCB組合，CG表示C18+GCB組合，PCG表示PSA+C18+GCB組合，G50、G100、G150分別表示添加50、100、150?mg GCB的MgSO4+PSA+C18+GCB組合

圖3 茶鮮葉空白基質(zhì)凈化前后色譜圖

2.5 基質(zhì)效應(yīng)評價

茶鮮葉中基質(zhì)復雜，可能會對分析物的濃度與測定準確度造成影響，從而引起定量和定性的誤差[23]。采用提取后添加法來評價基質(zhì)效應(yīng)（Matrix effect，ME），分別將空白茶葉基質(zhì)提取液與甲醇純?nèi)軇┡渲瞥上嗤盗袧舛鹊?9種混合標準溶液工作曲線，=/，其中和分別表示純?nèi)軇藴是€的斜率與基質(zhì)標準曲線的斜率。若<1，則表示基質(zhì)會抑制分析物的響應(yīng)；若>1，則表示基質(zhì)會增強分析物的響應(yīng)；若=1，則表示不存在基質(zhì)效應(yīng)[24-25]。通過MultiQuant 3.0.2軟件繪制的兩組曲線的斜率計算得到79種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果如表2所示，敵敵畏、苯醚甲環(huán)唑、呋蟲胺、氟啶蟲酰胺、吡蟲啉、滅多威、久效磷和噻蟲嗪有較強的基質(zhì)抑制效應(yīng)，而聯(lián)苯菊酯、異菌脲和亞胺硫磷有較強的基質(zhì)增強效應(yīng)，其他農(nóng)藥則不存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)。因此為減輕或者消除基質(zhì)效應(yīng)，本方法用茶鮮葉空白基質(zhì)配制標準曲線來進行定量分析[26]。

2.6 實際樣品測定

通過已建立的方法對18份茶鮮葉樣品進行檢測，農(nóng)藥檢出結(jié)果如表3所示。除多菌靈、毒死蜱、噻蟲嗪、苯醚甲環(huán)唑、三唑磷、咪鮮胺、噠螨靈、敵百蟲、甲霜靈、吡唑醚菌酯、呋蟲胺、聯(lián)苯菊酯12種農(nóng)藥被檢出外，其余67種農(nóng)藥結(jié)果均低于定量限或未檢出。以茶鮮葉含水量75%計算，將茶鮮葉農(nóng)藥殘留量換算為干基濃度即為茶葉農(nóng)藥殘留理論值（實際農(nóng)藥殘留量因茶葉加工方式、農(nóng)藥降解等因素，可能低于此理論值），表3中所列檢出的茶葉農(nóng)藥殘留理論值均小于GB 2763—2021[27]規(guī)定的限量要求。

表2 79種農(nóng)藥的添加回收率、相對標準偏差、相關(guān)系數(shù)、定量限和基質(zhì)效應(yīng)（n=3）

注：AR表示平均回收率，RSD表示相對標準偏差

Note: AR represents the average recovery, RSD represents the relative standard deviation

續(xù)表2

序號No.農(nóng)藥名稱Pesticides添加量Additive amount相關(guān)系數(shù)R2定量限LOQ/mg·kg-1基質(zhì)效應(yīng)Matrix effect 0.01?mg·kg-10.03?mg·kg-10.05?mg·kg-10.10?mg·kg-10.20?mg·kg-1 AR/%RSD/%AR/%RSD/%AR/%RSD/%AR/%RSD/%AR/%RSD/% 29甲氰菊酯76.15.570.84.193.93.398.02.6106.51.80.996?30.011.01 30倍硫磷99.12.6100.31.999.61.7100.30.1104.65.90.999?50.011.01 31氰戊菊酯87.119.390.911.391.13.898.87.0119.05.50.999?60.010.98 32氟啶蟲酰胺62.819.366.111.188.33.882.85.582.63.40.996?90.050.13 33氟氰戊菊酯81.119.885.213.9107.39.5106.58.4105.30.80.997?80.011.04 34噻螨酮94.810.093.412.593.98.193.62.7103.53.60.998?70.011.04 35吡蟲啉98.94.783.09.983.94.292.53.895.63.80.995?40.010.51 36茚蟲威78.214.985.68.9104.86.199.76.8111.65.90.995?30.011.08 37異菌脲79.77.284.27.7100.24.3108.34.5112.60.10.997?20.011.55 38氯唑磷96.35.6101.75.0100.73.897.40.1105.42.30.998?40.011.00 39水胺硫磷93.31.695.92.797.61.7102.83.3106.50.30.998?50.010.99 40甲基異柳磷95.34.692.61.994.82.4105.93.6106.43.40.999?20.011.04 41馬拉硫磷89.84.894.62.996.74.9102.44.8105.32.10.996?60.011.03 42甲霜靈80.51.285.72.393.81.899.34.2104.64.00.996?40.011.01 43殺撲磷85.02.188.83.194.22.4102.44.6103.43.10.997?00.011.00 44滅多威78.46.779.11.883.02.483.41.974.90.90.995?10.010.63 45久效磷84.18.278.03.482.21.896.11.895.43.90.997?10.010.39 46腈菌唑93.63.492.94.095.45.595.94.3102.60.20.997?30.011.00 47氧樂果72.83.576.30.677.72.877.24.674.13.20.995?30.010.99 48惡霜靈94.13.395.54.291.43.5100.02.8102.32.90.997?70.011.00 49多效唑89.08.489.35.394.25.993.71.2103.54.90.998?30.011.02 50對硫磷98.22.999.61.296.23.0103.71.0105.21.70.999?50.011.03 51二甲戊靈92.86.995.14.297.32.397.92.3102.13.20.999?00.011.05 52氯菊酯79.58.779.89.690.15.699.01.9103.81.80.993?70.010.99 53甲拌磷97.80.9101.72.798.71.2102.00.9103.86.60.999?40.011.01 54甲拌磷砜100.06.0101.22.1101.42.2101.63.3106.55.10.998?90.011.01 55甲拌磷亞砜93.53.996.23.298.81.499.82.0102.83.60.998?70.011.01 56伏殺硫磷92.25.094.25.295.21.4102.51.3106.21.80.998?90.011.02 57硫環(huán)磷89.32.394.11.594.51.894.50.797.12.30.999?30.011.01 58亞胺硫磷91.02.798.07.0100.53.6100.83.4101.43.70.996?00.016.71 59磷胺96.82.398.02.2100.21.698.40.2103.04.10.999?30.011.01 60咪鮮胺88.15.586.03.285.43.385.12.092.45.50.999?30.011.02

續(xù)表2

序號No.農(nóng)藥名稱Pesticides添加量Additive amount相關(guān)系數(shù)R2定量限LOQ/mg·kg-1基質(zhì)效應(yīng)Matrix effect 0.01?mg·kg-10.03?mg·kg-10.05?mg·kg-10.10?mg·kg-10.20?mg·kg-1 AR/%RSD/%AR/%RSD/%AR/%RSD/%AR/%RSD/%AR/%RSD/% 61腐霉利91.79.596.52.098.23.399.50.4102.61.10.996?60.011.08 62丙溴磷93.97.487.08.788.25.590.22.495.63.80.997?90.010.82 63炔螨特78.012.481.412.596.25.3115.05.2104.84.70.998?60.011.07 64丙環(huán)唑92.83.592.63.392.51.995.61.198.14.00.998?80.011.03 65吡唑醚菌酯108.23.3102.14.597.52.5100.51.2102.34.90.999?60.011.02 66噠螨靈77.111.288.814.194.46.0104.86.9104.81.90.991?90.011.03 67嘧霉胺85.66.295.36.493.63.092.20.896.04.70.999?20.011.02 68西瑪津93.51.896.84.196.01.9102.04.3103.94.80.999?60.011.01 69氟胺氰菊酯80.811.585.211.590.39.993.28.8107.41.30.993?10.011.03 70戊唑醇87.01.894.13.292.92.199.81.199.53.20.999?00.011.03 71噻蟲嗪77.410.181.89.989.14.177.45.984.45.80.990?60.010.12 72三唑磷78.86.081.04.597.04.594.91.4103.83.40.994?80.011.02 73敵百蟲85.75.491.04.0102.33.094.01.6111.23.50.998?30.010.89 74氟蟲腈102.23.9108.84.292.94.6115.30.799.16.60.997?30.011.09 75氟甲腈102.04.0104.44.999.91.7109.47.1111.27.30.998?10.010.98 76氟蟲腈硫化物99.58.9104.52.2101.77.094.013.8107.19.70.999?10.011.03 77氟蟲腈砜96.87.1102.52.999.95.2110.95.1110.03.90.998?20.011.02 78氟苯蟲酰胺88.97.289.48.793.69.090.96.388.89.70.995?70.011.12 79環(huán)溴蟲酰胺97.211.699.12.899.47.282.39.3106.02.90.999?90.011.03

表3 茶鮮葉樣品檢出農(nóng)藥結(jié)果匯總表（n=18）

注：“—”表示該數(shù)據(jù)缺失

Note: “—” indicates the missing data

3 討論

本研究通過對樣品提取劑、凈化劑選擇及優(yōu)化，比較不同條件對目標化合物回收率的影響，建立了以乙腈為提取劑進行破壁均質(zhì)提取，分散固相萃取法凈化與UPLC-MS/MS結(jié)合同時測定茶鮮葉中79種農(nóng)藥殘留的分析方法。該方法重復性好、靈敏度高，目標農(nóng)藥在上機質(zhì)量濃度0.001～0.400?mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，2為0.990?6～0.999?9。在定量限以上濃度（含定量限）的添加水平下，農(nóng)藥的平均回收率在70.7%～119.0%，RSD為0.1%～19.8%，方法的定量限為0.01～0.05?mg·kg-1。同時還考察了79種目標化合物在茶鮮葉中的基質(zhì)效應(yīng)，敵敵畏、苯醚甲環(huán)唑等8種農(nóng)藥有較強的基質(zhì)抑制效應(yīng)，聯(lián)苯菊酯、異菌脲和亞胺硫磷有較強的基質(zhì)增強效應(yīng)，其他農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)則較弱或不明顯。為減輕或者消除基質(zhì)效應(yīng)，本研究方法用茶鮮葉空白基質(zhì)匹配標準曲線來進行定量分析。

本研究方法能在較短時間內(nèi)完成大量樣品的前處理，與祝愿等[3]的方法相比，無需使用甲苯等有毒試劑，不污染環(huán)境。此外，本研究方法涉及的農(nóng)藥較為廣泛，GB 2763—2021規(guī)定的茶葉類目有限量要求的農(nóng)藥共有106個，本方法研究的79種農(nóng)藥中含38個，占比35.8%。此外本方法還增加了環(huán)溴蟲酰胺、氯蟲苯甲酰胺等防蟲效果卓越且低毒的雙酰胺類農(nóng)藥[28-29]，具有較廣的適用性和先進性。本研究開發(fā)的方法對茶葉質(zhì)量安全風險監(jiān)管關(guān)口前移和安全保障具有積極而重要的意義。

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Simultaneous Determination of 79 Pesticides Residues in Fresh Tea Leaves by Ultra-high Performance Liquid Chromatography-mass Spectrometry

PAN Yingjie1,2, MENG Xianghe1, QIAN Yuanfeng2, NING Jianmei2, WANG Yueyuan2, LIU Qiming2, TANG Shiqin2, XU Xiaoan2, YE Qin3*

1. College of Food Science and Technology, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310018, China; 2. Agriculture and Rural Affairs Bureau, Songyang 323400, China; 3. Department of Biological and Environmental Engineering, Zhejiang Shuren University, Hangzhou 310014, China

A method for simultaneous determination of 79 pesticides residues in fresh tea leaves by ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry (UPLC-MS/MS) was establish in this study. The fresh tea leaves were groundby high-speed wall breaking and then extracted by acetonitrile solutionwith NaCl. The liquid supernatant was centrifuged and purified by solid phase extraction of anhydrous magnesium sulfate, C18, PSA and GCB. The scheduled multiple reaction monitoring mode (sMRM) was used for scanning and determination, and quantitative by external standard method. The results show that the 79 target compounds exhibited good linearity within the concentration range of 0.001～0.400?mg·L-1with a correlation coefficient (2) of 0.990?6 to 0.999?9. The average recoveries at 5 spiked levels (0.01, 0.03, 0.05, 0.10, 0.20?mg·kg-1) ranged from 70.7% to 119.0%, with the relative standard deviations (RSDs) ranging from 0.1% to 19.8%, and the limits of quantitation (LOQ) for the 79 pesticides ranging from 0.01?mg·kg-1to 0.05?mg·kg-1. The proposed method is high sensitivity, good accuracy and quick, which is suitable for determination of 79 pesticides residues in fresh tea leaves.

fresh tea leaves, UPLC-MS/MS, pesticide residues, recovery

S571.1

A

1000-369X(2023)02-250-13

2022-11-14

2023-02-10

國家自然基金項目（32001739、32272242、31972109）、浙江省重點研發(fā)項目（2020C02018、2021C02013）

潘瑛潔，女，助理農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測方面的研究，475677912@qq.com。*通信作者：yqin719@163.com