曹依靜 逯韻 趙莉霞 張紅飛 劉利民 趙紅亮 孫昂 聶琳 盧航

摘要：為探究腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗生長(zhǎng)是否有緩解作用及其作用機(jī)理，以山定子作砧木、金冠作接穗的嫁接苗為試材，采用盆栽方式模擬鹽漬化土壤環(huán)境，研究腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗根系構(gòu)型、抗氧化保護(hù)酶活性、光合色素、光合參數(shù)及礦質(zhì)元素含量的影響。結(jié)果表明：?jiǎn)渭凔}脅迫T1處理能夠顯著降低蘋果嫁接苗根系總長(zhǎng)度、根系平均直徑、根尖數(shù)、根系表面積、根系體積和根系活力，而腐殖酸能夠緩解NaCl對(duì)蘋果嫁接苗根系形態(tài)建成和根系活力的抑制作用，且以腐殖酸濃度400 mg/L時(shí)效果最佳。單純鹽脅迫T1處理通過(guò)顯著降低蘋果嫁接苗根系SOD、POD、CAT和APX活性，增加MDA含量，打破機(jī)體活性氧產(chǎn)生與清除機(jī)制的動(dòng)態(tài)平衡，而腐殖酸能夠提升根系抗氧化酶活性、降低MDA含量以減輕活性氧積累對(duì)抗氧化酶保護(hù)體系的破壞作用。腐殖酸能夠緩解NaCl對(duì)葉綠素a、葉綠素b和葉綠素（a+b）的抑制作用，但腐殖酸對(duì)鹽脅迫下葉綠素含量的緩解作用隨其濃度的增加呈現(xiàn)先升高后降低的單峰變化規(guī)律，葉綠素a含量/葉綠素b含量在總體上與葉綠素含量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系。單純鹽脅迫T1處理能夠顯著降低蘋果嫁接苗凈光合速率和水分利用效率，增加氣孔限制值，而腐殖酸能夠較好地緩解鹽脅迫對(duì)蘋果嫁接苗光合性能和水分利用效率的抑制作用并降低氣孔限制值，且以腐殖酸濃度400 mg/L時(shí)效果最佳。單純鹽脅迫T1處理能夠顯著增加蘋果嫁接苗地下部和地上部Na+含量，顯著降低地下部、地上部K+、Ca2+含量和K+含量/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量，而腐殖酸能夠通過(guò)降低植株機(jī)體Na+含量，增加K+含量、Ca2+含量和K+含量/Na+含量 、Ca2+含量/Na+含量來(lái)緩解Na+對(duì)根系的離子毒害作用，并促進(jìn)Na+與K+、Ca2+間的離子穩(wěn)態(tài)?？梢?jiàn)，適宜濃度的腐殖酸（400 mg/L）能夠通過(guò)促進(jìn)根系形態(tài)建成，增加根系活力和葉綠素含量，提高抗氧化保護(hù)酶活性和光合能力、水分利用效率，加大礦質(zhì)元素吸收等機(jī)制增強(qiáng)耐鹽性能，實(shí)現(xiàn)山定子砧蘋果樹苗在鹽堿地的種植。

關(guān)鍵詞：腐殖酸；鹽脅迫；嫁接苗；根系構(gòu)型；葉綠素；光合參數(shù)；保護(hù)酶；礦質(zhì)元素

中圖分類號(hào)：S661.101 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2023）08-0124-07

基金項(xiàng)目：國(guó)家現(xiàn)代蘋果產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（編號(hào)：CARS-27）。

作者簡(jiǎn)介：曹依靜（1987—），女，河南商丘人，碩士，助理研究員，主要從事果樹逆境生理栽培研究。E-mail：874009322@qq.com。

通信作者：趙莉霞，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事植物逆境生理生態(tài)栽培研究。E-mail：874009322@qq.com。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，鹽漬化土壤約占全球灌溉土壤的 1/5［1］、陸地面積的1/10，其中我國(guó)鹽漬化土地面積約為3 600萬(wàn)hm2，可見(jiàn)鹽漬化已成為全球性的資源與環(huán)境問(wèn)題。土壤鹽漬化產(chǎn)生的滲透脅迫、離子毒害、次級(jí)反應(yīng)及礦質(zhì)養(yǎng)分失衡等因素嚴(yán)重影響植株的生理代謝過(guò)程，進(jìn)而降低作物的產(chǎn)量和品質(zhì)［2］，這給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、生態(tài)環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展帶來(lái)嚴(yán)重的不利影響。但通過(guò)施用生物菌肥、改良土壤結(jié)構(gòu)、選擇抗鹽砧木、選育耐鹽品種等措施，也可以在一定水平上實(shí)現(xiàn)鹽堿地的農(nóng)作物栽培。這些措施雖然可行，但也有一定的局限性，即對(duì)栽培管理水平要求高、耐鹽品種選育時(shí)間長(zhǎng)等。

山定子是優(yōu)良的蘋果砧木，其優(yōu)點(diǎn)是抗寒性極強(qiáng)，根系發(fā)達(dá)耐貧瘠，與蘋果接穗親和性好，結(jié)果早、產(chǎn)量高，缺點(diǎn)是不耐鹽堿。山定子砧蘋果樹在鹽堿地種植后常常表現(xiàn)出葉片薄而小，葉色失綠甚至發(fā)黃，移栽成活率低等特點(diǎn)，這使得山定子砧蘋果樹難以在鹽堿地發(fā)揮早熟優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的優(yōu)勢(shì)，也在一定程度上制約了鹽堿地果樹的種植面積。腐殖酸是一類主要由C、H、O、N等元素組成的高分子有機(jī)物質(zhì)［3］，含有芳香族、酚基、羧基等多種官能團(tuán)，具有較強(qiáng)的吸附、絡(luò)合、交換功能［4］，對(duì)增強(qiáng)植物抗逆性、促進(jìn)植株生長(zhǎng)發(fā)育、改善作物品質(zhì)、改良土壤結(jié)構(gòu)有顯著作用［5-6］。吳佳利研究表明，腐殖酸可通過(guò)提高黏質(zhì)鹽土含水量、降低黏質(zhì)鹽土含鹽量、改善黏質(zhì)鹽土離子組成、增加黏質(zhì)鹽土有機(jī)碳含量等方式提高鹽脅迫下的小麥產(chǎn)量［7］。馬太光等研究指出，腐殖酸能夠有效緩解NaCl脅迫對(duì)西葫蘆胚軸和根系生長(zhǎng)的抑制作用，并提高西葫蘆種子的抗鹽性［8］。郭偉等研究得出，腐殖酸浸種能夠有效緩解鹽脅迫對(duì)小麥生長(zhǎng)的影響［9］。但當(dāng)前有關(guān)腐殖酸對(duì)鹽脅迫下果樹生長(zhǎng)狀況、生理特性等方面的研究報(bào)道較少，而有關(guān)腐殖酸對(duì)鹽脅迫下山定子砧蘋果樹形態(tài)指標(biāo)及生理指標(biāo)方面的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。為此，本試驗(yàn)以山定子砧蘋果樹苗為試材，借助盆栽的方式模擬鹽漬化土壤環(huán)境，研究腐殖酸對(duì)鹽脅迫環(huán)境下蘋果嫁接苗根系構(gòu)型、抗氧化保護(hù)酶活性、光合色素、光合參數(shù)及礦質(zhì)元素含量的影響，探究腐殖酸提高山定子砧蘋果樹的耐鹽機(jī)制，以期為提高鹽堿地土壤蘋果樹的生產(chǎn)提供理論依據(jù)，同時(shí)為其他作物在鹽堿地的種植提供資料參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料以山定子［Malus baccata （L.） Borkh］為嫁接砧木，金冠為接穗。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及方法

2020年1月將山定子種子在4 ℃冰箱內(nèi)層積處理至2/3種子露白時(shí)，播種于苗床內(nèi)，待幼苗5～6張葉時(shí)移栽至大田，8月份進(jìn)行芽接。

2021年3月采用盆栽土培的方式進(jìn)行試驗(yàn)，盆直徑30 cm、高40 cm，每盆裝土25 kg。大田土壤全氮、速效磷、速效鉀含量分別為0.41 g/kg、3.86 mg/kg、79.35 mg/kg，pH值6.82，EC值557.61 μS/cm。試驗(yàn)設(shè)置1個(gè)對(duì)照和5個(gè)處理，其中以大田土為對(duì)照（CK），以50 mmol/L NaCl的大田土為處理1（T1）、50 mmol/L NaCl+100 mg/L腐殖酸的大田土為處理2（T2）、50 mmol/L NaCl+200 mg/L腐殖酸的大田土為處理3（T3）、50 mmol/L NaCl+400 mg/L腐殖酸的大田土為處理4（T4）、50 mmol/L NaCl+800 mg/L 腐殖酸的大田土為處理5（T5）。NaCl濃度50 mmol/L的大田土配制方法：按50 mmol/L的比例往大田土中添加NaCl，充分混勻后裝入花盆。T2、T3、T4、T5處理為在移栽后分別按設(shè)計(jì)的濃度澆灌2 L腐殖酸溶液。腐殖酸購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司。對(duì)照和處理均進(jìn)行3次重復(fù)，每3盆作1次重復(fù)，共計(jì)54盆。4月10日進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法

根系總長(zhǎng)度、根系平均直徑、根尖數(shù)、根系表面積和根系體積均采用萬(wàn)深 LA-S 系列植物圖像分析儀系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。根系活力采用氯化三苯基四氮唑還原法（TTC 法）［10］進(jìn)行測(cè)定。超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量分別采用氮藍(lán)四唑光化還原法、愈創(chuàng)木酚比色法、高錳酸鉀滴定法、硫代巴比妥酸法［11］進(jìn)行測(cè)定?？箟难徇^(guò)氧化物酶（APX） 活性參照Nakano等的方法［12］進(jìn)行測(cè)定。葉綠素含量參照高俊鳳的方法［13］進(jìn)行測(cè)定。

在晴天09：30—10：30，使用便攜式光合作用儀 LI-6800對(duì)蘋果葉片的凈光合速率（Pn）、氣孔導(dǎo)度（Gs）、蒸騰速率（Tr）和胞間二氧化碳濃度（Ci）進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)外界CO2濃度為（390±10） μmol/mol，葉室溫度為（27±1） ℃。葉片水分利用效率（WUE）的計(jì)算公式為WUE=Pn/Tr［14］。氣孔限制值（Ls）=1- Ci/Ca，式中：Ca為空氣中CO2濃度。Na+、K+、Ca2+等離子含量采用原子吸收分光光度計(jì)法［15］進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

使用Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和作圖，用SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用最小顯著極差法（LSR法）對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗根系構(gòu)型的影響

由表1可知，與對(duì)照相比，鹽脅迫T1處理能夠顯著降低蘋果嫁接苗根系總長(zhǎng)度、根系平均直徑、根尖數(shù)、根系表面積和根系體積，較CK分別降低44.17%、54.43%、54.55%、37.62%、31.58%，表明鹽脅迫T1處理能夠顯著抑制蘋果嫁接苗根系的形態(tài)建成。當(dāng)腐殖酸濃度為0～400 mg/L（T1～T4處理）時(shí)，蘋果嫁接苗根系總長(zhǎng)度、根系平均直徑、根尖數(shù)、根系表面積和根系體積均隨著腐殖酸濃度的增加而增加，至400 mg/L時(shí)值最大，與T1處理差異顯著（P<0.05）；當(dāng)腐殖酸濃度達(dá)到800 mg/L時(shí)，上述指標(biāo)雖高于T1處理，但均顯著低于T4處理，這說(shuō)明腐殖酸能夠緩解NaCl對(duì)蘋果嫁接苗根系生長(zhǎng)的抑制作用，但這種緩解作用受腐殖酸濃度的影響，表現(xiàn)為低濃度促進(jìn)高濃度抑制。鹽脅迫T1處理顯著降低了蘋果嫁接苗的根系活力，腐殖酸能夠緩解鹽脅迫對(duì)根系活力的抑制作用，且以腐殖酸濃度400 mg/L時(shí)效果較好，較T1處理顯著提高112.20% （P<0.05）；T4處理雖低于對(duì)照，但與對(duì)照差異不顯著，表明腐殖酸能夠有效提高鹽脅迫下的蘋果嫁接苗根系活力。

2.2 腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗葉綠素含量的影響

由圖1可以看出，5個(gè)鹽脅迫處理下的葉綠素含量與對(duì)照相比均顯著降低，且以T1處理下葉綠素a、葉綠素b和葉綠素（a+b）含量降幅最大，表明鹽脅迫能夠降低蘋果葉片葉綠素含量。添加有腐殖酸的T2、T3、T4、T5處理的葉綠素含量均高于T1處理，表明腐殖酸能夠在一定程度上緩解NaCl對(duì)蘋果嫁接苗葉綠素的降解作用。另外，隨腐殖酸含量的增加葉綠素含量呈現(xiàn)先升高后降低的單峰變化規(guī)律。葉綠素a含量/葉綠素b含量以T1處理值最大，且隨著腐殖酸含量的增加呈現(xiàn)先降低后升高的變化規(guī)律，可見(jiàn)葉綠素a含量/葉綠素b含量在總體上與葉綠素含量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系。

2.3 腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗光合參數(shù)的影響

由表2可知，鹽脅迫T1處理能夠顯著降低蘋果嫁接苗的光合能力和水分利用效率，增加氣孔限制值，其凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度、蒸騰速率和水分利用效率較CK分別顯著降低64.23%、80.10%、53.25%、26.30%、51.55%，氣孔限制值較CK顯著增加480.00%（P<0.05），說(shuō)明鹽脅迫能夠顯著降低蘋果嫁接苗的氣孔導(dǎo)度，致使光合底物CO2分壓降低，胞間CO2濃度隨之減小，進(jìn)而引起凈光合速率下降。腐殖酸能夠較好地緩解鹽脅迫對(duì)蘋果嫁接苗光合性能的抑制作用并降低氣孔限制值，添加有腐殖酸的T2、T3、T4、T5處理其凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度、蒸騰速率和水分利用效率均不同程度地高于T1處理，氣孔限制值均低于T1處理。隨著腐殖酸濃度的增加，凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度、蒸騰速率和水分利用效率均表現(xiàn)為先升高再降低的變化規(guī)律，且以T4處理值最大，其中T4處理凈光合速率和水分利用效率較鹽脅迫T1處理分別增加144.30%和84.18%；氣孔限制值表現(xiàn)出先降低再升高的變化規(guī)律，且以T4處理下值最小，較T1處理降低68.97%，這表明適宜濃度的腐殖酸更能夠有效提高鹽脅迫下蘋果嫁接苗的光合性能、水分利用效率，并降低氣孔限制值。

2.4 腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗根系抗氧化酶活性的影響

由表3可以得出，鹽脅迫T1處理能夠顯著降低蘋果嫁接苗的根系抗氧化酶活性，其SOD、POD、CAT和APX活性較CK分別降低35.67%、53.78%、65.99%、52.30%。添加不同濃度腐殖酸的T2、T3、T4、T5處理下的抗氧化酶活性均高于T1處理，且隨腐殖酸濃度的增加呈現(xiàn)先升高后降低的單峰變化規(guī)律，尤以T4處理下的SOD、POD、CAT和APX活性較高，較T1處理分別顯著增加47.20%、100.14%、179.69%、119.28%（P<0.05），表明腐殖酸對(duì)鹽脅迫有一定的緩解作用，但不是腐殖酸濃度越高越好。鹽脅迫T1處理下，MDA含量顯著高于對(duì)照CK，較對(duì)照增加130.16%，而添加腐殖酸的4個(gè)處理MDA含量均顯著低于T1處理，其中T4處理較T1處理降低46.21%，說(shuō)明鹽脅迫造成的蘋果嫁接苗MDA含量的增加可在一定水平上被腐殖酸緩解。

2.5 腐殖酸對(duì)鹽脅迫下蘋果嫁接苗礦質(zhì)元素含量的影響

由表4可以得出，鹽脅迫T1處理能夠顯著增加蘋果嫁接苗地下部和地上部Na+含量，顯著降低地下部、地上部K+、Ca2+含量和K+含量/Na+含量 、Ca2+含量/Na+含量，而腐殖酸能夠在一定程度上抑制蘋果嫁接苗地下部和地上部Na+含量的增加，并在一定程度上增加鹽脅迫下蘋果嫁接苗地下部、地上部K+、Ca2+含量和K+/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量。單純鹽脅迫T1處理的地下部Na+含量較CK顯著增加421.88%（P<0.05），而K+、Ca2+含量和K+含量/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量較對(duì)照分別顯著降低26.31%、25.79%、85.92%、85.86%（P<0.05），這表明地下部根系遭受Na+毒害且Na+與K+、Ca2+間的離子穩(wěn)態(tài)被破壞。添加腐殖酸的T2至T5處理地下部Na+含量均低于T1處理，其中T4處理較T1處理顯著降低64.67%（P<0.05）；T4處理K+、Ca2+含量和K+含量/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量均顯著高于T1處理，分別顯著增加21.29%、26.95%、243.70%和261.90%（P<0.05），表明腐殖酸能夠減輕Na+對(duì)根系的離子脅迫，并有利于保持Na+與K+、Ca2+間的離子穩(wěn)態(tài)。鹽脅迫對(duì)地上部礦質(zhì)元素含量的影響與地下部類似。另外，地上部的Na+、K+、Ca2+含量均對(duì)應(yīng)高于地下部，表明根系吸收的元素離子更多地被運(yùn)送到蘋果植株的地上部。

3 討論與結(jié)論

根系是植物從外界獲取養(yǎng)分與水分的主要器官［16］，也是植物最先感知土壤逆境脅迫和最先受到傷害的器官。鹽脅迫下植株地下部表現(xiàn)為生長(zhǎng)量降低、側(cè)根數(shù)量減少、根干鮮質(zhì)量下降，根系生長(zhǎng)受到抑制［17］。腐殖酸能夠通過(guò)影響植株根系側(cè)根數(shù)量、根系細(xì)胞類型與數(shù)量、根系直徑對(duì)根系生長(zhǎng)和根系構(gòu)型進(jìn)行調(diào)控。趙振東等研究發(fā)現(xiàn)，適宜濃度的腐殖酸能夠有效促進(jìn)水稻根尖數(shù)、根長(zhǎng)與地下部干質(zhì)量的增加［18］。馬太光等研究得出，高活性的腐殖酸能夠有效緩解NaCl對(duì)西葫蘆根系和下胚軸生長(zhǎng)的抑制作用［19］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，腐殖酸濃度不高于400 mg/L時(shí)，腐殖酸對(duì)NaCl脅迫下的蘋果嫁接苗根系的緩解作用隨腐殖酸濃度的增加而增大，當(dāng)腐殖酸濃度達(dá)到800 mg/L時(shí)緩解作用降低。這可能是因?yàn)楦乘崮軌虼龠M(jìn)轉(zhuǎn)錄因子（GRAS1）的表達(dá)，而GRAS1是赤霉素和生長(zhǎng)素的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，赤霉素和生長(zhǎng)素為植株根系生長(zhǎng)雙向調(diào)控因子［20-21］，這使得腐殖酸對(duì)鹽脅迫下嫁接苗蘋果根系的緩解作用表現(xiàn)為低濃度促進(jìn)高濃度抑制。鹽脅迫能夠顯著抑制蘋果嫁接苗的根系活力，但腐殖酸能夠在一定水平上緩解鹽脅迫的抑制作用，增強(qiáng)蘋果嫁接苗根系耐鹽脅迫能力。

葉綠素是綠色植物進(jìn)行光合作用的主要場(chǎng)所和物質(zhì)基礎(chǔ)，在植物遭受逆境脅迫時(shí)其含量高低常常受到影響［22］。本試驗(yàn)條件下，單純的NaCl脅迫顯著降低了蘋果葉片的葉綠素含量，這應(yīng)該是因?yàn)辂}脅迫使葉綠素與葉綠體蛋白解離，葉綠素酶活性升高促進(jìn)葉綠素分解加速，葉綠素含量下降［23］。而在鹽脅迫條件下施用腐殖酸的蘋果葉片葉綠素含量均顯著高于單純鹽脅迫處理，但仍低于對(duì)照，這說(shuō)明在腐殖酸的作用下葉綠素含量下降幅度明顯減小，這可能與腐殖酸有利于植株對(duì)Fe2+、Mg2+的吸收利用有關(guān)，因?yàn)镕e2+是葉綠素合成過(guò)程中部分酶的活化劑，F(xiàn)e2+不足導(dǎo)致葉綠素合成受阻，Mg2+是葉綠素的組成成分，Mg2+不足直接制約葉綠素的生成。本試驗(yàn)結(jié)果還表明，5個(gè)鹽脅迫處理下的蘋果葉片葉綠素a含量/葉綠素b含量在總體上與葉綠素含量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，即表現(xiàn)為葉綠素含量高者葉綠素a含量/葉綠素b含量低，葉綠素含量低者葉綠素a含量/葉綠素b含量高，試驗(yàn)結(jié)果與周黃磊等在水稻上的研究結(jié)論［24］一致，但劉行等在金露梅上的研究結(jié)果為鹽脅迫下葉綠素含量與葉綠素a含量/葉綠素b含量表現(xiàn)出單一的變化趨勢(shì)［25］，可見(jiàn)不同植物對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)表現(xiàn)為多態(tài)性，這可能與植物自身遺傳特效、耐鹽水平、試驗(yàn)所設(shè)置的鹽濃度等因素存在差異有關(guān)。

光合作用是綠色高等植物生長(zhǎng)發(fā)育及生物質(zhì)能的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此提高光合作用的效率是作物獲得高產(chǎn)的前提，但植物的光合能力還受除自身遺傳特性制約之外的溫度、光照、水分、鹽濃度等外界環(huán)境因素的影響。研究表明，鹽脅迫能夠降低植物的光合能力，而光合能力下降的原因主要由氣孔因素和非氣孔因素限制引起［26］，也與葉綠素含量降低有關(guān)［27］，或者是幾種因素的共同作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽脅迫T1處理能夠使蘋果嫁接苗凈光合速率、氣孔導(dǎo)度和胞間CO2濃度顯著下降，氣孔限制值顯著升高，葉綠素含量顯著降低，因此在0.4%的鹽濃度條件下引起的蘋果嫁接苗凈光合速率的降低應(yīng)該是由氣孔限制因素所致［28］，同時(shí)還與葉綠素含量減少有關(guān)。另外，鹽脅迫能夠?qū)е铝姿嵯〈际奖幔≒EP）羧化酶與核酮糖 1，5-二磷酸羧化酶（Rubisco）活性的降低，這2種酶與光合作用密切相關(guān)，其活性的下降能夠減少植物對(duì)CO2底物的吸收利用，進(jìn)而降低光合強(qiáng)度［29］。氣孔導(dǎo)度的下降應(yīng)該是因?yàn)辂}脅迫提高了葉片中Na+、Cl-含量，降低了K+含量，使氣孔因防止葉片過(guò)度失水而關(guān)閉，同時(shí)還可能與鹽脅迫信號(hào)刺激脫落酸在葉片中積累有關(guān)，因?yàn)槊撀渌峥烧T導(dǎo)氣孔的關(guān)閉［30］。適宜濃度的腐殖酸能夠提高鹽脅迫條件下蘋果嫁接苗葉片的光合性能，且400 mg/L時(shí)氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度顯著高于單純鹽脅迫處理T1，凈光合速率亦顯著高于T1，這說(shuō)明腐殖酸能夠在一定程度上降低CO2擴(kuò)散阻力，減少鹽脅迫引發(fā)的氣孔限制，從而減弱凈光合速率的下降水平。但當(dāng)腐殖酸濃度達(dá)到 800 mg/L 時(shí)光合能力不升反降，這說(shuō)明腐殖酸對(duì)蘋果葉片凈光合速率的促進(jìn)作用存在一定的閾值。腐殖酸能夠提高鹽脅迫條件下蘋果嫁接苗的水分利用效率，這表明腐殖酸能夠提高蘋果嫁接苗的耐鹽能力，增強(qiáng)抗逆性。

植物在逆境脅迫下會(huì)啟動(dòng)抗氧化防御系統(tǒng)，SOD、POD、CAT、APX是植物體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，其對(duì)活性氧的清除能力直接影響植物抗逆性的強(qiáng)弱［31］。本研究結(jié)果表明，鹽脅迫T1處理能夠顯著降低蘋果嫁接苗根系保護(hù)酶SOD、CAT、POD和APX的活性，表明鹽脅迫打破了蘋果嫁接苗機(jī)體內(nèi)活性氧產(chǎn)生與消除的動(dòng)態(tài)平衡，對(duì)膜系統(tǒng)產(chǎn)生損傷，不利于后期生長(zhǎng)，與周丹丹等在樸樹上的研究結(jié)論［32］一致，但與廖科等在鳳仙花上的結(jié)論［33］不一致，可見(jiàn)不同植株對(duì)鹽脅迫的響應(yīng)并不完全一致，這應(yīng)該與植物自身遺傳特性、耐鹽性、鹽濃度等諸多因素有關(guān)。腐殖酸能夠緩解蘋果嫁接苗生長(zhǎng)的不利環(huán)境，低濃度的腐殖酸能夠提高鹽脅迫下上述酶的活性，但高濃度的腐殖酸卻又能夠降低上述酶的活性，試驗(yàn)結(jié)果與馬太光等在西葫蘆上的研究結(jié)論［19］一致，這可能是因?yàn)榈蜐舛鹊母乘釋?duì)植物有刺激作用，提高了植物的抗逆性，促進(jìn)了保護(hù)酶活性的升高，而高濃度的腐殖酸對(duì)植物產(chǎn)生了脅迫作用，自由基含量增加幅度超出保護(hù)酶的清理范圍，機(jī)體受到損傷，酶的活性降低。MDA是膜脂過(guò)氧化的主要產(chǎn)物之一，其含量能夠反映細(xì)胞膜脂過(guò)氧化程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，單純鹽脅迫T1處理下蘋果嫁接苗MDA含量顯著高于對(duì)照，這應(yīng)該是因?yàn)辂}脅迫逆境誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧（O-2·和H2O2）超出了機(jī)體保護(hù)酶SOD、CAT、POD和APX的清除范圍，活性氧產(chǎn)生與消除的動(dòng)態(tài)平衡被打破，大量的活性氧引發(fā)膜脂過(guò)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生較多的MDA。而MDA又能夠通過(guò)與細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)、酶結(jié)合，使它們因發(fā)生交聯(lián)聚合而失去活性，最終導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的破壞［34］。另外，鹽脅迫使細(xì)胞中Na+濃度升高，Na+能夠置換細(xì)胞膜中的Ca2+，使細(xì)胞膜產(chǎn)生微小的漏洞，膜產(chǎn)生滲漏現(xiàn)象，進(jìn)一步破壞了細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性與穩(wěn)定性［35］。添加腐殖酸的4個(gè)處理（T2、T3、T4、T5）下的MDA含量均低于單純鹽脅迫T1處理，表明腐殖酸能夠在一定程度上緩解NaCl對(duì)細(xì)胞膜的毒害，這應(yīng)該與腐殖酸能提高蘋果嫁接苗植株機(jī)體保護(hù)酶活性有關(guān)，保護(hù)酶活性的升高減少了自由基在植株體內(nèi)的積累量，進(jìn)而減輕了細(xì)胞膜受損程度。

礦質(zhì)元素是植物生長(zhǎng)發(fā)育的物質(zhì)基礎(chǔ)，廣泛參與植株生命活動(dòng)的各個(gè)階段，但鹽脅迫能夠擾亂植株對(duì)礦質(zhì)元素吸收的動(dòng)態(tài)平衡，并使其遭受離子毒害和滲透脅迫［36-37］。K是植株生長(zhǎng)發(fā)育必不可少的大量元素，對(duì)細(xì)胞膨壓、滲透壓、離子平衡與光合性能有重要的調(diào)節(jié)作用。Ca元素對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、細(xì)胞完整性及植株生長(zhǎng)發(fā)育有重要作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，單純的鹽脅迫在顯著增加蘋果嫁接苗地下部和地上部Na+含量的同時(shí)顯著降低了K+、Ca2+含量，表明鹽脅迫影響了蘋果嫁接苗根系對(duì)K、Ca礦質(zhì)元素的吸收利用，這與楊少輝等的研究結(jié)論［38］一致，這應(yīng)該是因?yàn)辂}脅迫下Na+在細(xì)胞質(zhì)中大量積累使細(xì)胞質(zhì)膜透性增加，降低了細(xì)胞膜對(duì)離子的選擇性，一部分K+被Na+取代，致使K+含量降低；Na+因與Ca2+的離子半徑相近使其取代質(zhì)膜上一部分Ca2+，致使Ca2+含量降低［39］。另外，Na+能夠競(jìng)爭(zhēng)K、Ca等礦質(zhì)元素的吸收和活性位點(diǎn)，并降低K+、Ca2+的離子活度，進(jìn)一步抑制植株對(duì)礦質(zhì)元素的吸收［40］。添加有腐殖酸的T2、T3、T4、T5處理的地下部和地上部K+、Ca2+含量均高于鹽脅迫處理T1，說(shuō)明腐殖酸能夠在一定程度上緩解鹽脅迫對(duì)K+、Ca2+吸收的抑制作用，這可能是因?yàn)楦乘釗碛斜姸嗷钚曰鶊F(tuán)，具有較大的鹽基交換容量，可吸附土壤中大量的可溶性鹽，阻留較多的有害陽(yáng)離子，直接降低土壤鹽濃度［41］。另外，腐殖酸能夠有效改善土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，提高土壤保水保肥能力，增加植株根系活性，促進(jìn)植株對(duì)K、Ca等礦質(zhì)元素的吸收利用。K+含量/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量是衡量植物耐鹽性強(qiáng)弱的重要參考指標(biāo)［42-43］，本試驗(yàn)條件下，T3至T5處理下的地下部和地上部K+含量/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量均顯著高于T1，表明鹽脅迫條件下施用腐殖酸能夠提高蘋果植株K+含量/Na+含量、Ca2+含量/Na+含量，促進(jìn)根系對(duì)K+、Ca2+的吸收，提高植株對(duì)K+、Ca2+的選擇性運(yùn)輸能力，有利于葉片保持一定的光合能力和機(jī)體正常的生理代謝活動(dòng)，增強(qiáng)植株耐鹽性能。

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